李先平
- 作品数：80 被引量：227H指数：8
- 供职机构：中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金湖南省科委基金World Health Organization更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 金黄色葡萄球菌肠毒素C3过表达慢病毒载体的构建及鉴定
- 2016年
- 目的：构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增SEC3基因片段;用Age I酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;转染293T细胞包装慢病毒,观察细胞荧光及Western blot检测慢病毒载体表达,HIV-1 p24 ELISA法测定慢病毒载体滴度。结果：获得目的基因,并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体,通过PCR及DNA测序鉴定,证明GV365-SEC3质粒构建正确;转染293T细胞后可观察到大量荧光细胞,经蛋白电泳得到29 k D大小的蛋白条带,与目的基因蛋白相符合,ELISA检测病毒载体滴度为5×10~8TU/ml。结论：成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体,为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。
- 谢益欣王敏李先平杨敏李碰玲张婷婷宋欢董智慧唐爱国
- 关键词：慢病毒过表达
- 82株肺炎克雷伯菌β-内酰胺耐药性与基因型相关性分析被引量：12
- 2018年
- 目的检测82株肺炎克雷伯菌β-内酰胺类抗生素耐药性,分析其与16种β-内酰胺酶基因的相关性。方法临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)82株,采用自动细菌检定系统检测其对18种常用β-内酰胺类抗生素的耐药性和16种β-内酰胺酶基因携带情况,并分析细菌耐药性与β-内酰胺酶基因型的相关性。结果临床分离株KPN对SCF耐药较高,为94.1%;对MPM的耐药率较低,为24.2%。82株KPN共检出SHV、TEM-1、KPC-2、NDM-1、OXA-1、OXA-2、CTX-M-3、CTX-M-14、CTX-M-15、CMY-4等10种β-内酰胺酶基因,其中前4种阳性率分别为100%、100%、7.3%和2.5%;碳青酶烯耐药株和碳青酶烯敏感株OXA-1、CMY-4、KPC-2及NDM-1基因阳性率分别为11.0%~100.0%,差异有统计学意义(P<0.05);基因型E型(SHV+TEM+CTX-M群+OXA群)较常见,检出率为48.8%,与药敏型Ⅷ型相符度(以药敏型为标准)为75%;基因型D型KPN中,药敏型Ⅰ型和Ⅱ型所占比例较高,达61.9%。结论长沙地区临床分离株KPNβ-内酰胺类抗生素耐药情况严重,β-内酰胺类耐药基因的携带也表现为多样化,其中SHV、TEM基因携带率高达100%,携带OXA-1、CMY-4、KPC-2及NDM-1的KPN更有可能对碳青霉烯类抗生素耐药,基因型为D型的KPN更有可能对非碳青霉烯β-内酰胺类抗生素耐药。
- 杨敏李欣王敏李先平刘月谢益欣张衎田菁菁唐爱国
- 关键词：肺炎克雷伯菌Β-内酰胺类抗生素Β-内酰胺酶基因基因型
- 日本血吸虫铁蛋白基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究被引量：6
- 2004年
- 目的 :构建、表达、纯化日本血吸虫铁蛋白基因的原核表达重组蛋白 ,并初步观察其免疫诊断价值。方法 :将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆于pGMC载体 ,转化重组体到大肠杆菌E .coli 2 5 6 6进行表达 ;采用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS PAGE和Westernblot鉴定表达纯化产物 ;用Dot ELISA分别检测了血吸虫病人及正常人的血清。结果 :重组的日本血吸虫铁蛋白以GMC(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ) 日本血吸虫铁蛋白融合蛋白的形式在细菌中得到高效表达 ,分子量为 4 0kD ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。用重组铁蛋白检测 30例日本血吸虫病人血清和 30例正常人血清 ,阳性率和假阳性率分别为 93 3%和 3 3%。结论 :成功地表达纯化日本血吸虫重组铁蛋白 ,且该蛋白具有一定的免疫诊断价值。
- 王敏易新元曾宪芳袁仕善李先平
- 关键词：日本血吸虫铁蛋白基因克隆免疫诊断
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药性分析
- 目的了解我院2004年1月～2006年12月3年间从各种标本中培养出的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药情况。方法分离得到的菌株用Microscan W/A 96全自动微生物鉴定仪进行菌株鉴定及药敏试验。结果3年...
- 李先平王敏范婧
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性
- 文献传递
- 肺炎克雷伯菌RAPD基因分型及其与氨基糖苷类药敏分型对比研究
- 2022年
- 目的检测肺炎克雷伯菌(KPN)随机扩增多态性DNA分析(RAPD)基因分型情况,分析其与氨基糖苷类药敏分型的差异性。方法采用4种RAPD引物(RAPD 1,RAPD 2,RAPD 3,OPA 2)对82株临床分离的KPN进行分型,观察分离菌RAPD分型结果的差异,并与氨基糖苷类药敏分型进行对比分析。结果82株KPN对阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、妥布霉素(TOB)的耐药率分别为19.51%、64.63%、41.46%。82株KPN的氨基糖苷药敏分型可分为9种(①~⑨)。4种RAPD引物间分型结果对比显示,OPA 2分型[4]型与RAPD 2分型b型相符度最高(65.22%,15/23)。以RAPD分型为标准,RAPD 2分型b型与氨基糖苷药敏分型②型的相符度最高(38.71%,12/31);以药敏分型为标准,药敏分型①型(对AMK,GEN和TOB均耐药)与RAPD 3分型I型的相符度最高(62.50%,10/16),药敏分型②型(对AMK,GEN和TOB均敏感)与RAPD 2分型b型的相符度最高(52.17%,12/23)。结论4种引物都可用于KPN基因多态性分型研究。RAPD分型和氨基糖苷类药敏分型结果不完全一致。对氨基糖苷类药物全耐药、全敏感的KPN进行RAPD分型时建议分别选择RAPD 3、RAPD 2引物。
- 罗灿陈昕怡王敏李先平李采霞
- 关键词：肺炎克雷伯菌基因分型
- 用Helena SPIFE琼脂糖凝胶电泳系统进行血清蛋白电泳被引量：5
- 2003年
- 目的 :评价HelenaSPIFE琼脂糖凝胶电泳 (AGE )系统进行血清蛋白电泳的方法。方法 :用HelenaSPIFE全自动快速电泳系统进行血清蛋白电泳 ,确立了该法的参考值范围 ,分析了该法的精密度和干扰因素 ,同时将该法与传统的醋酸薄膜电泳方法 (CAE)进行了比较。结果 :AGE测定了 72例正常人血清中白蛋白 ,α1球蛋白 ,α2球蛋白 ,β球蛋白 ,γ球蛋白的浓度 ,确立其参考值范围分别为 3 3 2～ 49 8g/L ,1 8～ 3 8g/L ,4 6～ 9 3g/L ,7 3～12 3g/L ,9 5～ 19 4g/L。批内、批间精密度在 1 2 1%～ 2 77%和 3 70 %～ 5 5 7%之间。基本不受黄疸、血脂和溶血的干扰。与CAE比较 ,5个蛋白区带中 ,除肾病综合征的 β球蛋白、急性时相反应的α2 球蛋白外 (相关系数r分别为 0 788和 0 769) ,其他区带的相关性好 ,r值在 0 82 3和 0 975之间。结论 :电泳法 (AGE)测定值与传统法基本一致 ,AGE且自动化 ,操作简便 ,精密度高 。
- 李先平王敏杨江玲
- 关键词：血清蛋白电泳血清测定
- 湖南地区强直性脊柱炎患者TNFRⅡ基因多态性研究
- 2012年
- 目的通过对湖南地区强直性脊柱炎（AS）汉族患者及健康人群DNA中肿瘤坏死因子受体（TNFR）Ⅱnt587位点的多态性分析，研究TNFRⅡnt587位点基因多态性与强直性脊柱炎发病的相关性。方法采用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性法（PCR-RFLP）对100例AS患者和100名健康对照TNFRⅡnt587位点进行基因分型检测。数据经SPSS处理，分析两组中基因型、等位基因频率差异。结果100例患者中TNFRⅡnt587位点T／T型43例（43．0％），T／G型32例（32．0％），G／G型25例（25．0％）；100例健康对照中TNFRⅡnt587位点T／T型56例（56．0％），T／G型34例（34．0％），G／G型10例（10．0％），AS患者中TNFRⅡnt587G频率（41．0％）较正常对照（27．0％）明显增高（χ^2=8．734，P=0．003）。与对照组相比，As患者TNFRⅡnt587位点基因型为G／G时比数比（OR=3．256）明显高于T／G型（OR=1．226）和T／T型（OR=1）。结论湖南地区汉族人群中TNFRⅡnt587位点多态性与AS发病具有相关性，且G／G基因型在AS发病中具有高风险性。
- 李先平王敏刘俊曹虹
- 关键词：强直性脊柱炎肿瘤坏死因子受体基因多态性
- 慢性前列腺炎患者前列腺液细菌16S rRNA基因的检测
- 细菌感染是引起慢性前列腺炎的重要因素之一.但是从传统的尿四杯培养法的结果来看.其阳性率不高.仅5%- 10%。有关文献报道.到目前为止.能够获得纯培养的微生物比例只有1%,许多细菌还不能被常规的技术所检测。近年来随着基因...
- 王敏姜叶灵李先平
- 文献传递
- 整合子介导鲍曼不动杆菌耐药机制的研究被引量：5
- 2012年
- 目的研究鲍曼不动杆菌1类整合子和2类整合子的携带情况,并对比分析其与临床耐药率的关系。方法收集中南大学湘雅二医院2008年9月～2009年9月分离的70株鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行临床常见15种抗生素药物敏感试验。利用聚合酶链反应检测1类整合子和2类整合子基因。结果药敏试验显示鲍曼不动杆菌对氨曲南的耐药率最高,为72.86%;对头孢哌酮/舒巴坦耐药性最低,为15.71%。PCR检测鲍曼不动杆菌1类整合子携带率为57.14%(40/70),2类整合子携带率为7.14%(5/70)。与1类整合子阴性菌株相比,阳性菌株对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率相近(χ2=1.47,P>0.05),对其他14种抗菌药物的耐药率为55.00%～82.50%,其中对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南耐药率两组菌间差异无统计学意义(P>0.05),对其余抗菌药物耐药率差异有统计学意义(P<0.01)。结论鲍曼不动杆菌主要携带1类整合子,且1类整合子与不动杆菌多重耐药关系密切。
- 李先平王敏王妹妹曹虹郑荣曹伟
- 关键词：鲍曼不动杆菌整合子耐药机制
- 鲍曼不动杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型的研究被引量：7
- 2009年
- 目的利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对鲍曼不动杆菌进行基因分型建立DNA指纹图谱,调查该菌在各临床科室的流行情况,并将其与药敏谱进行比较。方法随机收集中南大学湘雅二医院2007年9月到2008年9月分离出的86株鲍曼不动杆菌,采用WHO推荐的K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,建立药敏谱,同时利用随机扩增多态性DNA法(RAPD)技术进行基因分型,建立DNA指纹图谱,对二者进行比较,然后结合药敏谱和指纹图谱分析各临床科室鲍曼不动杆菌的感染情况。结果药物敏感试验将86株鲍曼不动杆菌分为47型,RAPD技术将其分为14型,其中A、F、D、B和L型为5种优势型,其菌株数分别为22、15、11、9和7株。本院ICU,老年病科,神经内科,呼吸内科,神经外科鲍曼不动杆菌检出率较高。结论RAPD分型方法优于药敏分型,其在流行病学研究上更能证实菌株的相关性,在早期发现和预防感染暴发流行中起重要作用。
- 王敏曾海燕李先平曹虹
- 关键词：鲍曼不动杆菌基因分型药物敏感试验
