李晓鹏
- 作品数：6 被引量：14H指数：3
- 供职机构：云南农业大学植物保护学院农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家苹果产业技术体系建设专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 香石竹斑驳病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备被引量：2
- 2013年
- 香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是侵染香石竹的主要病毒。本研究从已鉴定的CarMV毒源植物中提取总RNA,克隆外壳蛋白(cp)基因后构建pET30a-CP重组质粒,并转入BL21(DE3)pLysS进行原核表达。通过对诱导温度、初菌浓度、IPTG的浓度等表达条件进行优化,目的蛋白在37℃,IPTG终浓度为1.0 mmol/L的条件下,诱导表达6 h后获得最高表达量。采用割胶的方法纯化cp蛋白,纯化后的目的蛋白免疫小鼠获得了特异性抗血清。经Western-blot检测,结果表明所制备的抗血清与诱导表达的重组蛋白及接种CarMV的香石竹样品均发生特异性结合。利用所制备抗血清对昆明地区的48个香石竹样品进行抽检,结果表明香石竹样品的带毒率为79.2%。本研究为大规模抗血清生产、检测应用和深入研究该病毒cp基因与寄主的互作奠定基础。
- 李晓鹏王连春彭杰军姬盼李准孔宝华陈海如
- 关键词：香石竹斑驳病毒外壳蛋白基因原核表达抗血清
- 香石竹斑驳病毒(CarMV)主要基因的分子变异分析
- 2012年
- 香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是侵染香石竹的主要病毒之一。本试验从12个香石竹品种中获得CarMV分离物,通过RT-PCR扩增包含p7、p9、CP 3个主要基因的片段,并对扩增产物进行克隆测序。通过序列比对发现CarMV的p7、p9、CP 3个基因有较高的稳定性,p7基因核苷酸序列相似性为98.10%,氨基酸序列相似性为97.81%,其中氨基酸的第11和14位存在显著差异;p9基因核苷酸序列的相似性为98.80%,氨基酸序列相似性为99.13%,氨基酸序列在第4位差异明显;CP基因核酸序列相似性为97.58%,氨基酸的相似性为98.43%,氨基酸序列的第164和331位的变异存在相关性,整个CP变异位点比较分散。证实p7和p9的变异位点主要集中在暴露与寄主互作相关的N端,推测这是导致病毒变异,与寄主互作变异的重要位点。
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- 关键词：香石竹斑驳病毒CP分子变异
- 云南苹果新品种抗斑点落叶病鉴定与评价被引量：3
- 2013年
- 苹果斑点落叶病是引起苹果树早期落叶的主要病害,也是目前在我国苹果产区普遍发生、危害最严重的病害之一,推广和使用抗病品种是控制该病害的有效措施和方法。本研究系统调查了分布在云南的7个苹果品种红富士、新嘎啦、皇家嘎啦、斯维塔、短枝富士、金世纪和玉华富士的田间自然发病率和病情指数,同时进行室内人工接种鉴定。结合两种方法,对7种苹果新品种对斑点落叶病的抗性进行了评价。田间调查结果显示,其余6个品种的抗性均高于现在的主栽品种红富士,适合于在云南推广。室内抗性鉴定结果显示,红富士品种对斑点落叶病的抗性程度是7,其他苹果品种均为5,抗性表现型红富士品种为S(感病),其余品种均为MR(中抗)。本研究为苹果品种的推广使用提供了依据。
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- 关键词：苹果斑点落叶病抗性鉴定
- 云南苹果产区苹果茎沟病毒(ASGV)的发现及其分子变异被引量：7
- 2013年
- 【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携带ASGV进行检测,运用DNAMAN6.0、MEGA5.0对实验获得的6个分离物和GenBank上已登录的34个分离物进行序列比对分析。【结果】ASGV在云南各大苹果产区的发病率高达48%。序列比对结果显示,这些分离物的核苷酸序列相似性为87.3%～93.8%,氨基酸序列相似性为90.7%～98.7%。系统发育树显示,云南的6个分离物聚为一簇,而陕西省苹果分离物YL06与云南省分离物ZT1、TJX1亲缘关系比较近,聚为一支;ASGV苹果分离物要明显区别于ASGV梨分离物和CTLV柑橘分离物。【结论】云南省苹果产区苹果树的ASGV带毒率高达48%,推测可能是一种发生率比较普遍的病毒病,这是云南省发现的首次报道。系统发育树显示:本研究获得的6个苹果分离物明显区别于其他寄主分离物,并且与其他地区的分离物具有一定差异,推测在我国,ASGV的分子变异与寄主/地域来源存在着一定的相关性。
- 姬盼王连春孔宝华李晓鹏曹克强马钧
- 关键词：克隆
- 侵染云南苹果的苹果褪绿叶斑病毒的RT-PCR检测和序列分析被引量：5
- 2013年
- 以云南昭通、昆明、曲靖等地采集的苹果病毒病样品为试材,对其是否携带苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)进行RT-PCR检测,将本试验获得3个云南ACLSV分离物(ZT,ML,TJX)和GenBank上已登录的24个分离物进行序列比对分析。所有的ACLSV分离物的核苷酸序列相似性为81.3%～99.7%,它们可以被分成两大组群,组群A,包括了大部分不同寄主、地理来源的分离物,所有的ACLSV苹果分离物位于组A;组群B,包括了ACLSV全部的寄主为桃的分离物。本研究获得的3个苹果云南分离物属于组群A,组群A可分成两个亚组,其中,分离物ML和TJX位于同一个亚组,而分离物ZT位于另一个亚组。结果表明ACLSV苹果分离物与寄主种类存在一定的相关性,该研究为株系划分、分子流行和寄主抗性分析提供依据。
- 姬盼王连春孔宝华李晓鹏曹克强马钧
- 关键词：RT-PCR克隆
- 香石竹斑驳病毒云南分离物全基因组序列测定和侵染性克隆构建
- 2012年
- 香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是危害香石竹的一种重要病毒,本研究通过构建农杆菌介导的CarMV侵染性克隆来进一步研究该病毒基因功能。首先获得CarMV云南分离物全长序列,与报道的上海分离物相似性达到94.78%;将CarMV全长cDNA基因序列构建到具有35S启动子的双元表达载体pCV-nGFP,通过农杆菌浸润到本氏烟中瞬时表达,本氏烟系统叶片RT-PCR能检测到CarMV。试验结果表明,本研究构建Car-MV侵染性克隆通过农杆菌介导可快速高效侵染植物,可以用于病毒基因功能研究;同时CarMV云南分离物全长序列测定结果表明其属于P164 K331组群。
- 王连春彭杰军郭维霞李晓鹏孔宝华陈海如
- 关键词：侵染性克隆
