沈良才
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：河北科技师范学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪Gli1基因的克隆、表达谱分析及脂肪组织特异性表达载体的构建被引量：5
- 2012年
- Hedgehog(Hh)信号通路对动物脂肪沉积具有抑制作用,并且从果蝇到脊椎动物具有高度保守性,但在家猪研究中鲜见报道。文章选择家猪Hh通路的转录激活因子Gli1进行研究,通过RT-PCR结合RACE技术,首次获得家猪Gli1基因cDNA全长,利用Real-time PCR对家猪Gli1基因在不同组织中的表达丰度进行了分析,并构建了真核表达载体和脂肪组织特异性表达载体。结果表明:猪Gli1基因cDNA全长3 576 bp,基因组序列全长10 715 bp,共12个外显子,编码1 106个氨基酸。生物信息学分析表明,猪Gli1为不稳定亲水性蛋白,不具有跨膜结构域和信号肽序列,但具有锌指结构与核定位序列。对7个物种的Gli1蛋白序列和基因组序列相似性进行分析,发现各物种间序列相似性均在80%以上,说明Gli1在物种间高度保守。组织表达谱分析表明,Gli1仅在成体猪舌组织中表达;在家猪脂肪组织发育进程中,Gli1仅在出生1周的猪脂肪组织中检测到微弱表达,但1月龄及3月龄猪脂肪组织中均检测不到表达,由此推断猪Gli1表达与脂肪组织发育呈负相关。最后,将猪Gli1编码区克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP,体外转染实验证明该载体能够正确表达猪Gli1,另外还构建了脂肪组织特异性表达载体,为构建脂肪组织特异性转基因动物奠定基础。
- 林佳丽沈良才潘登科张瑾
- 关键词：脂肪沉积GLI1基因克隆
- 家猪脂肪组织特异性启动子元件的克隆
- 基因修饰猪技术进展迅速，但缺乏具有育种价值的功能基因和调控元件，成为限制因素。尤其是组织特异性调控元件，在家猪的研究中鲜见报道。本研究克隆了家猪脂肪组织特异性启动子元件，为下一步研究其功能打下基础。 本研究首先利用在线...
- 沈良才
- 关键词：家猪启动子脂肪组织特异性基因克隆生理功能
- 文献传递
- 脂蛋白脂酶缺失症基因治疗载体的构建及功能验证
- 2013年
- 脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是甘油三酯分解的限速酶,LPL基因缺失会引起高血脂症,虽然发病率低,但到目前为止,尚无有效治疗手段。该文构建了用于纠正LPL缺失基因型的逆转录病毒载体MSCV-hLPL,结果表明,MSCV-hLPL可以高效侵染体外培养的细胞系C2C12、HEK293和3T3-L1,并且都可以产生具有活性的脂蛋白脂酶。利用MSCV-hLPL侵染后的C2C12、HEK293和3T3-L1,分别注射到裸鼠皮下组织,发现C2C12和3T3-L1可以分泌脂蛋白脂酶到临近的肌肉组织中,显著提高LPL活性。以上工作证明,基因治疗载体可以纠正脂蛋白脂酶缺失的基因型,而脂肪细胞和肌肉细胞移植入裸鼠体内后,均可以作为生物反应器产生具有活性的LPL。这是该领域中的一次开拓性尝试,为脂蛋白脂酶缺失症治疗方法的开发打下了坚实的基础。
- 王恺龙郑李彬张帆沈良才Libby Andrew李旭丽张瑾
- 关键词：脂蛋白脂酶诱导多能干细胞基因治疗
