温机智
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人IL1-Ra与TGF-β1共转染软骨细胞的基因表达被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨重组人IL1-Ra与TGF-β1基因转染软骨细胞的表达情况。方法:体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的IL1-Ra与TGF-β1质粒通过脂质体介导下共转染软骨细胞,通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果:荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达,荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞中转基因得到表达。结论:IL1-Ra与TGF-β1基因共转染软骨细胞可以获得表达,为基因治疗骨关节炎的研究提供基础。
- 张平蔡道章刘斌温机智曾春侯雪瑞张富程陆慧婷
- 关键词：IL-1RA转化生长因子-Β1基因转染软骨细胞
- 结直肠癌中GINS复合物的表达及其临床意义
- 结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一。虽然以手术和细胞毒药物联合生物靶向治疗的多学科治疗方案使结直肠癌的治疗效果取得了一定的提高，但结直肠癌的治疗仍然面临巨大挑战。相关研究资料表明近三十年来结直肠癌治疗效果的提高并不明显，最近...
- 温机智
- 关键词：结直肠肿瘤实时荧光定量PCR预后RNA干扰细胞增殖
- 文献传递
- 结直肠癌组织中GINS复合物的表达及其临床意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨GINS复合物在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法运用实时荧光定量PCR方法检测76例结直肠癌标本中GINS复合物4个基因PSF1、PS砣、PSF3和SLD5的mRNA表达情况．并分析其与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组织中PSF1、PSF2、PSF3和SLD5mRNA的相对表达量（0．001853±0．000651、0．007757±0．004260、0．000967±0．000481、0．003248±0．001721）均明显高于正常黏膜组织（0．000352±0．000169、0．002951±0．001216、0．000472±0．000271和0．001675±0．001156）（均P〈0．01）。PSF1mRNA表达与肿瘤大小（p〈0．01）有关；PSF2mRNA表达与患者年龄（P〈O．05）和淋巴结转移（P〈0．05）有关；PSF3mRNA表达与患者临床病理特征无关（P〉0．05）；SLD5mRNA表达与患者淋巴结转移（P〈0．01）有关。PSFl、PSF2和SLD5高表达组患者的5年生存率分别为57．1％、54．3％和54．3％，均明显低于低表达组患者的77．1％、80．O％和80．0％，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。Cox回归分析结果提示，PSFlmRNA表达是影响结直肠癌患者预后的独立因素之一（P〈0．05）。结论GINS复合物在结直肠癌组织中高表达，且与患者临床病理特征有密切关系．其中PSFlmRNA表达可作为预测结直肠癌患者预后的生物学指标。
- 卫洪波温机智魏波韩晓燕张实
- 关键词：结直肠肿瘤预后实时荧光定量PCR
- 抑癌基因RUNX3在膀胱癌T24细胞株中的表达以及对凋亡的影响被引量：4
- 2008年
- 目的明确RUNX3抑癌基因在正常膀胱组织和膀胱癌T24细胞株的甲基化状态,并将野生型RUNX3基因转染T24细胞,探讨RUNX3基因恢复表达后对膀胱癌细胞凋亡的影响。方法应用RT-PCR、甲基化特异性PCR和非甲基化PCR检测正常膀胱组织、膀胱癌T24细胞中RUNX3基因的表达以及基因启动子区域CpG岛的甲基化状态。构建真核载体的RUNX3-EGFP-pDest质粒,在LipefectamineTM 2000介导下转染膀胱癌T24细胞,转染实验设立3组:空白对照组、空质粒EGFP-pDest转染组以及RUNX3-EGFP-pDest转染组。Western blot检测RUNX3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果正常膀胱组织RT-PCR可检测出1248bp的RUNX3基因条带,而膀胱癌T24细胞中无法检测出RUNX3基因的表达。正常膀胱组织RUNX3基因甲基化PCR检测阴性,非甲基化PCR阳性;T24细胞反之。正常膀胱粘膜组和RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组Western blot检测,均表达RUNX3蛋白,而膀胱癌T24细胞未表达RUNX3蛋白。流式细胞仪检测,空白对照组的凋亡率为(3.1±0.46)%,而EGFP-pDest转染组和RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组的凋亡率分别为(10.1±1.62)%、(41.20±1.53)%,应用方差分析的LSD法和SNK法进行均数的多重两两比较,RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组与EGFP-pDest转染组、空白对照组凋亡率之间的差异均具有显著性,P<0.01。结论正常膀胱组织RUNX3基因正常表达,未发生启动子区域CpG岛甲基化,而膀胱癌T24细胞可能因RUNX3基因启动子区域CpG岛发生甲基化,致RUNX3基因无法表达。转染野生型RUNX3抑癌基因后促进了膀胱癌T24细胞的凋亡。
- 温机灵周祥福温机智周琦王林
- 关键词：膀胱肿瘤抑癌基因T24细胞甲基化
- PSF1在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 目的检测PSF1在结肠癌组织中的表达，探讨RNA干扰沉默PSF1表达对人结肠癌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法收集2004年5月至2006年12月间经病理确诊的40例结肠癌标本．采用Westerllblot检测标本中PSF1蛋白表达水平；应用脂质体法将靶向PSF1的短发夹RNA（shRNA）干扰质粒转染人结肠癌细胞株LOVO、HT．29和HCT116，Westernblot法检测PSF1蛋白表达变化．分别应用MTY法、软琼脂克隆形成实验及荧光定量PCR检测转染PSF1shRNA干扰质粒对结肠癌细胞增殖活性、锚定非依赖性生长能力及PSF2、PSF3和SLD5mRNA表达的影响。结果结肠癌组织中PSF1蛋白相对表达量为0．485±0．113，显著高于正常黏膜组织的0．056±0．014（P〈0．01）。转染PSF1sbRNA干扰质粒后，LOVO、HT-29和HCT116细胞中PSF1蛋白表达水平均显著下降（P〈0．05），细胞增殖能力显著降低，软琼脂克隆形成率明显下降。与阴性对照组及正常生长组细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。转染PSF1shRNA干扰质粒后．LOVO、HT-29和HCT116细胞中PSF2、PSF3和SLD5mRNA表达均明显下降（P〈0．05）。结论PSF1与结肠癌的发生发展具有一定关系。利用RNA干扰技术能有效抑制结肠癌细胞中PSF1表达。并抑制结肠癌细胞增殖。PSF1基因有望成为结肠癌靶向治疗的新靶点。
- 温机智韩晓燕魏波张实卫洪波
- 关键词：结肠肿瘤RNA干扰细胞增殖
- 结肠癌组织FOXF1基因甲基化检测及其临床意义被引量：5
- 2013年
- 目的研究结肠癌组织中叉头框F1基因(FOXF1)启动子区甲基化状态及其临床意义,探讨其在结肠癌发生发展中的作用。方法应用甲基化特异性PCR检测62例结肠癌标本中FOXF1基因启动子区甲基化状态,并分析其与结肠癌患者临床病理特征的关系。采用实时荧光定量PCR检测结肠癌标本中FOXF1基因mRNA表达水平,并分析FOXF1基因甲基化与其mRNA表达间的关系。结果结肠癌组织中FOXF1基因启动子区甲基化率为64.5%(40/62),显著高于正常黏膜组织的4.8%(3/62),差异具有统计学意义(P<0.01),低分化组中FOXF1甲基化率为82.6%(19/23),高于高中分化组的53.8%(21/39),差异具有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织中FOXF1基因mRNA相对表达量为1.453±0.385,显著低于正常黏膜组织的3.648±1.228,差异具有统计学意义(P<0.01)。结肠癌组织中FOXF1基因甲基化状态与FOXF1基因mRNA表达呈负相关(rs=-0.438,P<0.01)。结论 FOXF1基因启动子异常甲基化及其mRNA表达下调是结肠癌中的频发分子事件;也是导致FOXF1基因mRNA表达下调的机制之一;FOXF1基因在不同分化程度的结肠癌患者中甲基化率不同,提示FOXF1基因甲基化状态有可能成为评价结肠癌恶性程度的辅助指标,FOXF1基因也可能成为结肠癌靶向治疗的潜在靶点。
- 温机智韩晓燕卫洪波陆慧琼张富程
- 关键词：结肠肿瘤甲基化实时荧光定量聚合酶链反应
- RUNX3抑癌基因真核表达载体的构建以及在膀胱癌T24细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 【目的】构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RUNX3,并在膀胱癌T24细胞株中表达。【方法】RT-PCR从人正常膀胱组织中获取RUNX3基因并测序,将RUNX3基因克隆进pIRES2-EGFP载体,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RUNX3,并进行EcoRⅠ和XhoⅠ酶切验证。脂质体介导下转染人膀胱癌T24细胞,荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。【结果】成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-RUNX3,用脂质体转染人膀胱癌T24细胞后,在荧光显微镜下观察到带绿色荧光的人膀胱癌T24细胞。【结论】成功构建RUNX3基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-RUNX3并在膀胱癌T24细胞中表达,为进一步研究RUNX3与膀胱癌的关系奠定基础。
- 温机灵周祥福温机智
- 关键词：RUNX3基因T24细胞
