马磊
- 作品数：18 被引量：60H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划哈尔滨市科技攻关计划项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 我国牛副流感病毒3型山东分离株的研究
- 近年来牛呼吸道疾病综合征严重威胁着我国养牛业的发展,造成很大的经济损失。牛副流感病毒3型是引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原之一。本实验室从我国山东省采集的牛鼻腔棉拭子中分离出4株牛副流感病毒3型,开展了病毒分离鉴定...
- 朱远茂薛飞蔡红董秀梅吕闯史鸿飞严昊马磊王姝王雪枝
- 关键词：全基因组
- 文献传递
- 牛呼吸道合胞体病毒实验感染豚鼠的研究
- 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)属于副粘病毒科肺病毒属,是引起犊牛呼吸道疾病的一个重要病原.1970在瑞士首次报道分离了该病毒,2008年首次证实了其在我国的存在.由于较难选到合适的实验感染用牛,为此进行了BRSV实验感染...
- 薛飞马磊朱远茂史鸿飞
- 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定
- 2015年
- 为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。
- 周跃辉朱远茂任建乐严昊王雪枝马磊史鸿飞薛飞
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体
- 我国牛传染性鼻气管炎研究现状及防控展望被引量：9
- 2016年
- 牛传染性鼻气管炎（IBR）,或称为传染性脓疱性外阴阴道炎（IPV）,是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的牛的一种急性接触性传染病,在临床上表现多种病型,如上呼吸道黏膜炎症、结膜炎、乳房炎、脓疱性外阴阴道炎或龟头包皮炎、幼牛脑膜脑炎和流产等,可以认为是由同一种病原引起多种病症的疫病。世界动物卫生组织将IBR列为B类动物疫病。IBR于1953年在美国加利福尼亚州首次被报道,其后引起了全球重视。
- 薛飞朱远茂马磊
- 关键词：外阴阴道炎牛疱疹病毒龟头包皮炎病型基因缺失疫苗病毒中和试验
- 牛病毒性腹泻病毒p80蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：3
- 2016年
- 为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞（MDBK）,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体pET30a,得到重组表达质粒pET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）表达菌,挑选单菌落并扩大培养,经IPTG诱导和SDS-PAGE以及Western-blot分析表明重组蛋白p80获得了表达,分子质量约为44ku。同时用浓缩的BVDV培养液免疫6-8周龄的Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。利用纯化的重组蛋白p80作为检测抗原的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆后对获得的杂交瘤细胞进行间接免疫荧光（IFA）和抗体亚类鉴定及腹水的制备和效价的测定。结果表明：重组p80蛋白具有很好的反应性;获得8株稳定分泌针对BVDVp80蛋白的杂交瘤细胞株,分别为3E3、2A4、8H9、3G3、2B3、3G2、2G2和4A11;8株杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备腹水,采用BVDV作为包被原的间接ELISA方法测得其效价为1×10^5-1×10^7;8株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性;8株单克隆抗体的抗体亚类均为IgM/κ。说明制备的重组p80蛋白单克隆抗体可试用于建立检测BVDV抗原的诊断方法。
- 杨立新朱远茂周跃辉任建乐马磊杨婷薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒免疫印迹试验单克隆抗体IGM间接免疫荧光试验
- 牛病毒性腹泻病毒LJ36/14的分离与鉴定被引量：5
- 2016年
- 为确定牛呼吸道传染病的病原,本研究对2014年从黑龙江省发生牛呼吸道传染病的某肉牛场采集的40份鼻拭子进行了病毒分离,结果分离到一株牛病毒性腹泻病毒(BVDV),命名为LJ36/14株。病毒鉴定结果表明,分离株在单层MDBK细胞中不产生细胞病变;利用BVDV p80蛋白的单克隆抗体(MAb)进行的间接免疫荧光试验表明接种LJ36/14株的细胞结果显示阳性。分离株的TCID_(50)为10^(5.9)/0.1 mL。对该分离株的5'端非编码区(5'UTR)和Npro基因进化树分析表明该分离株为国内首次分离并鉴定的基因亚型,即BVDV1v亚型。本研究为了解BVDV地理分布和流行情况及BVDV疫苗的制发奠定了基础。
- 朱远茂杨立新马磊任建乐杨婷薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒间接免疫荧光反转录-聚合酶链式反应
- 牛副流感的流行、危害及其防控被引量：9
- 2016年
- 牛副流感（Bovine parainfluenza）是由牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）引起的一种急性接触性传染病,曾被称为“船运热”（Shipping fever）。应激因素如运输、转群、气候变化等容易诱发牛副流感病的局部流行。BPIV3感染牛多表现出精神沉郁、
- 朱远茂马磊杨婷宋文凤薛飞
- 关键词：副流感病毒急性接触性传染病VIRUS应激因素气候变化
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3
- 2013年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11。用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/κ。特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断。所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础。
- 王姝朱远茂蔡红马磊史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2单克隆抗体IGM
- 牛腺病毒3型黑龙江分离株全基因组序列分析及其对实验动物致病性的研究
- 自2008年以来,我国多个省份发生了犊牛肺炎等新发疫情,疫情多发生于刚断奶并经长途运输的犊牛。为此,开展了牛呼吸道传染病病原的分离工作,结果在2009年从黑龙江省一头呈现呼吸道症状病牛的鼻腔棉拭子样品分离出一株牛腺病毒3...
- 薛飞朱远茂史鸿飞蔡红于作马磊王姝严昊王雪枝
- 关键词：全基因组致病机理
- 文献传递
- 牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- 利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rN及BRSV包被的ELISA测得的效价分别是1×105和1×106及1×102和1×103。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定D12与4B10均为IgG1/κ。特异性试验表明单抗2D12与4B10均不与牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒反应。所制备的D12与4B10可用于建立检测BRSV病原及抗体的诊断方法。
- 马磊朱远茂蔡红王姝史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
