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双歧杆菌粘附蛋白的筛选及功能初步研究: 本文从双歧杆菌粘附出发，通过分子克隆表达的技术获得了长双歧杆菌粘附蛋白-BIF，并从其他四种双歧杆菌中获得了类BIF蛋白。同时以磁性纳米材料为载体，直接筛选得到了粘附肠上皮细胞的长双歧杆菌粘附蛋白。研究发现，研究益生菌的...; 徐锋谭强来黎鹏徐迪明星魏华; 关键词：双歧杆菌蛋白筛选粘附功能

副溶血弧菌的磁珠捕获及检测被引量：6: 2013年; 建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性。将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获。结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体。制备的免疫磁珠捕获率在55%～70%之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5%NaCl、4.5%NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小。在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度。免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景。; 王报贵武晓丽董素琴陈飞陈星星甘敏明星徐锋; 关键词：副溶血弧菌多克隆抗体免疫磁珠 PCR

双歧杆菌黏附蛋白生物学功能的初步探究: 有关双歧杆菌黏附素的探讨一直是学者关注的热点。本文旨在探讨双歧杆菌黏附蛋白的生物学功能,以期为揭示益生菌与宿主的作用机制提供研究基础。　　首先对工程菌株进行诱导,纯化获得长双歧杆菌黏附蛋白 PP2、PP4。采用量子点标记...; 明星; 关键词：双歧杆菌黏附蛋白致病菌信号通路生物学功能; 文献传递

副溶血弧菌胶体金检测试纸条的改进被引量：9: 2014年; 研制一种快速、灵敏、简便的胶体金免疫试纸条,用于改进副溶血弧菌的检测。通过胶体金与特异性针对于副溶血弧菌的单抗偶联,同时在NC膜上包被兔多抗、驴抗鼠的IgG分别作为检测线和质控线,制备免疫层系试纸条,测定试纸条的灵敏性与特异性。结果表明,当加入由胶体金标记的羊抗鼠二抗,能将显色强度提高5倍,明显有利于肉眼的观察。在纯培养物中试纸条的灵敏度为106CFU/mL,且与3株不同的副溶血弧菌均有阳性反应,与26株常见的菌均无交叉反应。同时在添加阪崎肠杆菌、志贺氏菌的鱼肉样本中,检测限为107CFU/mL。改良的副溶血弧菌胶体金免疫层系试纸条的建立,有助于加强食品中该菌的检测,提供了一种快速、灵敏、简便的方法。; 王报贵王广峰武晓丽董素琴明星魏华徐锋; 关键词：副溶血弧菌单克隆抗体多克隆抗体胶体金

抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析被引量：2: 2013年; 目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3按VL-Linker-VH方式将VH基因和VL基因拼接成单链抗体基因片段后,连接到pGEX-4T-1载体上,进行重组转化。挑取阳性克隆,经IPTG诱导后,通过GST柱进行亲和层析,最后利用ELISA检测抗体的活性。结果:成功构建了表达抗肠炎沙门氏菌单链抗体的基因工程菌株,经SDS-PAGE和ELISA检测结果表明,诱导表达的单链抗体scFv分子量约为60 kDa,其能特异与肠炎沙门氏菌结合,但与副甲伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌有轻度交叉反应。结论:成功构建了抗肠炎沙门氏菌单链抗体的表达菌株,表达的单链抗体scFv可作为沙门氏菌的检测的候选抗体分子。; 王报贵武晓丽董素琴甘敏陈星星陈飞明星徐锋; 关键词：沙门氏菌单链抗体重链可变区轻链可变区

牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立被引量：6: 2012年; 通过用超声波破碎的宋内氏志贺氏菌和福氏志贺氏菌的菌体碎片为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得4株能稳定分泌抗志贺氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株制备单抗,并用胶体金标记。同时抗志贺氏菌的兔多抗和驴抗鼠抗体(二抗)分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),研制了志贺氏菌胶体金快速检测试纸条。结果显示试纸条的灵敏度为105mL-1,并只与两株志贺氏菌有阳性反应外,而与其它23株常见的细菌无交叉反应。同时在检测添加有阪崎肠杆菌和长双歧杆菌的牛奶样品中,结果显示试纸条的灵敏度为106mL-1。志贺氏菌免疫胶体金试纸条的建立,为加强食品中志贺氏菌的检测工作,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。; 徐锋武晓丽徐迪明星魏华黎鹏; 关键词：宋内氏志贺氏菌福氏志贺氏菌试纸条

利用双重PCR同时检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌方法的建立被引量：1: 2014年; 建立能够同时检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的双重聚合酶链式反应(Polymerse chain reaction,PCR)的方法。分别根据沙门氏菌和克罗诺杆菌16S rDNA序列设计特异性引物Cro和InvA。对待检奶粉样本进行预增菌后,提取菌液基因组DNA作为模板,进行双重PCR扩增,对其特异性、灵敏度和抗杂菌干扰能力进行评估。结果表明:两对引物分别可特异性扩增出140、630bp的目的条带。双重PCR同时检测婴幼儿配方奶粉样本中两种食源性致病菌的方法具有较高灵敏度,在经过4h预增菌后可检测到初始浓度为100CFU/g的克罗诺杆菌和初始浓度为100CFU/g的沙门氏菌,且在高浓度杂菌干扰下,灵敏度无下降。在人工污染奶粉样本检测中,两种致病菌的检出准确率均达95%以上。初步建立了能同步、快速、准确、灵敏地检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的双重PCR方法。; 明星徐锋陈星星甘敏陈飞武晓丽; 关键词：沙门氏菌双重PCR

豆豉中发酵菌株的分离与鉴定被引量：6: 2012年; 目的从豆豉菌曲中分离并鉴定其发酵菌株。方法将豆豉菌曲采用平板稀释的方法进行菌种分离后,采用革兰染色和16S rDNA序列分析进行菌株的鉴定。以黑豆为原料,分别接种分离的菌株进行豆豉的纯种发酵,观察并测定豆豉在发酵过程中的外观、温度、气味的变化。结果筛选并鉴定获得10株分属魏斯菌、乳杆菌、芽胞杆菌和葡萄球菌等的菌株,且用枯草芽胞杆菌、发酵乳杆菌纯种发酵的豆豉在外观及气味等方面与自然发酵相近。结论分离得到的枯草芽胞杆菌、发酵乳杆菌可取代自然发酵菌种,作为工业纯种发酵的参考菌株应用。; 王报贵董素琴许恒毅明星徐迪魏华徐锋; 关键词：豆豉革兰染色 RDNA

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