喻志红
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- P253R突变型FGFR2Ⅲc胞外段的表达、复性及活性研究(英文)
- 2011年
- 成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)具有促进细胞增殖,诱导新生血管形成等重要生理作用,与肿瘤的发生及发展也有十分密切的关系。P253R是Apert综合症中发现的一种突变,可使FGFR2IIIc与FGF2亲和力大大增加,从而导致过度自分泌和旁分泌活性,引起骨骼发育异常。从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到野生型FGFR2IIIc胞外段基因片段(wsFGFR2);再利用重叠延伸法以wsFGFR2基因片段为模板扩增得到P253R突变型FGFR2IIIc胞外段基因片段(msFGFR2,P253R是Apert综合征中发现的一种突变,可使FGFR2与FGF2亲和力大大增加)。msFGFR2基因克隆到pET3c载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式表达。经凝胶层析复性和肝素亲和层析纯化得到复性成功的活性蛋白,复性率为12%,纯度大于95%。MTT结果表明,msFGFR2能显著抑制FGF2促NIH3T3细胞增殖能力,并抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,提示msFGFR2能有效阻断FGFs的细胞内信号通路,具有很好的产业化和临床应用前景。
- 刘雪婷喻志红何水连陈安安王丁丁何颖张志成汪炬
- 关键词：包涵体复性
- sFGFR1Ⅲc的原核表达及其抑制NIH3T3增殖的作用
- 2012年
- 目的:克隆sFGFR1Ⅲc胞外段进行原核表达和纯化。方法:将sFGFR1Ⅲc胞外段基因转入pET3c载体后转化BL21工程菌,以包涵体形式表达胞外段。经凝胶层析法复性(复性率为20%)和肝素亲和层析纯化后得到纯度95%以上的目的蛋白。通过电泳鉴定其纯度以及MTT法检测其生物学活性。结果:成功获得大小为660bp的人sFGFR1Ⅲc基因片段,转化菌诱导表达了24kDa的sFGFR1Ⅲc胞外段并通过MTT证实它对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的增殖具有明显的抑制作用,其抑制FGF2引起的细胞增殖呈剂量依赖性,其中作用最为明显的是80ng/ml。结论:成功获得了高纯度的sFGFR1Ⅲc胞外段,该胞外段具备较好的生物学活性,为下一步的研究工作奠定了良好的物质基础。
- 何水连喻志红陈安安朱保伟黄钦孙莉汪炬
- 关键词：原核表达复性胞外段
