李青梅
- 作品数：133 被引量：324H指数：10
- 供职机构：河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- K88和K99双价基因工程菌C株与E株表达效果的比较被引量：3
- 1998年
- 应用ＬＢ培养基３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ振荡培养１７小时，室温４０００ｒ／ｍｉｎ，离心３０分钟，收集沉淀菌体，用ＰＢＳ离心洗涤一次，沉淀物重悬于适量的ＰＢＳ中。三等分菌体悬浮液分别用超声波、冻融、热休克等方法处理后，室温８０００ｒ／ｍｉｎ离心３０分钟，取上清液加入饱和硫酸铵４℃过夜，沉淀蛋白经透析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０过柱纯化。应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、凝胶扫描测定Ｋ８８、Ｋ９９蛋白的分子量及浓度，双向免疫扩散、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ试验测定其抗原性。结果表明，热休克法分离纤毛抗原是最好的方法，从Ｃ株Ｅ株分离得到的纤毛抗原，在分子量大小及对单抗亲和反应能力方面没有明显的差异。
- 李学伍陈辉杨艳艳闫玉河郭成留邓瑞广郭军庆李青梅张改平
- 关键词：K88K99基因工程
- 抗庆大霉素单克隆抗体的制备及其初步应用被引量：10
- 2010年
- 【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定,;应用阻断ELISA试验原理组装GM-Kit,并对鲜奶中添加的GM标准样品进行测定。【结果】SDS-PAGE电泳鉴定表明BSA-GM人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-3;其中2号小鼠血清GM抑制效价较高且IC50最低,达17.28 ng.mL-1,融合后筛选出5E2-D7、1A3-A9、5E2-A12和2A6-B5共6株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1﹕1600、1﹕800、1﹕800和1﹕800,腹水效价分别为1﹕2.05×107、1﹕5.12×106、1﹕2.56×106和1﹕2.56×106,5E2-D7株对GM的IC50为0.30 ng.mL-1,与链霉素、卡那霉素等其他氨基糖苷类抗生素无交叉反应性;检测鲜牛奶样的平均添加回收率分别为96.0%,平均变异系数均低于15%。【结论】本试验获得了高效价、敏感、特异的抗GM mAb,为GM残留检测奠定了坚实的基础。
- 职爱民李青梅刘庆堂刘宣兵杨继飞杨苏珍柴书军杨艳艳邓瑞广张改平
- 关键词：庆大霉素单克隆抗体杂交瘤
- 快速检测大豆凝集素的胶体金免疫层析试纸及制备方法
- 本发明涉及一种快速检测大豆凝集素（SBA）的胶体金免疫层析试纸及制备方法，该试纸基于双抗体夹心的原理检测SBA，试纸含有支撑层、吸附层、保护层，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。结合垫吸附有SBA的特...
- 胡骁飞邓瑞广王耀杨继飞魏凤仙李青梅
- 文献传递
- 动物疫病免疫试纸快速检测技术概述被引量：12
- 2009年
- 概述了免疫试纸检测技术的原理,并分别从抗原和抗体2个方面简述免疫试纸检测技术的应用及在此方面取得的成就。
- 张改平郭军庆李青梅邓瑞广杨艳艳
- 关键词：动物疫病抗原抗体
- 猪伪狂犬病病毒gE蛋白的真核表达及其活性鉴定
- 2023年
- 为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE重组蛋白并评估其抗原活性,将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签,构建真核表达质粒pCMV-gE;将重组质粒转染HEK293F细胞,Dot blot鉴定转染细胞中gE重组蛋白的分泌表达;利用镍亲和层析和凝胶过滤层析从转染细胞培养上清中纯化gE表达蛋白;以SDS-PAGE和Western blot鉴定gE重组蛋白,利用PRV阳性血清以ELISA分析gE重组蛋白的抗原活性,通过去糖基化酶PNGase F鉴定其糖基化修饰及其对抗原活性的影响。Dot blot结果显示,gE重组蛋白通过自身信号肽实现在细胞培养上清的分泌表达,其表达量在转染96 h达到峰值。SDS-PAGE和Western blot结果显示,从细胞培养上清中纯化获得gE重组蛋白纯度约为90%,经去糖基化酶PNGase F处理的gE重组蛋白分子质量显著降低。间接ELISA结果显示,gE重组蛋白检测PRV阳性血清的抗体效价为1∶12800;PRV阳性血清对gE蛋白的检出限为31.25 ng/mL,其抗原活性是原核表达的4倍。对临床血清的检测结果显示,基于gE重组蛋白的ELISA与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率为96.5%。综上,在真核细胞中分泌表达了具有高表达量、高纯度、高活性和糖基化修饰的gE重组蛋白,在PRV感染鉴别检测中具有良好的应用潜力。
- 王清龙王瑞宁王瑞宁李青梅李青梅张真真杨苏珍杨苏珍郭军庆
- 关键词：猪伪狂犬病病毒分泌表达抗原活性
- 旋毛虫病快速诊断试纸条
- 本实用新型涉及一种旋毛虫病诊断试剂显示器具,特别是涉及一种旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II),含有支撑层、反应试剂载体吸附层,支撑层为不吸水薄片条,反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上,从样品端依次为纤维层,旋毛虫金标抗...
- 张改平李学伍杨艳艳邓瑞广肖治军康晓笛郭军庆李青梅李灵霞王爱萍杨继飞
- 文献传递
- 鸡传染性法氏囊病单抗快速诊断试剂盒的研制及初步应用被引量：12
- 2000年
- 以感染传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)的鸡法氏囊组织制备免疫抗原 ,免疫 BALB/c系小鼠 ,取其脾细胞与 NS0浆细胞进行细胞融合 ;以 AC-ELISA筛选阳性细胞克隆 ,经 3次有限稀释克隆化及鉴定 ,获得 2株识别 IBDV不同抗原决定簇的高亲和力单克隆抗体株。以该 2株单克隆抗体制备快速诊断试剂 ,组装了鸡传染性法氏囊病快速诊断试剂盒。该试剂盒由若干 4 0孔酶标板 ,1号酶标液 ( HRP标记 IBDV单抗 )、2号洗涤液、3号显色液 ( TMD显色底物 )、4号显色液 (供氢体 )等反应液 ,0 .0 1 mol/L PBS( p H7.2 )阴性对照、IBDV阳性对照 (提取的 IBDV蛋白 )组成 ,并对试剂盒特异性、敏感性、重复性及稳定性等进行了鉴定。应用该快速诊断试剂盒对来源于不同地区的临床诊断疑似 IBD的法氏囊病料各 2 0份进行了检测 ,并与琼扩试验、常规ELISA检测结果作了比较 ,结果表明 ,该快速诊断试剂盒的检测结果与常规 ELISA的检测结果相似 ,操作程序简便 ,可在 1 0～ 1 5min内完成 。
- 郭军庆张改平杨艳艳李青梅王爱萍阎玉河李学伍邓瑞广
- 关键词：鸡传染性法氏囊病单克隆抗体快速诊断试剂盒
- 猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7
- 2014年
- 根据PCV2 ORF1设计1对特异性引物,建立了SYBR GreenⅠReal-time PCR检测方法。该方法灵敏度可达10-100拷贝/μL,比常规PCR检测方法灵敏度高10倍,而与猪繁殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）以及猪细小病毒（PPV）没有交叉反应,利用该方法从50份临床病料中检测出43份阳性PCV2病毒,阳性检出率为94%。与常规PCR比较结果显示,该方法具有较高的灵敏度和特异性,能够快速检测和监控PCV2的感染流行。
- 李鹏郭军庆金前跃李青梅李清州万博王选年王川庆张改平
- 关键词：猪圆环病毒2型SYBR荧光定量PCR
- 猪流行性乙型脑炎病毒快速检测试纸条
- 本实用新型公开一种可快速检测猪流行性乙型脑炎病毒的试纸条，包括不吸水的支撑层、附着在支撑层上的吸附层，吸附层由样品吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水层依次拼接而成，纤维素膜层上标记有羊抗或兔抗小鼠IgG的对照印...
- 滕蔓罗俊张改平杨艳艳周玲邢广旭赵东杨继飞柴书军樊剑鸣郭成留李学伍孙亚宁李青梅梁跃
- 文献传递
- 植酸酶单克隆抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2012年
- 通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng/mL,亲和常数为6.70×109L/mol,与市售常规植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶的IC50分别达到130.43,126.16,125.33 ng/mL,交叉反应率分别为76.72%,79.32%和79.84%。与高温失活(100℃水煮5 min)的麸皮植酸酶、普通植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶IC50分别为4 205.45,4 015.86,3 593.19,3 610.40ng/mL,交叉反应率分别为2.38%,2.49%,2.78%,2.77%。说明成功筛选了杂交瘤细胞株,该细胞株能分泌抗植酸酶mAb,该植酸酶mAb对植酸酶亲和力高、特异性强、灵敏度好,为植酸酶ELISA检测试剂盒及试纸条研制奠定了基础。
- 胡骁飞魏凤仙李青梅职爱民王方雨孙亚宁柴书军付晓鹤
- 关键词：植酸酶杂交瘤单克隆抗体ELISA
