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PI3-K/Akt shRNA真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1: 2008年; 目的:构建针对PI3-K/Akt基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体。方法:用DNA重组技术将针对大鼠PI3-K/Akt基因不同位点所设计的8个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中。在酶切分析及序列测定后,用脂质体转染至大鼠肾小球系膜细胞(GMCs),Western blot检测蛋白的相对表达量来筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明重组质粒正确。Western blot证实在重组质粒中shPik3c3-2、shAkt1-4具有最佳沉默效率。结论:成功构建了PI3-K/Akt shRNA的真核表达质粒。该实验结果为进一步研究PI3-K/Akt信号通路的生物学功能奠定了基础。; 张艳高玲娟邱文任琎赵聃王迎伟; 关键词：PI3-K/AKT SHRNA

CVF耗竭补体对大鼠Thy-1肾炎凋亡病变及其Gadd45γ基因表达的影响: 目的:研究眼镜蛇毒因子(Cobra venom factor,CVF)耗竭体内补体对Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular mesangial cells,GMCs)凋亡病变及其生长阻滞和DNA损伤诱生蛋...; 邱文冯雪凤车楠夏梅张艳王迎伟; 文献传递

应用基因芯片技术检测非综合征型耳聋基因突变被引量：25: 2010年; 目的:应用遗传性耳聋基因芯片对散发性聋患者进行分子病因学检测,评估其在遗传性耳聋快速基因诊断中的可靠性。方法:门诊收集散发性聋患者10例,取外周血,提取基因组DNA,用遗传性耳聋基因芯片检测4个中国人中常见的耳聋相关基因中的9个热点突变,包括GJB2(35delG、176del16bp、235delC及299delAT)、GJB3(C538T)、SLC26A4(IVS7-2A>G、A2168G)和线粒体DNA 12S rRNA(A1555G、C1494T)。同时,PCR扩增GJB2、线粒体12S rRNA基因全序列,DNA测序,以验证基因芯片检测结果的准确性。结果:在10名耳聋患者中,基因芯片方法检出1例携带线粒体DNA 12S rRNA C1494T突变;2例GJB2基因235delC纯合突变;2例235delC杂合突变;SLC26A4基因和GJB3基因未检出突变。基因芯片的结果与测序结果完全一致。结论:遗传性耳聋基因芯片技术对中国人常见耳聋相关基因热点突变的检出率高,结果准确、可靠,具有快速、高通量、高准确性、低成本等特点,能够满足临床耳聋基因检测的要求,同时结合产前诊断技术能有效预防耳聋患儿的出生,因而具有广阔的临床应用前景。; 张艳卞颖华许鹏飞黄辰飞曹新邢光前魏钦俊; 关键词：耳聋 GJB2基因线粒体DNA 基因芯片

一个母系遗传非综合征型耳聋家系线粒体12SrRNAG709A位点的突变分析被引量：2: 2009年; 目的通过对一个母系遗传非综合征型耳聋家系进行线粒体DNA（mitochondrialDNA，mtDNA）12SrRNA、tRNASer（UCN）以及核基因GJB2突变分析，研究mtDNA突变与遗传性耳聋的相关性。方法临床听力测试以明确诊断，收集非综合征型遗传性耳聋家系中18例母系成员和53名对照（包括6名父系亲属、7名配偶对照和40名当地无关对照）外周静脉血样本，采用聚合酶链反应和测序技术对mtDNA12SrRNA、浓NAser（UCN）和GJB2基因进行突变分析，并对发现的基因突变进行计算机辅助的二级结构模拟分析。结果测序结果表明，此家系线粒体DNA12SrRNA存在mtDNAG709A点突变，该突变未见报道；无tRNASer（UCN）基因突变；对GJB2突变分析发现4例具有299—300delAT。计算机分析显示12SrRNA的二级结构中第8、9茎环结构发生改变。结论家系中8例耳聋患者都具有线粒体12S水NAG709A位点的突变，该突变在正常人群中具有高度保守性，提示GT09A点突变与母系遗传家系成员的进行性耳聋具有相关性；10例具有G709A突变的母系遗传家系成员未出现耳聋的临床表现，提示G709A点突变可能在其他核修饰基因的协同作用下参与了听力损害的过程。; 魏钦俊鲁雅洁张艳陈智斌邢光前曹新; 关键词：母系遗传线粒体DNA RRNA

眼镜蛇毒因子耗竭补体对大鼠Thy-1肾炎凋亡病变及其Gadd45α基因表达的影响被引量：1: 2008年; 目的:研究眼镜蛇毒因子(CVF)耗竭体内补体对Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)凋亡病变及其生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45α(Gadd45α)基因表达的影响。方法:利用抗胸腺细胞抗血清(ATS)复制大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 N)模型。大鼠随机分为正常对照组、Thy-1 N组和CVF+Thy-1 N组。取各组大鼠血清检测补体CH50活性。另取各组大鼠肾皮质,行电镜和TUNEL染色检查判断其肾组织细胞凋亡的病理变化;用RT-PCR和real-time PCR检测大鼠肾组织凋亡相关基因,即Gadd45α mRNA丰度;用Western blotting检测Gadd45α蛋白表达水平。结果:CVF+Thy-1 N组补体CH50活性明显下降,与Thy-1 N组和正常对照组相比差异明显(P<0.01)。电镜和TUNEL染色观察到Thy-1 N组大鼠GMCs有凋亡病变,而CVF+Thy-1 N组凋亡病变则显著减轻。Thy-1 N组大鼠肾皮质Gadd45α mRNA 40min开始上调,3h达到峰值,而用CVF处理的Thy-1 N大鼠,Gadd45α mRNA丰度则明显低于Thy-1N组(P<0.01);Thy-1 N组Gadd45α蛋白水平3h时显著增多,而CVF+Thy-1 N Gadd45α蛋白水平明显低于Thy-1 N组(P<0.01)。结论:CVF耗竭补体可显著减轻大鼠Thy-1肾炎凋亡病变并抑制Gadd45α基因的表达。; 冯雪凤邱文高玲娟张艳王迎伟; 关键词：补体 THY-1肾炎肾小球系膜细胞凋亡

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张艳