周秀敏
- 作品数：7 被引量：65H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
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- 肝硬化高同型半胱氨酸血症与 MTHFR 基因 C667T 多态性的关系被引量：4
- 2005年
- 目的 研究肝硬化血浆同型半胱氨酸(HCY)水平及其与 N^2，N^(10)-亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因多态性的关系。方法 采用柱前衍生化 HPLC 方法检测112例健康对照者、87例肝硬化 患者血浆同型半胱氨酸的水平，用多聚酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性技术(PCR-RFLP)检测 其 MTHFR 基因 C667T 多态性。结果 健康对照组平均血浆 HCY 浓度为(8．34±3．59)μmol/L，肝硬化组 平均血浆 HCY 浓度为(21．71±4．85)μmol/L。与健康对照组相比，肝硬化组血浆 HCY 水平显著升高，差 异有统计学意义(P＜0．01)。PCR-RFLP 检测结果发现 MTHFR 基因型有3种，即纯合子突变 TT(+/+)型， 杂合子突变 TC(+/ )型，正常 CC(-/-)型。肝硬化组中+/+型、+/ 型和 / 型频率分别为29．9%、52．9%、 17．2％；健康对照组分别为19．6%、33．9%、46．4%，两组差异有统计学意义。肝硬化组 MTHFR 基因突变 无论是纯合子还是杂合子突变基因型，其血浆 HCY 水平均明显高于正常基因型。结论 高同型半胱氨酸 血症可能是肝硬化的一个危险因素，血浆 HCY 水平可作为肝硬化的一个辅助诊断指标，MTHFR 基因 C667T 多态性可能是肝硬化高同型半胱氨酸血症的易感基因之一。
- 周秀敏林菊生孙雪梅唐望先张文英袁顺玉艾莉
- 关键词：肝硬化高同种半胱氨酸血症
- 乙型肝炎病毒RNA上La蛋白结合位点缺失对S基因mRNA稳定性的影响被引量：4
- 2006年
- 目的研究乙型肝炎病毒(HBV):RNA上La蛋白结合位点的缺失对S基因mRNA在细胞内稳定性的影响,评价HBV RNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点。方法构建HBV突变载体, 使其转录出来的HBV RNA缺失La蛋白结合位点;计算机预测突变后这个位点所在的HBV RNA片段的二级结构;将未突变的HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染HepG2细胞;半定量逆转录聚合酶链反应法检测HBV S基因的 mRNA,酶联免疫吸附法检测乙型肝炎表面抗原。结果酶切鉴定和测序证明,成功构建了La蛋白结合相关位点部分碱基缺失的HBV突变载体——pHBV—mLa;突变后的HBV RNA二级结构同突变前的比较,完全改变;转染细胞后半定量逆转录聚合酶链反应法检测发现,突变后HBV S基因的mRNA水平显著降低(t'=12．703,P<0．05);酶联免疫吸附法检测发现突变引起乙型肝炎表面抗原表达明显下调(f=4_4．648,P<0．01)。结论HBV RNA上La蛋白的结合位点以及局部特殊二级结构的形成,影响着自身转录后的稳定性,对于HBV的生命周期至关重要。
- 林园园林菊生谢娜周秀敏宋宇虎
- 关键词：LA蛋白
- DNA损伤修复与肿瘤的关系被引量：18
- 2003年
- 多种物理或化学因素如紫外线、电离辐射、化学诱变剂等可损伤细胞DNA。 8 羟基鸟嘌呤 (oh8Gua)是DNA氧化损伤的代表性产物 ,是肿瘤发生和发展的重要因素 ,因此oh8Gua的修复基因 8 羟基鸟嘌呤糖苷酶 (hOGG1)与个体癌症易感性密切相关。
- 周秀敏林菊生
- 关键词：肿瘤8-羟基鸟嘌呤8-羟基鸟嘌呤糖苷酶
- 肝细胞癌DNA修复酶hMTH1基因mRNA及其蛋白的表达被引量：3
- 2004年
- 目的:通过检测DNA修复酶hMTH1 mRNA及其蛋白在肝细胞癌组织及细胞株中的表达,探讨hMTH1在肝细胞癌发生、发展及防御机制中的作用. 方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究肝癌(HT,n=33)、癌旁组织(HST,n=33)和正常肝细胞株(L-02)、肝癌细胞株(SMMC772 1,HepG2)中hMTH1 mRNA的表达,同时采用免疫组织化学方法原位检测了上述的肝癌组织(n=17)及癌旁组织(n=17)中hMTH1蛋白的表达. 结果:绝大部分检测对象中均有不同程度hMTH1 mRNA及其蛋白的表达.肝癌组织中hMTH1 mRNA的表达较癌旁组织显著升高(t=2.424,P=0.021<0.05);SMMC7721, HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达显著高于L-02细胞(F=6.810,P=0.009<0.01).SMMC7721与HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达没有显著差异(P=0.395>0.05). hMTH1蛋白主要在肝细胞胞质中表达,肝癌组织中hMTH1 蛋白水平明显高于癌旁组织(f=2.618,P=0.019<0.05). 结论:hMTH1mRNA及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞株中表达升高.
- 周鹤俊林菊生周秀敏黎培员陶璐薇
- 关键词：RNA肝癌组织癌旁组织SMMC7721DNA修复酶基因
- 靶向遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体的构建及鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的构建并鉴定针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体。方法根据PEG10基因cDNA序列,设计针对目的基因的4个siRNA靶序列,将其插入H1启动子下游,克隆到真核表达载体psiRNA-hH1neo中,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论本研究成功构建针对PEG10的真核表达载体,可能成为肝癌基因治疗中的一种新型、高效的治疗载体。
- 黄锦林菊生常莹周秀敏
- 关键词：PEG10SIRNA真核表达载体
- 肝细胞癌hOGG1 mRNA及其蛋白的表达被引量：7
- 2004年
- 目的:通过检测DNA修复酶hOGGlmRNA及其蛋白在肝细胞癌中表达程度,探讨hOGGl在肝细胞癌发生、发展中的作用.方法:应用RT-RCR研究正常肝细胞株L-02、肝癌细胞株SMMC7721,HepG2和肝癌(26例)及癌旁组织(21例)中hOGGlmRNA的表达,同时用免疫组织化学方法检测了上述肝癌组织(17例)及癌旁组织(15例)中hOGGl蛋白的表达.结果:三株细胞均有hOGGlmRNA表达,但hOGGlmRNA在正常肝细胞株L-O2中的表达显著低于肝癌细胞株SMMC7721、HepG2中的表达(分别为0.270±0.014,0.66±0.011,0.624±0.020,P<0.05).肝癌组织hOGGlmRNA表达较癌周组织明显降低(P<0.05).HOGGl蛋白肝组织表达阳性率为87.2%,主要在肝细胞胞质表达,在肝癌组织中表达比癌周组织明显降低(P<0.05).结论hOGGlmRNA及其蛋白在肝癌细胞株及癌周组织中表达量升高。
- 周秀敏林菊生章金艳张莉周鹤俊
- 关键词：肝细胞癌HOGG1MRNA蛋白表达肿瘤
- 肝癌组织中遗传印记基因PEG10表达的特异性及其意义被引量：29
- 2005年
- 目的:研究PEG10在肝癌组织中表达的特异性,为其作为一个潜在的肝癌基因治疗的新的分子靶点提供实验依据.方法:从来自不同器官组织的肿瘤细胞系(人肝癌细胞株HepG2、人胃癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3、人黑色素瘤细胞株A375、人T淋巴瘤细胞株Jurkat)、正常人胎肝细胞株L02、32例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织、10例良性肝病患者肝组织、10例正常人外周血单个核细胞中抽提总RNA,经RT逆转录合成cDNA,再以PCR方法检测PEG10的表达.同时,肝癌组织和癌旁组织标本经RT-PCR检测AFP的表达.结果:经RT-PCR扩增的PEG10基因片段为455bp,AFP基因的扩增片段为140bp,与原设计一致;PEG10在人肝癌细胞株HepG2中明显表达,人胃癌细胞株SGK7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3中弱表达,而正常人胚胎肝细胞株LO2和其他肿瘤细胞株(人T淋巴细胞瘤、人黑色素瘤)中表达均为阴性雇32例肝癌及相应癌旁组织中,PEG10的表达阳性率分别为78.1%和0%;而AFP基因的阳性率分别为93.8%和59.4%.经McNemar检验,显示PEG10基因在肝癌组织中表达的敏感性与AFP表达敏感性之间无显著性差异(X20.01,1=1.78,P>0.05);而癌旁组织中PEG10表达率(0/32)明显低于AFP表达率(19/32)(X20.01,1=17.05,P<0.01).另外10例良性肝病患者(肝硬化4例,自身免疫性肝病2例,肝血管瘤2例,丙型肝炎1例,血色素病1例)肝组织标本及正常人的外周血细胞进行PEG10基因检测,结果均为阴性.结论:PEG10的表达不但具有比AFP更高的肝癌组织特异性,而且具有相对器官组织特异性.本实验为PEG10作为一个新的肝癌标志物和基因治疗的分子靶点提供了实验依据.
- 常莹陶璐薇陈孝平周秀敏宋宇虎黄锦张琼林菊生
- 关键词：肝癌组织特异性基因治疗
