洪海霞
- 作品数：16 被引量：68H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪瘟病毒石门株动物传代脾毒与组织培养细胞毒E2基因序列的分析
- 2005年
- 根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒主要囊膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAstar软件比较分析了E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株核苷酸序列的同源性为99.4%,氨基酸序列的同源性为99.0%;细胞毒与标准石门株核苷酸序列的同源性为98.3%,氨基酸序列的同源性为96.7%。由此说明,猪瘟病毒经猪体多次传代和组织培养致细胞病变后,均能保持遗传的稳定性。
- 魏中锋张彦明孙裴张永国洪海霞倪斌郭抗抗
- 关键词：猪瘟病毒E2基因序列同源性
- 猪瘟病毒Shimen株p80基因的克隆及其真核表达质粒的构建被引量：3
- 2005年
- 根据已发表的猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)Alfort株和Brescia株的全基因组序列,设计2对引物P1/P2和B1/B2,在B1和B2的5'端分别加上XhoI和ApaI位点,以CSFVShimen株细胞毒为材料一步法提取总RNA,并以此为模板采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR),成功地扩增到约2.0kb的片段,将此PCR产物回收后与pMD18-T连接、转化,获得重组质粒,经PCR扩增,限制性酶切(BamhI/HindШ)和序列部分测定鉴定为阳性重组质粒P80-T。将P80-T分别经XhoI和ApaI酶切消化、回收后,与经XhoI/ApaI酶解的真核表达载体PEGPF-C1连接、转化,获得重组质粒,经PCR,XhoI和ApaI限制性酶切和序列测定鉴定为真核表达质粒P80-P,目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。为下一步在哺乳动物细胞中表达猪瘟病毒p80蛋白奠定了基础。
- 孙裴张彦明魏中锋倪斌洪海霞张永国郭抗抗王晶钰
- 关键词：真核表达质粒细胞毒套式PCR猪瘟病毒CSFV
- 猪脐静脉血管内皮细胞的分离培养及猪瘟病毒对其的致病变作用
- 猪瘟病毒(CSFV)只能专一性对猪致病,但可以使牛、羊、兔等多种动物发生无症状性感染.CSFV可在多种动物的组织细胞中复制,但一般不产生致细胞病变效应(CPE).由于猪瘟病毒对中胚层组织,特别是造血和血管组织具有特殊的亲...
- 洪海霞
- 关键词：脐静脉血管内皮细胞猪瘟病毒猪血管内皮细胞体外培养方法血管组织中胚层
- 文献传递
- 病毒逃避补体途径被引量：1
- 2004年
- 1补体激活的途径
补体是一种酶促连锁反应系统,当受到某种激活剂作用后,补体各成分依次被活化,出现一连串逐级放大的连锁反应,最终导致入侵微生物和感染细胞的瓦解.补体系统有三条激活途径:经典激活途径(Classical pathway,CP),凝集素活化途径(Lectin pathway,LP)和旁路激活途径.( alternative pathway, AP) .
- 洪海霞张彦明
- 关键词：抗原抗体
- 猪水泡病病毒非结构蛋白编码区的克隆与序列分析
- 2004年
- 以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构蛋白编码区核苷酸长 4 0 0 2nt ,氨基酸长 1334aa ;与J1’73、H/ 3’76、SVDV(Seechrn等测株 )、NET/ 1/ 92的核苷酸同源性分别为 98.6 %、98.3%、98.3%、91.2 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 98.9%、99.1%、99.2 %和 97.2 %。
- 冶贵生刘湘涛张彦明马玉花邓明俊洪海霞韩雪清
- 关键词：猪水泡病病毒同源性
- 猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达
- 2004年
- 利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ,并测序。测序结果表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确 ,表达载体构建成功。将含有阳性质粒的BL2 1菌液经IPTG诱导后进行SDS_PAGE分析 ,出现预期的目的蛋白条带 ,此目的蛋白经Westernblot检测确定其有免疫活性。
- 冶贵生刘湘涛张彦明马玉花张淼涛洪海霞韩雪清
- 关键词：WESTERNBLOT
- 猪脐静脉血管内皮细胞永生化的初步研究被引量：5
- 2007年
- 为了建立稳定的血管内皮细胞系,进而为研究猪瘟病毒致病机理提供理想的细胞模型,将脂质体转染的pCIneo-hTERT质粒导入原代猪脐静脉血管内皮细胞中,经G418抗性筛选,挑取阳性克隆并扩大培养。对转染后的细胞进行形态观察,研究其增殖及生长特征,并对其端粒酶活性进行了鉴定。结果表明,转染细胞单层贴壁生长,有接触抑制性,呈铺路石状;F-ⅧAg和CD34免疫荧光鉴定阳性,具有转染前细胞特征;转染后细胞培养代数增加,传至第10代和15代转染后细胞端粒酶活性检测为阳性。说明hTERT转染可以延长猪血管内皮细胞的寿命。
- 马泉荔洪海霞张彦明徐浩杨蒙苏正元
- 关键词：端粒酶催化亚基脐静脉血管内皮细胞
- 多次传代和致细胞病变猪瘟病毒石门株E2基因序列分析被引量：4
- 2006年
- 根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(n PCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒的主要外膜糖蛋白E 2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNA star软件比较分析了E 2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株的核苷酸序列同源性为99.4%,氨基酸序列同源性为99.0%,细胞毒标准石门株的核苷酸序列同源性为98.3%,氨基酸同源性96.7%。由此说明猪瘟病毒经猪多次传代和致细胞病变后均保持遗传的稳定性。
- 魏中锋张彦明孙裴张永国洪海霞倪斌郭抗抗王晶钰
- 关键词：猪瘟病毒E2基因
- 猪水泡病病毒5’和3’非编码区一级和二级结构分析被引量：1
- 2004年
- 应用RT-PCR技术,用特异性引物扩增出SVDV HK’70 5’和3’非编码区,并将目的片段连接于pMD18-T载体,转化JM109感受态细胞。重组质粒经双酶切、PCR鉴定后测序。核苷酸序列比较结果表明,SVDV HK’70 5’非编码区与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.6％、1.9％;SVDV HK’70 3-NCR与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.0％、1.0％。应用计算机软件对3个SVDV毒株非编码区的二级结构进行预测,结果表明,SVDV HK’70 5’非编码IX-"级结构中存在13个结构域,SVDV J1’73 5’非编码区二级结构中存在9个结构域,SVDV H/3’76 5’非编码区二级结构中存在10个结构域;SVDV HK’70 3’非编码区二级结构中存在3个结构域,且与其他的两个毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76基本相同。
- 冶贵生张彦明刘湘涛洪海霞张永国张淼涛胡建和
- 关键词：同源性
- 永生化猪脐静脉血管内皮细胞系的建立及其生物学特征分析
- 永生化细胞系具有许多原代细胞所没有的优点，如培养的均一性、稳定性和操作简便性等。原代培养细胞的分离培养费时费力，花费高，且传代次数有限，细胞生理功能容易变异，造成不同试验结果间因细胞培养代数而难以比较，使许多研究工作受到...
- 洪海霞
- 关键词：细胞永生化
- 文献传递
