夏俊保
- 作品数：5 被引量：33H指数：4
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 重组猪干扰素α的纯化工艺研究被引量：7
- 2010年
- [目的]研究重组猪干扰素α的纯化工艺,为进一步研究该蛋白的分子结构及rPoIFN-α标准品的制备奠定基础。[方法]将含重组菌E.coliBL21诱导表达后得到的粗制rPoIFN-α,分别用2种方案进行纯化。方案1,依次用GST亲和层析法、DEAE阴离子交换法及分子筛法层析三步法进行纯化;方案2,依次用GST亲和层析和分子筛法层析两步法进行纯化。纯化结果用SDS-PAGE及Western-blot进行纯度检测及鉴定。[结果]诱导表达后的表达产物经SDS-PAGE检测,发现在45Kd分子量处有目的条带,Western-blot检测有特异性条带。通过两步法纯化后的rPoIFN-α纯度达96%,蛋白得率为42.8%,三步纯化纯度为98.8%。[结论]两步法得到的蛋白纯度非常接近三步法,但与三步法相比工艺更为简单方便。
- 苏世云夏俊保赵俊吴琼王明丽
- 关键词：重组蛋白猪Α干扰素层析
- 病毒性脑炎患儿脑脊液病毒核酸检测及临床分析被引量：6
- 2009年
- 目的了解合肥地区儿童病毒性脑炎的病原构成及不同年龄组患儿临床表现差异。方法将53例病毒性脑炎患儿根据年龄分为A组(<3岁)、B组(3岁～6岁)及C组(>6岁)3组。(1)采用PCR法检测脑脊液常见病毒核酸,包括肠道病毒(EV)、单纯疱疹病毒(HSV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)和人巨细胞病毒(HCMV)。(2)分析不同年龄组临床表现特点。结果(1)32例核酸检测阳性(60.38%),其中EV 23例(43.40%),HSV 8例(15.09%),HCMV 1例(1.89%),未检出VZV。(2)A、B两组中有惊厥者明显多于C组(P<0.01),C组以头痛为早期症状者23例(85.19%),而A、B两组分别只有1例和4例(P<0.01)。HSV脑炎惊厥发生明显多于其他病毒性脑炎。结论证实合肥地区儿童病毒性脑炎病原以EV和HSV为主,HSV脑炎临床症状较严重,提示临床应加强病毒性脑炎病原检测工作,而PCFR检测患儿脑脊液中特异性病毒核酸片段符合临床快速、特异诊断要求。
- 陈伟刘晓静崔寰夏俊保陈敬贤王明丽
- 关键词：儿童聚合酶链反应
- 猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定被引量：11
- 2009年
- 目的构建稳定、高效表达的重组猪α干扰素(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的蛋白,进行生物学活性检测。方法提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coliBL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价。结果重组质粒pGEX-5X-1/poIFN-α经过EcoRⅠ和XhoⅠ限制性酶切后可见501bp的目的片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致。转化入E.coliBL21中32℃条件下经IPTG诱导5h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带。效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg。结论成功克隆了poIFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α。
- 夏俊保赵俊汤仁树崔寰陈伟王明丽
- 人巨细胞病毒与动脉粥样硬化的相关性研究进展被引量：3
- 2009年
- 夏俊保段巧建王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒动脉粥样硬化细胞黏附因子脂质代谢凋亡
- 人巨细胞病毒感染与系统性红斑狼疮病情活动性的关联性研究被引量：8
- 2008年
- 目的探索人巨细胞病毒(HCMV)感染与系统性红斑狼疮(SLE)病情活动之间的关系。方法采用病毒分离、聚合酶链式反应(PCR)检测HCMVUL54基因和间接免疫荧光试验(IFA)检测HCMVpp65抗原的方法,对49份SLE患者血白细胞标本进行HCMV分离鉴定,并结合临床资料分析HCMV感染与SLE病情活动的相关性。结果49份SLE患者血白细胞标本中,HCMV病毒分离后出现典型细胞病变的有3份,经PCR和IFA联合检测鉴定阳性的有12份,阳性率为24.5%;Logistic回归分析显示,SLE活动期患者的HCMV感染率为38.5%,显著高于SLE非活动期患者8.7%的HCMV感染率(OR=8.7,95%CI:1.4～53.3,P=0.019)。结论HCMV感染与SLE病情活动呈现显著正相关。
- 崔寰陈伟夏俊保刘倩黄维李迎伟王明丽
