王连春
- 作品数：25 被引量：93H指数：7
- 供职机构：玉溪师范学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家苹果产业技术体系建设专项云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 西双版纳热带雨林植物叶际细菌群落研究被引量：3
- 2020年
- 【目的】了解西双版纳热带雨林植物叶际细菌群落结构。【方法】应用高通量测序分析方法,对随机7个调查采样点采集的39个无细菌症状的植物样品测序。【结果】草本样本细菌与木本植物细菌相比,共有的OTUs数量相似,木本植物细菌间差异的OTUs数量相对小于草本植物间的。在门(phylum)水平上主要检测注释到Cyanobacteria、Proteobacteria、Bacteroidetes,及未归类细菌门。在纲(class)水平上主要检测注释到Alphaproteobacteria、Bacteroidia、与Bacilli、Clostridia及未归类细菌纲。在属种水平上,Methylobacterium、Acinetobacte分布最广,Pseudomonas、Sphingomonas次之。Geobacter、Exiguobacterium、Nocardioides、Hymenobacter、Escherichia-Shigella、Pseudarthrobacter、Comamonas、Vogesella、Massilia与Aeromonas等细菌寄主范围窄,但是分布普遍。【结论】研究检测注释到植物病原细菌、益生细菌、其他细菌及未归类细菌。弄清了西双版纳叶围细菌群落结构,为开发利用潜在生物防治、医疗有益细菌,了解潜在植物致病细菌,认识细菌对热带雨林生态稳定性的角色与机制奠定了基础。
- 阚望许姗姗杨太源刘悦王连春李红祥谭元花吴德喜孔宝华李成云
- 关键词：细菌群落多样性
- 香石竹斑驳病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备被引量：2
- 2013年
- 香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是侵染香石竹的主要病毒。本研究从已鉴定的CarMV毒源植物中提取总RNA,克隆外壳蛋白(cp)基因后构建pET30a-CP重组质粒,并转入BL21(DE3)pLysS进行原核表达。通过对诱导温度、初菌浓度、IPTG的浓度等表达条件进行优化,目的蛋白在37℃,IPTG终浓度为1.0 mmol/L的条件下,诱导表达6 h后获得最高表达量。采用割胶的方法纯化cp蛋白,纯化后的目的蛋白免疫小鼠获得了特异性抗血清。经Western-blot检测,结果表明所制备的抗血清与诱导表达的重组蛋白及接种CarMV的香石竹样品均发生特异性结合。利用所制备抗血清对昆明地区的48个香石竹样品进行抽检,结果表明香石竹样品的带毒率为79.2%。本研究为大规模抗血清生产、检测应用和深入研究该病毒cp基因与寄主的互作奠定基础。
- 李晓鹏王连春彭杰军姬盼李准孔宝华陈海如
- 关键词：香石竹斑驳病毒外壳蛋白基因原核表达抗血清
- 云南花生丛枝植原体secY基因序列分析及结构预测被引量：8
- 2013年
- 对采自云南元谋的花生丛枝植株总DNA进行secY基因的巢式PCR扩增,得到约1 700 bp的特异扩增片段,将该扩增产物克隆后进行序列测定,表明该片段长1 709 bp,该序列包括部分rpl15基因、全部secY基因序列以及部分的map基因,为植原体部分spc核糖体蛋白操纵子,其中secY基因编码的蛋白包括420个氨基酸,为含有10个明显跨膜区的整合性跨膜蛋白。通过同源性比对及构建的系统进化树,表明该株系与来源于台湾、海南的花生丛枝植原体亲缘关系最近,确定了该株系属于16SrII-A亚组成员。该分类结果与基于16SrDNA及rp基因的分析结果一致。
- 万琼莲蔡红杨子祥王连春陈海如
- 云南花生丛枝植原体16S rRNA和核糖体蛋白基因序列分析被引量：7
- 2014年
- 利用植原体16S rRNA基因及核糖体蛋白基因(ribosomal protein,rp)通用引物对发生在云南元谋的花生丛枝病病株DNA进行PCR扩增,并对扩增片段进行序列测定。扩增获得的云南元谋花生丛枝植原体(PnWB-YNym)16S rDNA、16S-23S rDNA和23S DNA片段总长1 806 bp,rp基因扩增片段长1 171 bp。云南株系与来源于台湾和海南的花生丛枝植原体均有较高同源性。比较16S rDNA片段,发现云南株系在5个位点上与来自台湾或海南的株系存在碱基差异,其中有1个位点的差异是云南元谋株系特异的;再分别比较核糖体蛋白rplV-rpsC 2个基因所编码的氨基酸序列,发现云南株系rpsC编码的第194位氨基酸与台湾和海南的株系存在差异。经16S rDNA片段系统进化及iPhyClassifier在线分析,表明PnWBYNym在分类上属于16SrII-A亚组成员,与候选种‘Cand/datus Phytoplasma australasiae'相关;基于rp基因构建的系统进化树表明,PnWB-YNym与16SrII-A亚组各成员聚为同一亚进化支(iii)。
- 万琼莲杨子祥王连春蔡红陈海如
- 关键词：植原体RDNA核糖体蛋白基因
- 侵染云南苹果的苹果褪绿叶斑病毒的RT-PCR检测和序列分析被引量：5
- 2013年
- 以云南昭通、昆明、曲靖等地采集的苹果病毒病样品为试材,对其是否携带苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)进行RT-PCR检测,将本试验获得3个云南ACLSV分离物(ZT,ML,TJX)和GenBank上已登录的24个分离物进行序列比对分析。所有的ACLSV分离物的核苷酸序列相似性为81.3%～99.7%,它们可以被分成两大组群,组群A,包括了大部分不同寄主、地理来源的分离物,所有的ACLSV苹果分离物位于组A;组群B,包括了ACLSV全部的寄主为桃的分离物。本研究获得的3个苹果云南分离物属于组群A,组群A可分成两个亚组,其中,分离物ML和TJX位于同一个亚组,而分离物ZT位于另一个亚组。结果表明ACLSV苹果分离物与寄主种类存在一定的相关性,该研究为株系划分、分子流行和寄主抗性分析提供依据。
- 姬盼王连春孔宝华李晓鹏曹克强马钧
- 关键词：RT-PCR克隆
- 香石竹斑驳病毒(CarMV)主要基因的分子变异分析
- 2012年
- 香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是侵染香石竹的主要病毒之一。本试验从12个香石竹品种中获得CarMV分离物,通过RT-PCR扩增包含p7、p9、CP 3个主要基因的片段,并对扩增产物进行克隆测序。通过序列比对发现CarMV的p7、p9、CP 3个基因有较高的稳定性,p7基因核苷酸序列相似性为98.10%,氨基酸序列相似性为97.81%,其中氨基酸的第11和14位存在显著差异;p9基因核苷酸序列的相似性为98.80%,氨基酸序列相似性为99.13%,氨基酸序列在第4位差异明显;CP基因核酸序列相似性为97.58%,氨基酸的相似性为98.43%,氨基酸序列的第164和331位的变异存在相关性,整个CP变异位点比较分散。证实p7和p9的变异位点主要集中在暴露与寄主互作相关的N端,推测这是导致病毒变异,与寄主互作变异的重要位点。
- 佟爱仔孔宝华陈海如王连春胡中会李晓鹏蔡红
- 关键词：香石竹斑驳病毒CP分子变异
- 滇龙胆GrSLS1基因的克隆与原核表达被引量：12
- 2014年
- 以滇龙胆转录组为基础,采用RT PCR技术克隆了滇龙胆幼叶裂环番木鳖苷合酶基因,命名为GrSLS1（GenBank登录号KF941191）.序列分析结果显示,GrSLS1基因开放阅读框长1 560 bp,编码519个氨基酸;GrSLS1蛋白相对分子量为59.33 kD,pI为8.96.生物信息学分析结果表明,GrSLS1蛋白属于SLS家族成员,其N端含有一跨膜螺旋区域（10～32）;二级结构分析结果表明,GrSLS1蛋白主要由α螺旋和无规则卷曲组成;系统发育分析表明,GrSLS1与帽柱木MsSLS2蛋白亲缘关系最近.构建原核表达载体pGEX 4T GrSLS1,对GrSLS1基因进行原核表达,SDS PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致.该研究为进一步研究GrSLS1基因功能及通过在龙胆中过表达该基因提高龙胆苦苷含量奠定基础.
- 张晓东李彩霞王连春李涛王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达
- 云南苹果新品种抗斑点落叶病鉴定与评价被引量：3
- 2013年
- 苹果斑点落叶病是引起苹果树早期落叶的主要病害,也是目前在我国苹果产区普遍发生、危害最严重的病害之一,推广和使用抗病品种是控制该病害的有效措施和方法。本研究系统调查了分布在云南的7个苹果品种红富士、新嘎啦、皇家嘎啦、斯维塔、短枝富士、金世纪和玉华富士的田间自然发病率和病情指数,同时进行室内人工接种鉴定。结合两种方法,对7种苹果新品种对斑点落叶病的抗性进行了评价。田间调查结果显示,其余6个品种的抗性均高于现在的主栽品种红富士,适合于在云南推广。室内抗性鉴定结果显示,红富士品种对斑点落叶病的抗性程度是7,其他苹果品种均为5,抗性表现型红富士品种为S(感病),其余品种均为MR(中抗)。本研究为苹果品种的推广使用提供了依据。
- 姬盼王连春孔宝华李晓鹏张彦明马玉梅马钧黄文静曹克强
- 关键词：苹果斑点落叶病抗性鉴定
- 侵染百合的黄瓜花叶病毒亚组Ⅱ分离物cp基因克隆和序列分析被引量：7
- 2007年
- 从云南大理的东方型百合上得到黄瓜花叶病毒分离物（CMV-DL）,ELISA检测初步确定为CMV亚组Ⅱ分离物,设计并合成CMV亚组Ⅱ的特异引物,RT-PCR扩增得到1条约800 nt的特异片段,经克隆及序列测定,该片段长828 nt,包含的外壳蛋白（CP）基因由657 nt组成。将该分离物的cp基因与其它14个CMV分离物进行同源性比较,在核苷酸水平上与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的同源性分别为76.8%-78.1%和98.6%-99.2%;在氨基酸水平上与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的同源性分别为82.0%-84.3%和95.9%-100.0%。结果表明CMV-DL为CMV亚组Ⅱ成员。
- 赵丹孔宝华李凡蔡红王连春陈海如
- 关键词：黄瓜花叶病毒百合RT-PCRCP基因
- 云南苹果产区苹果茎沟病毒(ASGV)的发现及其分子变异被引量：7
- 2013年
- 【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携带ASGV进行检测,运用DNAMAN6.0、MEGA5.0对实验获得的6个分离物和GenBank上已登录的34个分离物进行序列比对分析。【结果】ASGV在云南各大苹果产区的发病率高达48%。序列比对结果显示,这些分离物的核苷酸序列相似性为87.3%～93.8%,氨基酸序列相似性为90.7%～98.7%。系统发育树显示,云南的6个分离物聚为一簇,而陕西省苹果分离物YL06与云南省分离物ZT1、TJX1亲缘关系比较近,聚为一支;ASGV苹果分离物要明显区别于ASGV梨分离物和CTLV柑橘分离物。【结论】云南省苹果产区苹果树的ASGV带毒率高达48%,推测可能是一种发生率比较普遍的病毒病,这是云南省发现的首次报道。系统发育树显示:本研究获得的6个苹果分离物明显区别于其他寄主分离物,并且与其他地区的分离物具有一定差异,推测在我国,ASGV的分子变异与寄主/地域来源存在着一定的相关性。
- 姬盼王连春孔宝华李晓鹏曹克强马钧
- 关键词：克隆
