林二培
- 作品数：91 被引量：170H指数：7
- 供职机构：浙江农林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省重大科技专项基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 杉木叶片原生质体分离及RNA提取体系的建立被引量：8
- 2018年
- 【目的】以杉木组培苗幼嫩叶片为材料,分析不同因素对杉木原生质体分离的影响,建立杉木叶片原生质体分离体系,以期为杉木基因功能验证提供有效的技术平台;比较不同RNA提取方法,筛选获得杉木原生质体总RNA提取的有效方法,为今后利用杉木原生质体开展分子生物学研究提供技术支持,也可为其他林木原生质体的总RNA提取研究提供参考。【方法】选取杉木组培苗最上端未分轮的幼嫩叶片为材料,通过分析5种不同酶组合、真空处理时间(0、5、10、15、20 min)、渗透压(0.3、0.4、0.5、0.6 mol·L-1甘露醇)、BSA浓度(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%)及酶解时间(1、2、3、4、5 h)5个条件,进行杉木叶片原生质体的分离。采用改良Trizol法、改良Trizol+10μg糖原法、CTAB-Li Cl法、CTAB-Li Cl+10μg糖原法、改良CTAB-异丙醇法、改良CTAB-异丙醇+10μg糖原法、天根RNA提取试剂盒法共7种方法提取杉木原生质体RNA,通过杉木内参基因和2个特异基因进行RNA质量验证,比较不同方法的提取效果。【结果】在1.5%纤维素酶R-10、1%离析酶R-10、0.2%果胶酶Y-23、0.5 mol·L-1甘露醇以及0.3%BSA的混合酶液中,真空处理10 min,酶解2 h,可分离出高活力的纯净杉木原生质体,其产量可达到7.27×106个·g-1,活力可达到94%。7种方法皆能提取出杉木叶片原生质体的总RNA,但不同方法间存在明显差异,其中改良Trizol法、改良Trizol+10μg糖原法、改良CTAB-Li Cl法、改良CTAB-Li Cl+10μg糖原法提取的RNA有不同程度的降解现象,其余方法所提取的RNA完整性较好,且OD260/280和OD260/230值均在1.8~2.0范围内;在RNA得率方面,改良CTAB-异丙醇+10μg糖原法可高效提取杉木原生质体RNA,106个细胞RNA产量平均可达到6.89μg,分别是改良CTAB-异丙醇法和天根RNA提取试剂盒法的1.73倍和1.58倍;综合考虑,改良CTAB-异丙醇+10μg糖原法提取杉木原生质体RNA的效果最好。【结论】以杉木�
- 唐佳妮林二培黄华宏童再康楼雄珍
- 关键词：杉木原生质体RNACTAB法糖原
- 光皮桦成花相关BlLFY基因的克隆和表达分析
- 光皮桦(Betula luminifera H.Wink.)是广泛分布于我国南方珍贵用材树种,材质优良,具有重要的经济价值.同时,光皮桦童期较短,是林木遗传育种研究的良好材料,研究其开花相关基因的功能及分子机制对于了解林...
- 牛明月林二培黄华宏童再康
- 关键词：光皮桦成花克隆
- 光皮桦茎叶cDNA文库构建及部分EST序列SSR分析
- 以光皮桦茎叶组织为材料,构建了cDNA文库.初级文库滴度为1.5x106pfu·mL-1,重组率达97.3％,插入片段大小在0.5-3.0kb之间,平均长度约为1.3kb,表明所构建的文库质量较高,可用于后续基...
- 张敏黄华宏林二培周厚君王亚辉童再康
- 关键词：光皮桦CDNA文库SSR分析
- 一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法
- 本发明公开了一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法，包括以闽楠未成熟种子为材料，剥取未成熟种子幼胚为外植体，进行体细胞胚诱导、增殖培养产生次生胚，或者进行胚性愈伤的诱导、分化不定芽等技术环节。本发明首次建立了闽楠未成熟合子胚的...
- 童再康楼雄珍黄华宏张俊红林二培
- 光皮桦AP2/ERF基因家族鉴定与表达分析被引量：2
- 2022年
- 【目的】深入研究AP2/ERF基因家族在光皮桦Betula luminifera生长发育及环境胁迫响应中的生物学功能。【方法】利用光皮桦基因组数据,通过生物信息学方法开展AP2/ERF基因家族鉴定、基因特征、系统进化、基因结构、保守基序、顺式作用元件、蛋白互作和表达分析。【结果】在光皮桦基因组中共鉴定到77个AP2/ERF基因,其编码的蛋白理化性质存在差异,大多数蛋白(60个)的理论等电点小于7.0。系统进化分析显示:这77个AP2/ERF转录因子属于5个亚家族,其中ERF亚家族最大,包含34个成员。光皮桦AP2/ERF各亚家族间的基因结构存在较大差异,其中AP2亚家族成员均具有6~9个内含子,而DREB亚家族基因则没有内含子;但AP2/ERF各亚家族内的不同成员具有相似的保守基序类型和分布。同时,AP2/ERF基因启动子上都存在大量与激素、调节、胁迫响应及生长发育相关的顺式作用元件。此外,互作网络分析预测不同的光皮桦AP2/ERF亚家族蛋白间存在广泛的互作关系。进一步的表达分析显示:绝大多数光皮桦AP2/ERF基因(71个)的表达存在较强组织特异性,且在高温胁迫下,多数ERF或DREB基因的表达发生显著变化,表明ERF和DREB基因在高温胁迫应答中可能发挥着重要作用。【结论】通过生物信息学分析获得光皮桦77个AP2/ERF基因,分属于5个亚家族。不同亚家族基因具有相似的基因结构、保守基序等特征。基因启动子区含激素、胁迫响应等相关的作用元件。基因表达具有较强的组织特异性,且多数ERF或DREB基因对高温胁迫有明显响应。图6表1参39。
- 黄奕孜钱旺邱姗王文新黄华宏林二培
- 关键词：光皮桦高温胁迫
- 巨桉组培苗的培育方法
- 本发明公开了一种巨桉组培苗的培育方法，包括以巨桉组培苗叶片为外植体，对巨桉叶片进行愈伤组织诱导，对叶片愈伤组织进行不定芽分化培养以及进行生根培养的操作步骤，其特征在于在红光和蓝光照射条件下对巨桉叶片进行愈伤组织诱导；在红...
- 黄华宏林二培程龙军童再康李许可
- 文献传递
- 铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性研究被引量：35
- 2011年
- 目的了解铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性,为种质资源的保护与新品种的选育提供基础。方法利用RAPD分子标记对浙江义乌、天台、建德、武义,云南麻栗坡、勐海的14个居群的铁皮石斛和1个居群的紫皮石斛进行遗传多样性分析。结果从225个RAPD引物中筛选出15个引物,对105个铁皮石斛和3个紫皮石斛样本进行PCR扩增,共扩增出138条带,其中133条为多态性条带,多态性条带比率(PPB)为96.38%;14个铁皮石斛居群的多态位点(PPL)在10.79%～76.26%,平均为45.32%。结论全国主产区人工栽培的铁皮石斛遗传多样性丰富,铁皮石斛种质的亲缘关系远近与其地理种源具有显著的相关性,与栽培地点无关。
- 苑鹤林二培朱波俞巧仙斯金平
- 关键词：铁皮石斛RAPDPCR扩增
- 光皮桦BlBLH1基因的克隆、表达及互作蛋白筛选
- 2022年
- 【目的】BLH基因家族是广泛存在于植物中的转录因子,其与KNOX等转录因子的互作被认为在植物的次生壁发育中起重要调控作用。本研究拟克隆光皮桦BlBLH1基因,分析其表达模式,并筛选能与其互作的蛋白。【方法】利用Blast等软件在光皮桦基因组序列中鉴定获得BlBLH1序列,克隆验证后对其进行多序列比对、系统进化等生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR分析BlBLH1在光皮桦不同组织、器官和应拉木形成中的表达模式;通过酵母双杂交技术筛选BlBLH1互作的蛋白,并采用双分子荧光互补实验(BiFC)进一步验证其与部分蛋白在拟南芥细胞内的互作。【结果】BlBLH1基因序列全长为2128 bp,开放阅读框(ORF)为1830 bp,编码609个氨基酸,具有SKY、BEL和HD 3个保守结构域。系统进化分析显示,BlBLH1与拟南芥BLH1有最近的同源关系。表达分析显示BlBLH1在雄花序中的表达量最高;在木质化茎段中的表达量次之;在应拉木诱导过程中,BlBLH1在应拉木中的表达量均显著高于对照。通过酵母双杂交筛选获得结构蛋白、酶、转录因子等47个与BlBLH1互作较强的蛋白;BiFC验证结果表明,BlBLH1与BlKNOX4、BlKNOX9在拟南芥原生质体内存在互作关系。而且,三者在茎段和应拉木的表达趋势基本一致。【结论】可从光皮桦中分离获得BlBLH1基因,生物信息学、表达和蛋白互作分析的结果表明BlBLH1参与光皮桦木材形成过程,且存在与KNOX蛋白的互作关系。
- 庄和必俞子承林二培黄华宏
- 关键词：次生壁酵母双杂交
- 3种杉木种子活力测定方法比较被引量：6
- 2020年
- 【目的】建立一种快速简便的杉木Cunninghamia laneolata种子活力测定方法。【方法】以3个不同品种杉木种子为材料,以标准发芽法为参照,比较四氮唑法(TTC)和紫外分光光度计法(UVS)测定种子活力时的准确性和便捷性。【结果】标准发芽法测定种子活力最为准确,但耗费时间长,难以开展大批量测定;TTC法测定杉木种子活力准确度不稳定,且操作繁琐;UVS法的测定值与真实萌发率比较接近,有较高可信度,且操作简便。【结论】UVS法可作为快速测定杉木种子活力的优选方法。
- 徐振飞过晟鹏钱旺包苗清林二培黄华宏童再康
- 关键词：森林培育学杉木种子活力
- 楠木等5种珍贵树种种质资源保育与创新利用
- 童再康黄华宏吴小林张俊红林二培程龙军汪燕明楼雄珍葛永金罗修宝卢泳全张东北周生财
- 浙江楠、闽楠、桢楠和紫楠是中国中亚热带地区珍稀名贵、特有的树种，属国家二级保护，金丝楠木的原植物种；光皮桦属亚热带地区珍贵、速生、渐危树种。该项目在省重大育种专项、国家自然科学基金等项目资助下，历时16年，相继突破了“致...
- 关键词：
- 关键词：良种选育栽培技术
