方相春
- 作品数：8 被引量：15H指数：2
- 供职机构：第四军医大学基础医学部人体解剖学教研室暨梁銶琚脑研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队中医药科研专项课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- JAK-STAT信号转导通路在神经系统疾病中作用的研究进展被引量：9
- 2014年
- JAK-STAT信号通路是近年来发现的一条由多种细胞因子刺激的信号转导通路，广泛的存在于多种细胞中。例如，JAK3存在于骨髓和淋巴系统，JAK2、STAT3存在于神经胶质细胞，而STATS则存在于海马神经细胞等。JAK．STAT信号通路不仅参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程，还在发育分化、增殖的调控和维持中发挥重要作用。随着研究的不断深入，目前认为该信号传导途径的传递过程不仅复杂，而且其调控机制也精细多样，
- 张克英唐君方相春张春奎史娟李金莲
- 关键词：JAKSTAT疼痛神经退行性疾病
- 人参皂甙Rd通过调节SNI大鼠背根神经节钠、钾电流抑制痛敏被引量：2
- 2014年
- 目的:观察人参皂甙Rd(ginsenoside Rd)对大鼠坐骨神经分支选择性损伤(spared sciatic nerve injury,SNI)引起的痛敏的影响及其作用机制。方法:坐骨神经分支选择性损伤术后7天,观察腹腔注射不同浓度人参皂甙Rd后大鼠后足的机械性缩足反应阈值(paw withdrawl mechanical threshold,PWMT)的变化;在术后7天,急性分离并取出大鼠腰4和腰5段背根节,对整节DRG上的中小型神经元运用全细胞膜片钳技术进行记录。结果:坐骨神经分支选择性损伤术后7天,大鼠出现明显的机械性痛敏,腹腔注射5 mg/ml和10 mg/ml的人参皂甙Rd能剂量依赖性的翻转大鼠机械性痛敏;坐骨神经分支选择性损伤能明显地增大SNI大鼠DRG中小型神经元上的钠电流以及减小电压依赖性钾电流,而100μM人参皂甙Rd能有效翻转该钠、钾电流的变化。结论:人参皂甙Rd能有效地改善坐骨神经分支选择性损伤引起的机械性痛敏,其机制可能与人参皂甙Rd明显地调节SNI大鼠DRG中小型神经元上的电压依赖性钠、钾电流有关。
- 杨菲张统一白录军徐春华方相春
- 关键词：人参皂甙RD钠电流钾电流
- 大鼠VGLUT2基因shRNA慢病毒载体转染原代培养脊髓神经元对VGLUT2表达的影响
- 2012年
- 目的:探讨新构建的可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2)短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体能否有效地感染大鼠脊髓原代培养神经元,并鉴定其对培养神经元内VGLUT2基因的特异性干扰效果,从而为进一步在整体动物脊髓水平研究VGLUT2的功能提供有力的工具。方法:首先分别将已筛选到的两对互补并靶向作用于编码大鼠VGLUT2序列两个位点的特异性shRNA序列和一个阴性对照的寡核苷酸,克隆到pGCSIL-GFP质粒(经Age I和EcoRI双酶切)载体内,经酶切、测序鉴定及转染293T细胞,包装得到病毒颗粒。然后将筛选出的慢病毒感染体外分离、培养的胚胎大鼠脊髓神经元,将培养的原代神经元分为正常组、阴性对照组、VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组,在荧光显微镜下分别观察GFP的表达情况;同时运用Westernt blot检测各组VGLUT2蛋白的表达水平。结果:免疫荧光检测显示,阴性对照组、VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组脊髓原代培养神经元均能观察到明显的GFP荧光,表明这些神经元已被慢病毒载体高效转染;但VGLUT2 shRNA-1组和VGLUT2 shRNA-2组神经元VGLUT2的表达量明显低于正常组和阴性对照组。Western blot结果显示,VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组的VGLUT2蛋白的表达量与正常组和阴性对照组相比明显有所下降,分别占正常组的62.42±1.12%和66.07±1.33%(P<0.05),但VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组之间无显著性差异(P>0.05);阴性对照组与正常组相比亦无明显差异(P>0.05)。结论:VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组重组慢病毒载体均能有效地感染原代培养脊髓神经元,并高效下调其神经元内目的基因VGLUT2的表达。
- 方相春张春奎唐君李志红张婷李金莲
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- 大鼠VGLUT2基因shRNA慢病毒载体的构建、鉴定及转染原代培养神经元对VGLUT2表达的影响
- 目的构建可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2)shRNA的慢病毒载体,探讨新构建的慢病毒载体能否有效地感染大鼠皮层和脊髓原代培养神经元,并鉴...
- 方相春葛顺楠张春奎唐君李志红张婷李金莲
- 关键词：慢病毒载体原代培养神经元
- 文献传递
- Ⅰ型和Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体在三叉-小脑投射和三叉-丘脑投射通路内的差异表达
- 三叉神经感觉核簇(TSNC)作为接受口面部感觉信息传入的初级门户,其内含有丰富的Ⅰ型和Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT1和VGLUT2)mRNA阳性神经元。本研究综合运用免疫组织化学、原位分子杂交、束路追踪与免疫荧光组...
- 李志红葛顺楠唐君方相春李金莲
- 脊髓刺激术对神经病理性痛模型大鼠脊髓背角内NR2B受体和星形胶质细胞激活的影响被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨脊髓刺激术(spinal cord stimulation,SCS)对L5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)诱导的神经病理性痛(neuropathic pain,NP)大鼠脊髓背角内NMDA受体亚单位NR2B的表达和星形胶质细胞激活的影响。方法:成年雄性SD大鼠48只,随机分为4组:正常组(不做任何处理);SCS组(植入SCS装置并给予SCS刺激);SNL+sham SCS组(给予SNL手术并植入SCS装置,但不进行刺激);SNL+SCS组(SNL手术并给予SCS刺激)。SCS刺激是在SNL术后第6～10 d进行(8 h/d),第10 d刺激结束后处死动物。运用行为学方法检测慢性痛状态下大鼠后肢对机械性刺激的反应阈值;采用免疫组织化学染色和Western blot方法分别检测脊髓背角内NR2B和星形胶质细胞的标志物GFAP的表达变化。结果:(1)SNL术后大鼠手术侧后足机械性痛敏显著增加,第6～10 d给予SCS刺激后,可观察到大鼠的痛行为学表现有明显缓解;(2)免疫组化结果显示:与SNL+sham SCS组相比,SNL+SCS组大鼠脊髓背角内NR2B和GFAP免疫阳性细胞的数量显著减少;(3)Western blot结果显示:给予SCS刺激后,SNL大鼠腰膨大段脊髓背角内NR2B的表达量显著下调,同时GFAP的表达量也明显有所降低。结论:给予SCS刺激可以有效地缓解SNL模型大鼠的神经病理性痛的行为学表现;该作用可能与SCS刺激抑制脊髓背角内NR2B的表达和星形胶质细胞的激活密切相关。
- 张春奎方相春李志红唐君董玉琳李金莲
- 关键词：神经病理性痛NR2B星形胶质细胞
- 脊髓刺激术对神经病理性痛模型大鼠脊髓背角NR2B表达和星形胶质细胞激活的影响
- 近年来大量研究报道神经元内NMDA受体亚单位NR2B的表达增加在神经病理性痛的发生发展、尤其是疼痛慢性化中具有重要作用,而NR2B的表达增加亦与脊髓背角内星形胶质细胞的激活密切相关。脊髓刺激术(SCS)是一种将刺激电极通...
- 张春奎方相春董玉琳李金莲
- 脊髓刺激术对神经病理性痛模型大鼠痛行为和脊髓背角内小胶质细胞激活的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨脊髓刺激术(spinal cord stimulation,SCS)对神经病理性痛(neuropathic pain,NP)模型大鼠痛行为及脊髓背角内小胶质细胞激活的影响。方法:成年大鼠20只,随机分为4组:(1)正常对照组(control组);(2)SCS组:正常大鼠给予SCS刺激;(3)脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)假刺激组(SNL+shamSCS组):SNL且植入SCS装置,但不刺激;(4)SNL+SCS组:SNL且给予SCS刺激。术前连续3 d、术后第5 d检测各组大鼠足底机械痛敏阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)。SCS组和SNL+SCS组术后第2-5 d给予SCS刺激,每d持续8 h;且在每次给予SCS 8 h刺激前进行90 min行为学测试,即SCS刺激30 min,以及刺激结束后的60 min内(共90 min),每15 min测量一次MWT。在第5 d给予SCS 8 h刺激结束后处死动物,利用免疫组织化学染色结合平均光密度(average optical density,AOD)分析的方法检测各组大鼠腰5节段脊髓背角内小胶质细胞特异性标志物OX-42的表达情况。结果:(1)行为学结果显示:术后第5 d,SNL+shamSCS组和SNL+SCS组大鼠手术侧后爪的MWT由术前26.00±0.0 g分别降至5.50±0.96 g和6.40±0.40 g(P<0.05);SNL+SCS组给予SCS刺激30 min后大鼠手术侧后爪的MWT明显有所提高,达16.20±2.60 g,与刺激前(6.40±0.40 g)相比有显著性差异(P<0.05);但停止SCS刺激60 min后,大鼠的MWT明显有所下降,与刺激前几乎没有明显差别。(2)免疫组化染色结果显示:术后第5 d,SNL+SCS组脊髓背角内OX-42的表达明显弱于SNL+shamSCS组,但二者都强于control组和SCS组;AOD结果也证实:SNL+SCS组大鼠脊髓背角内OX-42的AOD(1.29±0.28)明显低于SNL+shamSCS组(2.66±0.38),但仍高于control组(0.14±0.21)和SCS组(0.24±0.08)。结论:SCS对SNL模型大鼠的神经病理性痛有较好的镇痛效果;该作用可能与SCS刺激显著抑制脊髓背角内小胶质细胞的激活密切相关。
- 张春奎李志红方相春唐君齐建国李金莲
- 关键词：神经病理性痛小胶质细胞
