张春燕
- 作品数：12 被引量：11H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌ClpP1重组蛋白的特性探讨及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的用纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)ClpP1重组蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价,间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性,以初步评价其应用价值。方法通过SDS-PAGE确定ClpP1重组蛋白的主要表达形式,利用纯化包涵体方式对重组蛋白进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价;再分别以纯化蛋白为抗原,制备抗体为一抗,间接ELISA法检测临床诊断结核病患者血清中抗M.tb抗体和M.tb抗原。结果 SDSPAGE显示ClpP1重组蛋白主要以包涵体表达形式存在,将纯化蛋白免疫新西兰白兔4次,取血测抗体效价为1∶64 000;Western blot结果显示制备抗体可较好的与ClpP1蛋白特异性结合;间接ELISA法结果表明,以重组蛋白为抗原测患者血清中抗M.tb抗体和以制备抗体为一抗测血清中的M.tb抗原的2实验组分别与对照组相比均具有显著性差异。结论制备了具有免疫原性的M.tb ClpP1重组蛋白及效价较高的多克隆抗体,并得出ClpP1多克隆抗体具有较好的免疫反应性,为进一步研究ClpP1重组蛋白的特性及其应用奠定了基础。
- 张春燕杨春李岱容穆柳青樊宇何永林
- 关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体
- Yes结合蛋白在喉癌中表达的临床意义及其分子机理的初步研究
- 目的:检测Yes结合蛋白(YAP)在喉鳞状细胞癌(LSCC)患者中癌组织及对应癌旁组织中的表达情况;探讨YAP表达量下降后对喉癌HEp-2细胞系细胞周期、迁移能力及对铂类药物的敏感性的影响。材料和方法:收集2008年5月...
- 张娜白楠张春燕胡怀东杨轶轩李丽王巍刘成虎向荣林鹏
- 文献传递
- 结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot法鉴定。结果PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达。
- 张继明杨春何永林穆柳青张春燕樊宇徐蕾
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
- 结核分枝杆菌ClpP1重组蛋白的特性探讨及初步应用
- 目的: 构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)中ATP依赖的酪氨酸蛋白酶蛋白水解亚基(ATP-dependent caseinolytic proteaseproteolyti...
- 张春燕
- 关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体间接ELISA法抗原反应性
- 佛波酯对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素表达的激活作用
- 2014年
- 目的探讨佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素(granulysin,GLS)表达的激活作用。方法分别用不同浓度的PMA(130、160、180 nmol/L)诱导THP-1细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中GLS基因mRNA的转录,筛选PMA最佳诱导浓度;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24和48 h,RT-PCR法检测GLS基因mRNA的转录,筛选最佳诱导时间;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24、48和72 h,Western blot法检测GLS蛋白的表达,免疫细胞化学法检测48 h时GLS蛋白的表达。结果以160 nmol/L的PMA诱导THP-1细胞24 h,细胞中GLS基因mRNA的转录水平最高;诱导48 h后可检测到GLS蛋白大量表达。结论 PMA可激活THP-1细胞中GLS的表达,本实验为后续进一步研究GLS表达的调控机制奠定了基础。
- 杨静杨春何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：佛波酯THP-1细胞颗粒溶素
- hsa-microRNA-218对颗粒溶素表达影响的探讨
- 2014年
- 目的:探讨hsa-microRNA-218(hsa-mir-218)对颗粒溶素(Granulysin,GLS)表达的影响。方法:抽提佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)激活的THP-1细胞的总RNA,逆转录后PCR扩增GLS基因,将其克隆至pDsRed-Express-C1,构建GLS表达质粒pDsRed-GLS。将pDsRed-GLS与pGenesil-mir-218(pGenesil-mir-control)共转染293T细胞,36 h后激光共聚焦显微镜观察两种质粒在细胞中的表达情况,48 h后提取细胞总RNA和蛋白,RT-PCR和Western blot检测hsa-mir-218对GLS表达的影响。结果:酶切和测序结果证实重组质粒pDsRed-GLS构建成功,且能与microRNA干扰质粒在293T细胞中共表达。与转染pGenesil-mir-control组细胞相比,Western blot结果显示转染pGenesil-mir-218组细胞GLS蛋白表达下降约50%,而GLS mRNA表达无明显变化。结论:hsa-mir-218在转录后水平干扰了GLS的表达,为进一步探讨mir-218干扰GLS表达的机制打下基础。
- 樊宇杨春张璐渝杨静何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：颗粒溶素T细胞RNA干扰激光共聚焦
- 结核分枝杆菌ClpC2蛋白的纯化、抗血清的制备及抗原性分析
- 2014年
- 目的:分别探索结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ClpC2蛋白和兔抗ClpC2多克隆抗体作为肺结核检测抗原或抗体的可行性。方法:诱导表达重组蛋白ClpC2(rClpC2);SDS-PAGE与Western blot鉴定rClpC2后利用亲和层析法进行纯化;纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot检测兔抗血清的特异性;双向免疫扩散法与酶联免疫吸附法(ELISA)测定兔抗血清效价;rClpC2通过间接ELISA进行抗原性的初步检测,兔抗ClpC2多克隆抗体通过间接ELISA检测肺结核病人血清中ClpC2抗原。结果:rClpC2经SDS-PAGE分析,在相对分子质量46 kD处可见特异性条带;Western blot分析rClpC2可与MTB H37Rv株感染的小鼠血清发生抗原抗体反应;经Bandscan分析rClpC2约占菌体总蛋白的58.7%,纯化后rClpC2的纯度为88.5%;Western blot验证兔抗血清可与卡介苗(Bacillus calmette-guerin,BCG)的ClpC2蛋白发生抗原抗体反应;双向免疫扩散法测定兔抗血清效价为1∶32,ELISA法测定兔抗血清效价为1∶320 000;rClpC2在检测肺结核病人中的检出率为46%,检测敏感性为46%,特异性为90%;兔抗ClpC2多克隆抗体在检测肺结核病人中的检出率为40%,检测的敏感性为40%,特异性为90%。结论:成功纯化结核分枝杆菌ClpC2蛋白,制备特异性兔抗ClpC2多克隆抗体,为进一步研究ClpC2蛋白的生物功能、ClpC2作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性及兔抗ClpC2多克隆抗体生物学功能提供实验基础。
- 穆柳青李岱容张春燕樊宇何永林杨春
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌Rv2460c基因的克隆,表达及编码产物的免疫特性分析被引量：1
- 2015年
- 目的:对结核分枝杆菌Rv2460c基因(编码Clp P2蛋白)进行克隆,表达,并评价其编码产物的免疫原性。方法:扩增结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Rv的Rv2460c基因,构建重组质粒p ET32a(+)-Clp P2,用IPTG诱导表达,利用亲和层析法进行纯化。用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白Clp P2的表达和鉴定。用生物信息学对Mtb Clp P2的免疫原性分析和表位预测。酶联免疫吸附法(ELISA)测定兔和TB病人血清anti-Clp P2滴度。结果:重组Clp P2蛋白酶在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经bandscan软件分析纯化蛋白的纯度为93%。生物信息学分析Mtb Clp P2蛋白具有多个优势B细胞表位和T细胞表位。ELISA法测定兔抗血清效价为1∶64 000;检测肺结核病人血清中anti-Clp P2抗体水平高于健康对照人群。结论:成功纯化了重组蛋白Clp P2和制备了特异性兔抗Clp P2多克隆抗体,实验和信息学均表明Mtb Clp P2蛋白酶有较强的免疫原性。
- 康月茜张春燕穆柳青卢楠杨春李岱容
- 关键词：结核分枝杆菌免疫原性
- 结核分枝杆菌ClpC2基因序列分析及功能预测被引量：2
- 2014年
- 目的对结核分枝杆菌的基因clpC2(Rv2667)的同源基因进行序列分析和相似性比较,并对其编码蛋白进行理化性质及功能的预测,为ClpC2蛋白的结构与功能研究提供基础技术资料。方法根据GeneBank中分枝杆菌clpC2同源基因的核苷酸序列,进行多重序列比对和进化树构建;应用ExPA Sy在线序列分析工具,对结核分枝杆菌ClpC2蛋白质理化性质及保守结构域进行预测;应用Gene ontology(GO)在线软件对ClpC2蛋白酶的功能进行分析。结果 clpC2系统进化树分析,与16 s rRNA基因相比,进化距离明显变大,而在结核分枝杆菌复合群中高度保守。ClpC2蛋白为亲水性非跨膜蛋白,在细胞质表达,具有水解和催化功能,是一个依赖于ATP的Clp亚单位。结论 clpC2基因在结核分枝杆菌复合群中高度保守,其编码的蛋白ClpC2是一个依赖于ATP的水解蛋白酶。
- 李岱容穆柳青张春燕杨春
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1基因的原核表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATP-dependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白。方法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中PCR扩增ClpP1基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,转化大肠埃希菌B21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约35 000,可与鼠抗His单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpP1蛋白在MTB中的生物学特性奠定了基础。
- 张春燕杨春李岱容穆柳青杨静冯鑫
- 关键词：结核分枝杆菌原核细胞
