沈雪飞
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6全长cDNA克隆及序列分析
- 2013年
- 本试验以鲤鱼外周血白细胞肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)EST序列为基础,经地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从重组噬菌体中经过两轮筛选获得阳性克隆。序列分析结果显示,该序列包含有5′-非编码区(5′-UTR)25bp;3′-非编码区(3′-UTR)535bp,存在2个mRNA不稳定基序ATTTA;开放阅读框ORF长1632bp,编码543个氨基酸。预测蛋白质等电点为5.88,分子质量大小为61.773ku。序列同源性比对结果表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼TRAF6a基因同源性达99%。蛋白质序列分析结果发现,其具有TRAF家族的典型序列特征。
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- 关键词：鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6克隆
- 嗜水气单胞菌鞭毛蛋白的纯化及重组蛋白FlaB多抗的制备
- 嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属于弧菌科、气单胞菌属，广泛存在于水体环境中，能够感染多种水生和陆生动物，是一种重要的人-兽-鱼共患的细菌病原菌。嗜水气单胞菌可以使淡水鱼类发生疖病和败血症，给水产...
- 沈雪飞
- 关键词：嗜水气单胞菌鞭毛毒力因子免疫原性
- 文献传递
- 嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB的克隆、表达及其免疫原性分析被引量：1
- 2015年
- 目的克隆、表达及纯化嗜水气单胞菌鞭毛FlaB蛋白,比较了它与天然鞭毛蛋白的抗原性,为以后鱼类弧菌病的防治及其疫苗的制备奠定了基础。方法利用PCR扩增出嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB,经确定后将该基因克隆到原核表达载体pET-30a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达,并用电洗脱法对表达的蛋白进行纯化,用纯化的重组蛋白免疫家兔制备抗血清,并进行Western-blot分析。结果嗜水气单胞菌鞭毛蛋白flaB基因全长912bp,编码303个氨基酸,预测分子量为32kDa,Western-blot结果表明兔抗FlaB血清不仅能与重组鞭毛蛋白发生反应,而且能与天然鞭毛蛋白发生反应。结论鞭毛蛋白FlaB可能是嗜水气单胞菌的重要保护抗原之一,为下一步疫苗的制备奠定了基础。
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- 关键词：嗜水气单胞菌鞭毛蛋白
- 鲤鱼外周血白细胞TLR5M全长cDNA克隆及序列分析被引量：1
- 2013年
- 本试验以鲤鱼TLR5M的EST序列为基础进行5'-RACE试验,获得了其cDNA的全长序列。结果表明,该序列共3182 bp,包含38 bp的5'端非编码区,486 bp的3'端非编码区,1个2658 bp的开放阅读框(ORF),共编码885个氨基酸。序列同源性比对结果表明,该序列与麦瑞加拉鲮鱼TLR5基因同源性高达84.46%。
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- 关键词：鲤鱼克隆
- 维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达被引量：7
- 2014年
- 本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化。SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌成功表达,约在38ku处可见清晰的表达产物,诱导产物大小与理论值相符。经Western blotting检测,结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体和His-tag抗体发生免疫反应。因此,本试验成功表达了维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,为进一步研究其生物学功能及免疫佐剂作用奠定了基础。
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- 关键词：维氏气单胞菌鞭毛蛋白克隆
