孟金柱 作品数:14 被引量:31 H指数:4 供职机构: 山西农业大学动物科技学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 引进国际先进农业科技计划 山西省回国留学人员科研经费资助项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 文化科学 更多>>
外源性dsRNA对蛋鸡卵泡CART基因表达及雌激素和孕酮分泌的影响 被引量:5 2016年 旨在研究双链RNA(Double-stranded RNA,dsRNA)对海兰褐蛋鸡卵泡可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)基因表达及雌激素(Estrodiol,E2)和孕酮(Progestin,P)分泌的影响。选择60只20周龄海兰褐蛋鸡,全价日粮预饲30d后,随机平均分为3个处理组:对照组(A组)、dsRNA每5d注射1次(B组)、dsRNA仅第1天注射1次(C组);30d后每组各选择10只健康蛋鸡宰杀,分别采集3~5、6~8、9~12mm卵泡,提取总RNA进行qRT-PCR检测;并对E2和P浓度进行测定。结果显示:注射dsRNA后,处理组B和C组CART表达量与对照组相比均降低,且在6~8 mm卵泡CART表达量显著低于对照组(P〈0.05);B组注射dsRNA后,可显著提高6~8、9~12mm卵泡E2的分泌(P〈0.05);但各处理组对各卵泡P浓度无显著影响。表明体外静脉注射dsRNA可抑制蛋鸡卵泡CART的表达,并进一步通过促进卵泡细胞E2的分泌来影响卵泡的发育。 李鹏飞 孟金柱 于雪静 庞钰莹 杜海燕 李晓明 姚晓磊 赵妙妙 吕丽华关键词:蛋鸡 卵泡 CART 双链RNA 雌激素 孕酮 可卡因-苯丙胺调控转录肽对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响 被引量:10 2013年 研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stim-ulating hormone,FSH)诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素(E2)产生的影响。收集卵巢卵泡颗粒细胞,Long-term培养方法在不同CART、FSH浓度下培养7d,分别在培养48、96、144和168h后,在显微镜下观察各孔细胞生长情况;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定其雌激素浓度。培养液分别加入不同浓度FSH(5、25和50ng·mL-1),细胞培养168h后,雌激素浓度显著提高。当FSH浓度为5ng·mL-1时,培养液雌激素浓度最高为5 694.5±40.5pg·mL-1;当FSH浓度为5ng·mL-1,随着CART不同浓度的加入(0.01、0.10、1.00μmol.L-1),颗粒细胞雌激素的产生受到不同程度的抑制;在FSH浓度为25、50ng·mL-1水平下加入CART浓度为0.10μmol.L-1时,对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的抑制作用明显(P<0.01)。绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生需在FSH诱导下进行;CART对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生有抑制作用。 李鹏飞 岳文斌 黄洋 孙晋艳 李晓明 庞钰莹 于学静 贺俊平 孟金柱 任有蛇 吕丽华关键词:绵羊 促卵泡素 颗粒细胞 雌激素 绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养中促卵泡素和胰岛素浓度优化研究 被引量:3 2012年 为了进一步探讨在无血清体外培养条件下,促卵泡素(FSH)和胰岛素对绵羊卵巢颗粒细胞的影响,以优化颗粒细胞体外培养体系。试验设计6个FSH浓度梯度和3个胰岛素浓度梯度。体外培养7d后,检测培养体系中颗粒细胞数和雌激素浓度。与对照组相比,培养液中添加FSH与胰岛素可显著提高颗粒细胞的增殖和雌激素的分泌(P<0.01);且随着FSH浓度的增加,颗粒细胞数和雌激素分泌量显著增加,当FSH浓度为5.0μg·L-1时,雌激素分泌量最高;随着胰岛素浓度增加,颗粒细胞数和雌激素分泌量显著增加,当胰岛素浓度为10μg·L-1时,颗粒细胞数和雌激素分泌量最高。 庞钰莹 岳文斌 于雪静 李鹏飞 孟金柱 刘岩 李晓明 黄洋 任有蛇 吕丽华关键词:FSH 胰岛素 颗粒细胞 绵羊 CART和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响 2013年 为了研究CART和胰岛素对颗粒细胞的作用机制,实验采用细胞培养液中梯度量添加CART和胰岛素的方法,以探究CART对颗粒细胞增殖和E2分泌的影响。研究发现CART对颗粒细胞增殖和E2分泌有抑制作用,而胰岛素有促进作用。当CART1ng/mL且无胰岛素时,颗粒细胞和E2分泌量最小;胰岛素10ng/mL且无CART时,颗粒细胞和E2分泌量最大。 李晓明 岳文斌 孟金柱 刘岩 于雪静 庞钰莹 黄洋 吕丽华关键词:CART E2 胰岛素 颗粒细胞 卵泡发育相关基因在牛优势和从属卵泡颗粒细胞中表达的研究 被引量:3 2014年 旨在探究卵泡发育相关基因在牛发情周期内第一卵泡波中优势卵泡(Dominant follicles,DF)和从属卵泡(Subordinate follicles,SF)颗粒细胞中表达差异,进而筛选影响牛卵泡发育的相关基因。通过GEO数据库与基因功能分析筛选与牛卵泡发育相关基因,采用qRT-PCR检测牛第一卵泡波DF和SF颗粒细胞中各基因的表达差异。结果显示:筛选出6个候选基因(SFRP2、CPEB1、PRKAG2、MAPK8、PPP2R2A和PRSS23)与牛卵泡发育有关;qRT-PCR检测,CPEB1在DF中的表达量极显著高于SF(P<0.01),PRKAG2在DF中的表达量显著高于SF(P<0.05);SFRP2和MAPK8在SF中的表达量极显著高于DF(P<0.01);PPP2R2A和PRSS23虽然在DF和SF的表达量存在倍数关系,但差异并不显著。综上表明,在牛卵泡发育过程中,CPEB1和PRKAG2促进卵泡发育,SFRP2和MAPK8对卵泡的发育可能有抑制作用。 姚晓磊 李鹏飞 姜晓龙 孟金柱 黄洋 刘岩 陈建伟 赵妙妙 吕丽华关键词:卵泡发育 基因 胰岛素对体外培养猪卵巢卵泡颗粒细胞生长及增殖的影响 被引量:1 2014年 试验添加不同浓度的胰岛素,检测对颗粒细胞增生和雌激素分泌的影响。培养7d,检测雌激素的浓度和细胞数目。结果表明,随着胰岛素浓度的增加,颗粒细胞的数目和雌激素的分泌量明显提高,当胰岛素的浓度为100ng/mL时,颗粒细胞的数量达到最大值,当胰岛素的浓度达到10ng/mL,卵巢卵泡颗粒细胞分泌雌激素的浓度达到最大值。 刘岩 姜小龙 陈建伟 孟金柱 黄洋 吕丽华关键词:胰岛素 卵泡颗粒细胞 牛卵泡ODF1与ODF2转录组发育相关基因筛选及表达差异分析 被引量:5 2015年 旨在从牛发情周期第一卵泡波中最大卵泡ODF1(The largest follicle at onset of deviation)和第二大卵泡ODF2(The second largest follicle at onset of deviation)转录组水平上筛选卵泡发育差异表达基因。采集牛发情周期第一卵泡波ODF1和ODF2,分别分离颗粒细胞并提取总RNA,构建RNA文库,通过Illumina平台对ODF1和ODF2测序;筛选出ODF1与ODF2两个转录本之间比值大于2的差异表达基因,并采用qRT-PCR对筛选出的基因在牛发情周期内第一卵泡波优势卵泡(Dominant follicles,DF)和从属卵泡(Subordinate follicles,SF)颗粒细胞中功能验证。共获得8个卵泡发育差异表达基因,其中7个基因筛选自ODF1/ODF2(BEX2、UBN1、SIK1、SPARCL1、LOC784256、LOC789231和LOC785462),1个筛选自ODF2/ODF1(SAFB2);qRT-PCR结果表明,BEX2、UBN1、LOC784256和LOC789231在DF中mRNA表达量极显著高于SF(P<0.01),SAFB2在SF中mRNA表达量极显著高于DF(P<0.01),SIK1和SPARCL1在SF中mRNA表达量显著高于DF(P<0.05),虽然LOC785462在SF中mRNA表达量高于DF,但差异不显著(P>0.05)。qRT-PCR检测BEX2、UBN1、LOC784256、LOC789231和SAFB2的结果与高通量测序中该基因在ODF1和ODF2的RPKM的差异趋势基本一致,而SIK1、SPARCL1和LOC785462不一致。 李鹏飞 孟金柱 谢建山 朱芷葳 刘岩 姜晓龙 陈建伟 姚晓磊 赵妙妙 吕丽华关键词:转录本 卵泡发育 基因 用于神经肽受体筛选的方法 本发明公开了一种用于神经肽受体筛选的方法,依据统计学原理,要求基因组测序结果FDR校正后的P<0.05,基因差异表达倍数的选择依据是配体‑受体结合产生的效应强度与占领受体的数量成正比;采用蛋白同源建模技术建立蛋白模型;综... 李鹏飞 吕丽华 谢建山 孟金柱 刘岩 姚晓磊 赵妙妙 景炅婕 毕锡麟 王锴文献传递 牛卵泡可卡因-苯丙胺调节转录肽候选受体的筛选 2017年 [目的]本研究旨在筛选牛卵泡可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocnine-and amphetamine-regulate transcript,CART)候选受体。[方法]首先对牛卵泡转录组深度测序所获得的35 325个表达基因进行筛选,选出ODF1/ODF2(发情周期第一卵泡波的最大卵泡/第二大卵泡)趋近于无穷大的部分和比值在1.5~2.0之间的部分基因,找出它们的gene symbol,然后利用NCBI和CELLULAR进行亚细胞定位,最后利用跨膜螺旋软件进行α跨膜螺旋区预测,从中筛选出含有7个α螺旋跨膜区的膜蛋白,进而筛选出CART的候选受体。[结果]通过差异表达基因的筛选、亚细胞定位和跨膜螺旋区预测最终获得了11个高表达基因,并根据筛选出的23个G蛋白偶联受体的结构和功能,结合神经肽受体的特征,找出了4个G蛋白偶联受体作为CART的候选受体。[结论]最终将AGTR2、HTR2B、S1PR1、S1PR2作为CART的候选受体,为以后进一步研究奠定了基础。 王锴 孟金柱 李鹏飞 毕锡麟 景炅婕 张子宁 吕丽华关键词:CART 表达基因 免疫共沉淀筛选牛卵泡CART相互作用蛋白的研究 被引量:1 2015年 旨在研究牛卵泡发育过程中可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)相互作用蛋白(Protein-protein interaction,PPI)。选择4头10月龄同期发情的健康母牛,B超检测卵泡达8~12mm,屠宰并采集、分离卵泡颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)后,进行总蛋白提取,兔抗CART一抗沉淀CART及其相互作用蛋白,经Protein G-Agarose磁珠吸附分离,多次洗涤去除盐分和杂蛋白,洗脱蛋白复合体并酶解,LC-ESI-Q-TOF质谱分析(Mass spectrometry,MS)及数据库比对。结果显示:共鉴定蛋白质组分111个;经Cytoscape V3.1.0分析,有81个蛋白符合功能模块,并构建蛋白相互作用网络图;同时对相互作用蛋白进行功能富集性分析,共分为3大类34组:其中分子功能占11.73%,生物学过程占46.93%,细胞组分占41.34%。α2巨球蛋白(A2M)和波形蛋白(VIM)与CART相互作用的相关系数最大;CART与NALP1、SERPINH1和PDIA6具有负调控应答的功能,提示可能参与牛卵泡发育过程的调控。 李鹏飞 孟金柱 刘岩 黄洋 陈建伟 姜晓龙 曹霞 姚晓磊 赵妙妙 吕丽华关键词:CART 免疫共沉淀 质谱分析 相互作用