陈伟
- 作品数：17 被引量：74H指数：6
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金安徽高校省级自然科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 病毒性脑炎患儿脑脊液病毒核酸检测及临床分析被引量：6
- 2009年
- 目的了解合肥地区儿童病毒性脑炎的病原构成及不同年龄组患儿临床表现差异。方法将53例病毒性脑炎患儿根据年龄分为A组(<3岁)、B组(3岁～6岁)及C组(>6岁)3组。(1)采用PCR法检测脑脊液常见病毒核酸,包括肠道病毒(EV)、单纯疱疹病毒(HSV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)和人巨细胞病毒(HCMV)。(2)分析不同年龄组临床表现特点。结果(1)32例核酸检测阳性(60.38%),其中EV 23例(43.40%),HSV 8例(15.09%),HCMV 1例(1.89%),未检出VZV。(2)A、B两组中有惊厥者明显多于C组(P<0.01),C组以头痛为早期症状者23例(85.19%),而A、B两组分别只有1例和4例(P<0.01)。HSV脑炎惊厥发生明显多于其他病毒性脑炎。结论证实合肥地区儿童病毒性脑炎病原以EV和HSV为主,HSV脑炎临床症状较严重,提示临床应加强病毒性脑炎病原检测工作,而PCFR检测患儿脑脊液中特异性病毒核酸片段符合临床快速、特异诊断要求。
- 陈伟刘晓静崔寰夏俊保陈敬贤王明丽
- 关键词：儿童聚合酶链反应
- HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定
- 2014年
- 目的选用人巨细胞病毒(HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒,诱导其表达,纯化目的蛋白;并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列,设计合理引物;各基因片段用Overlap方法连接,并引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,使之可通过酶切与质粒pQE-80L连接。重组质粒转化入感受态BL21(DE3)菌株,经PCR、酶切鉴定目的基因后再诱导、表达、纯化,获得目的蛋白,采用Western blot法检测免疫反应性。结果诱导后的重组菌pQE80-L-UL32-UL44-UL83经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52 ku的目的蛋白,采用Western blot法检测证实重组嵌合抗原能与HCMV阳性血清有反应。结论构建了重组嵌合抗原表达质粒,并诱导、表达、纯化获得目的蛋白。Western blot法鉴定嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性。
- 曾宪聪汪小五陈伟王林定
- 关键词：人巨细胞病毒免疫反应性
- 两种细胞株检测重组犬α-干扰素效价的比较被引量：1
- 2009年
- 本研究采用人羊膜细胞WISH株和人喉癌上皮细胞Hep-2株,以微量细胞病变抑制法(CPE抑制法)对同批次的8组重组犬α干扰素样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所使用的标化重组人α干扰素为标准,将在两株细胞上所测结果进行比较。其检测的结果具有很好的相关性(r=0.9976,p>0.05),并且重复性较好。用结晶紫染色法评价干扰素效价能够准确地反应细胞的状态,所得结果准确、客观。表明Hep-2与WISH细胞测定结果没有差异,该方法可用于重组犬干扰素制品的效价测定。此外本研究还测定了最适试验条件如细胞浓度、接种用病毒滴度、加样方法等。
- 胡勇俞海洋刘伯玉赵俊汤仁树陈伟沈杭梅杨王明丽
- 关键词：效价HEP-2细胞
- 肺炎支原体P1蛋白的制备及其应用的初步研究被引量：2
- 2014年
- 目的研究肺炎支原体(MP)特异性抗原免疫反应性及检测合肥地区138份儿童血清样本感染MP的情况,并初步分析其危险因素。方法构建含r P1-513基因的克隆和表达质粒分别命名为T-r P1-513和PQE-80L-r P1-513。诱导PQE-80L-r P1-513重组菌蛋白表达。Western blot法检测其免疫反应性和ELISA法筛选血清样本感染MP的阳性标本。结果 Western blot法检测约30 ku的r P1-513蛋白有免疫反应性。ELISA法筛选出34份阳性血清,同时用商业MP ELISA试剂盒检测出24份阳性血清,两种P1蛋白作为抗原ELISA检测法检出率分别为24.6%和17.4%,且两个检出率差异有统计学意义(P<0.05)。MP感染与C-反应蛋白有显著相关性,但与性别、年龄、白细胞无相关性。结论初步证明r P1-513蛋白具有免疫反应性,且以此蛋白构建的ELISA法有较高的灵敏度和特异性,为临床诊断MP提供一定的帮助。
- 汪小五曾宪聪陈伟王林定
- 关键词：肺炎支原体儿童
- 肠道病毒71型六安地区分离株VP1基因的生物信息学分析及B细胞表位预测被引量：10
- 2012年
- 目的对肠道病毒71型(EV71)VP1基因编码衣壳蛋白进行系统结构与功能预测,为制备EV71疫苗和诊断抗原的研究提供理论基础。方法基于编号为1404-Luan(CHN)-08的EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白的氨基酸序列,应用ProtParam、SigalP、TMPRED、Sosui、SOPMA、Phyre、Bepipred等生物信息学方法预测其信号肽、跨膜区、疏水性、二级结构、三级结构等性质和潜在的B细胞表位。结果 EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白没有信号肽,无跨膜区,是一个亲水性蛋白;VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,含有少量的α-螺旋,少见β-转角;VP1的三级结构中4～121氨基酸部分在蛋白表面形成一环状结构(VPl GH loop);EV71 VP1潜在的B细胞表位共有6个可能的抗原表位。其中,预测分值最高的线性表位区域位于157～177位氨基酸残基。结论成功预测了EV71六安地区分离株VP1二级结构、三级结构和B细胞表位,为制备EV71基因工程疫苗和诊断抗原的开发提供了理论基础。
- 俞海洋陈伟倪德群常宏伟王林定汤仁树陈灵芝丁晓娟陈敬贤王明丽
- 关键词：肠道病毒71型VP1B细胞表位
- 曲克芦丁微乳的处方筛选及含量测定被引量：2
- 2015年
- 目的筛选亲水性药物曲克芦丁油包水型口服微乳的最佳处方,考察其形态、粒径大小、稳定性,并建立其含量测定方法。方法利用伪三元相图,以微乳形成区域大小为指标,筛选制备微乳的最佳处方。采用高效液相色谱法测定微乳中药物含量。结果筛选出的最佳处方是大豆磷脂/无水乙醇/肉豆蔻酸异丙酯/纯化水=23.30∶11.67∶52.45∶12.59。所制得的微乳外观圆整,大小分布均匀,平均粒径为50.20 nm,具有良好稳定性。结论大豆磷脂/无水乙醇/肉豆蔻酸异丙酯/纯化水体系将曲克芦丁成功包载于水相,有望为曲克芦丁口服给药提供一种有效的新剂型。
- 许曼余庆赵倩茹陈伟林元节金涌
- 关键词：曲克芦丁伪三元相图微乳
- 小鼠白介素17基因的克隆、表达及其活性鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的通过基因工程技术获得有活性的重组小鼠白介素17(rmIL-17)蛋白,为研究IL-17的生物学作用及其作用机制提供基础。方法用RT-PCR技术得到小鼠IL-17编码基因,将其克隆入原核表达载体pET32a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过亲和层析得到纯化的rmIL-17蛋白,免疫家兔,制备多抗,Westernblot和酶联免疫吸附实验鉴定该蛋白免疫原性;用该蛋白进行体外细胞刺激实验、体内中性粒细胞招募实验鉴定蛋白的生物学活性。结果成功构建了重组质粒pET32a-mIL17并在大肠杆菌中表达。过柱得到纯化的rmIL-17蛋白,Westernblot和酶联免疫吸附实验证实其具有良好的免疫原性;体外细胞刺激实验显示该蛋白可刺激小鼠3T3成纤维细胞产生白介素6(IL-6)且具有量效关系;体内细胞招募实验显示纯化的rmIL-17蛋白具有招募中性粒细胞的作用。结论小鼠IL-17基因在体外成功表达,且表达的重组蛋白具有明显的生物学活性。
- 王金萍王萍吴昊刘淼张玉侠陈伟沈际佳邓松华
- 关键词：白细胞介素17基因表达
- 猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定被引量：11
- 2009年
- 目的构建稳定、高效表达的重组猪α干扰素(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的蛋白,进行生物学活性检测。方法提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coliBL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价。结果重组质粒pGEX-5X-1/poIFN-α经过EcoRⅠ和XhoⅠ限制性酶切后可见501bp的目的片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致。转化入E.coliBL21中32℃条件下经IPTG诱导5h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带。效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg。结论成功克隆了poIFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α。
- 夏俊保赵俊汤仁树崔寰陈伟王明丽
- KSHV K15蛋白多克隆抗体的制备及其初步鉴定
- 2016年
- 目的制备卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15蛋白多克隆抗体,并将其应用于细胞内K15蛋白的检测。方法选择K15基因第8个外显子(K15P_(ex8))序列做为模板,构建K15P_(ex8)的表达载体p QE-80L-K15P_(ex8)。诱导重组菌蛋白表达,免疫新西兰兔,制备抗K15P_(ex8)多克隆抗体,并用间接ELISA法测定抗体效价。将p FJ和p FJ-K15P两种重组质粒分别转入HEK 293T细胞,用Western blot法检测抗K15P_(ex8)多克隆抗体对K15P-Flag蛋白的识别。结果由K15P_(ex8)制备的抗K15P_(ex8)多克隆抗体效价大于1∶6 400,能特异性识别重组质粒p FJ-K15P转染293T细胞产生的K15P-Flag融合蛋白。结论初步证明K15P_(ex8)蛋白有免疫反应性,该多克隆抗体可用于重组的K15P-Flag融合蛋白的检测。
- 陈伟方圆汪小五许常青朱晨辰杨宇张龙龙王林定
- 关键词：多克隆抗体
- 甘肃省敦煌地区普通人群卡波肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学分析被引量：5
- 2017年
- 目的研究卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在甘肃敦煌地区普通人群中的血清阳性率,并分析KSHV感染的危险因素。方法随机收集1 000例敦煌地区普通人群血清,以KSHV 3个基因片段orf65、orf73、orf k8.1编码蛋白为抗原,间接ELISA检测样本中KSHV抗体,SPSS软件分析危险因素。结果 1 000份血清中,KSHV抗体总阳性率为19%,男性阳性率(22.9%)高于女性(16.6%)(P=0.016);KSHV感染与梅毒螺旋体(P=0.004)和丙肝病毒(P=0.027)感染间有相关性,而与年龄、乙肝五项无关。多因素Logistic回归分析显示梅毒螺旋体感染的OR(95%CI)为10.142(1.920~53.577)。结论甘肃敦煌地区普通人群中KSHV的感染率较高,且与性别有关;梅毒螺旋体感染是该地区KSHV感染最重要的独立危险因素。
- 方圆许常青周畅陈伟王林定
- 关键词：血清阳性率
