徐宁
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：东南大学医学院理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人β-微管蛋白2C蛋白的原核表达与纯化被引量：2
- 2009年
- 目的构建体外原核表达和纯化人β-微管蛋白2C(TubB2C)蛋白。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增出人TubB2C基因完整开放读码框架(ORF),并插入pGEX-6P-1载体中构建pGEX-TubB2C重组质粒。经大肠杆菌BL21转化后,用异丙醇-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽S转移酶(GST)-TubB2C融合蛋白表达,用免疫印迹(W estern b lot)分析鉴定表达的GST-TubB2C蛋白,并在非变性条件下利用G lutath ione Sepharose 4B纯化GST-TubB2C蛋白。结果酶切分析和DNA测序表明TubB2C cDNA完整ORF以正确的阅读框架插入pGEX-6P-1载体;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达的GST-TubB2C蛋白相对分子量约为78 000,W estern b lot结果显示该融合蛋白可被抗GST抗体特异性识别。纯化后的GST-TubB2C蛋白纯度约90%。结论TubB2C蛋白可在体外大量表达和纯化。
- 武慧娟田田王露徐宁王丛阳何泽沈传陆
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- TBC1D3表达上调降低人乳腺癌MCF-7细胞对长春新碱敏感性
- 目的研究乳腺癌细胞中TBC1D3表达上调时细胞对长春新碱(VCR)敏感性的变化,探讨TBC1D3表达是否影响VCR对乳腺癌的治疗效果。方法用RT-PCR方法扩增人TBC1D3的基因,酶切鉴定和测序确认,TBC1D3基因与...
- 何泽王丛阳王辉王露徐宁田田郭丹沈传陆
- 关键词：MCF-7乳腺癌细胞人乳腺癌长春新碱
- 文献传递
- 阿霉素对人乳腺癌细胞MCF-7表达KIF4A的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨阿霉素对人乳腺癌细胞MCF-7表达KIF4A的影响。方法:用Western blotting方法检测阿霉素处理MCF-7细胞后不同时间该细胞表达的KIF4A蛋白;用不同浓度的阿霉素处理MCF-7细胞96h后,检测KIF4A蛋白,并进行衰老相关半乳糖苷酶染色。结果:与未用阿霉素处理的MCF-7细胞相比,阿霉素处理的MCF-7细胞表达KIF4A蛋白降低;衰老相关半乳糖苷酶染色率由5%提高到42%,染色阳性的细胞形态亦呈衰老样变。结论:阿霉素处理MCF-7细胞可使KIF4A蛋白表达水平降低,KIF4A蛋白表达降低与阿霉素引起MCF-7细胞衰老的关系有待进一步研究。
- 王露武慧娟徐宁王丛阳何泽沈传陆
- 关键词：阿霉素细胞衰老MCF-7细胞
- 细胞骨架蛋白肌球蛋白轻链与癌蛋白TRE17相互作用的鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨MLC2与TRE17之间的相互作用。方法:构建了MLC2原核表达质粒,在用pGEX蛋白表达系统表达和纯化GST-MLC2和GST蛋白后,用GST Pulldwon方法进一步观察MLC2与TRE17之间的相互作用。结果:限制性内切酶分析和DNA序列测定表明MLC2 cDNA完整ORF以正确的阅读框架插入pGEX-6P-1载体;IPTG诱导表达的GST-MLC2和GST蛋白纯度在90%以上;GST Pulldown分析表明癌蛋白TRE17(447)结合GST-MLC2融合蛋白,而不是对照GST蛋白。结论:MLC2是TRE17的特异性结合蛋白。
- 杨永刚田田郭丹武慧娟王露徐宁沈传陆
- 关键词：癌基因肌球蛋白轻链蛋白质相互作用
