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肝癌的基因靶向治疗被引量：1: 2008年; 从遗传学的角度来讲，肝癌与其他恶性肿瘤一样是一种复合基因病，其涉及的基因包括：癌基因、肿瘤抑制基因、细胞周期调节基因、细胞凋亡基因以及维持细胞基因组稳定性的基因等。有鉴于此，针对病变基因的基因靶向治疗成为肝癌领域中的研究热点。目前开展的肝癌基因靶向治疗的策略包括：自杀基因治疗、免疫基因治疗、导入抑癌基因、抗肿瘤血管生成和转移、核酶以及RNA干扰等。但直到现在，大部分关于肝癌基因靶向治疗的研究仍停留在实验研究或前期临床研究阶段。; 林菊生常莹; 关键词：肝细胞基因疗法

PEG10基因在不同转移潜能肝癌细胞中表达的定量分析被引量：12: 2006年; 目的通过对不同转移潜能的肝癌细胞株中PEG10基因(parternal express gene 10)表达水平的定量分析,探讨其作为肝癌转移基因的可能性。方法提取肝癌细胞株HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H的RNA,反转录合成第一链cDNA,对反转录产物进行荧光定量PCR。用管家基因-βactin的cDNA起始浓度作为参照标化PEG10的cDNA起始浓度,对标化结果进行方差分析。结果HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H标化后的PEG10 cDNA相对起始浓度分别为(3.15±0.05)×10-3(、5.06±0.03)×10-3(、6.14±0.09)×10-3,各肝癌细胞系之间PEG10表达量差异也存在极显著性意义(P<0.01)。结论PEG10基因表达水平与肝癌细胞的转移潜能呈正相关,可以推测PEG10基因可能是促使肝癌转移的癌基因。; 张琼叶达伟常莹宋宇虎谢娜王晓燕林菊生; 关键词：肝癌肿瘤转移荧光定量PCR

质粒介导的血管抑制和免疫强化协同诱导肝癌细胞凋亡的研究: 2008年; 目的探讨真核表达质粒介导的血管抑制和免疫强化治疗诱导小鼠种植性肝癌肿瘤细胞凋亡的效果和机制。方法制备、纯化小鼠内皮抑制素真核表达质粒（pSecES）和小鼠白细胞介素12（IL-12）质粒（pmIL-12）。小鼠股部肌肉内接种H22细胞建立肝癌种植瘤模型，分成4组，接种部位分别多次注射pSecES、pmIL-12、pSecES＋pmIL-12和pcDNA3．1质粒裸DNA，观察种植瘤的形成和重量；肿瘤组织切片CD31免疫组织化学染色检测肿瘤微血管密度，HE染色观察肿瘤浸润淋巴细胞，并用TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡。结果与pcDNA3．1对照组相比，注射pSecES、pmIL-12组小鼠肝癌种植瘤生长缓慢，血管减少，后者并可见瘤内大量淋巴细胞浸润。两组肿瘤细胞凋亡增加，pSecES、pmIL-12和pcDNA3．1组凋亡细胞数分别为（11．3±4．1）、（14．6±3．2）、（1．4±1．3）个／高倍视野，pSecES＋pmIL-12组凋亡细胞数为（19．9±5．5）个／高倍视野，明显高于单一治疗组。结论真核表达质粒介导的血管抑制和免疫强化治疗可通过抑制肿瘤血管形成，促进瘤内淋巴细胞浸润，协同诱导肿瘤细胞凋亡，较好的抑制了小鼠种植性肝癌的生长。; 黎培员黄焕军张琼吴小力常莹林菊生; 关键词：凋亡质粒白细胞介素12 内皮抑制素

小鼠白蛋白基因启动子的克隆及其在不同细胞系中转录活性的检测被引量：2: 2009年; 目的:对比小鼠白蛋白(mouse albumin promoter,ALB)启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白(en-hanced green fluorescent protein,EGFP)在不同细胞系中的转录活性。方法:以小鼠全血基因组DNA为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ALB启动子序列,克隆至pEGFP-1中,构建重组体pALB-EGFP;在Lipofectamine介导下将pALB-EGFP、pEGFP-N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、人胰腺癌细胞Bxpc-3;荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果:pALB-EGFP构建成功;L02转染pALB-EGFP72h后,ALB启动子可起始EGFP的表达,转录活性为人巨细胞病毒(cytomegalovir-us,CMV)启动子的1/4,其它转染细胞的ALB不能起始EGFP的转录;稳定筛选后,ALB的转录活性达到与CMV相当的水平。结论:构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性,为建立肝脏特异性表达目的基因的转基因小鼠模型奠定了基础。; 刘瑶林菊生常莹张强何星星; 关键词：白蛋白类启动子

Fas配体启动子区-844T／C单核苷酸多态性与重型乙型肝炎转归的关系: 2011年; 目的探讨中国汉族人Fas配体（FasL）基因单核苷酸多态性与重型乙型肝炎之间的关系。方法采用病例一对照研究方法，将HBV感染者作为研究对象。收集相关的非活动性HBsAg携带者233例，重型肝炎患者68例，HBV自发清除者100例，肝硬化患者102例，肝细胞癌患者112例的全血标本及临床相关资料。应用TaqMan探针实时荧光分型PCR方法检测患者Fasl基因-844T／C位点的基因多态性，计算比值比（OR）值及95％可信区间（C1）。结果应用二元Logistic回归分析，控制年龄、性别等因素后，非活动性HBsAg携带者的FasL-844CC、CT、TT基因型频率分别为50．64％、39．91％及9．44％；重型肝炎组中FasL-844CC、CT、TT基因型频率分别为79．41％、17．65％及2．94％。携带FasL-844CC基因型的非活动性HBsAg携带者与重型肝炎的发生呈显著关联（OR=4．729，95％CI：0．510～21．282，P=0．043），而其他病例对照组中存在的关联差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论携带FasI。844CC基因型的非活动性HBsAg携带者易发生乙型肝炎重症化，应对这部分人群给予更多的关注。; 唐锋何星星常莹张家云陈智汪静王俊帅刘翩唐学军林菊生; 关键词：肝炎乙型单核苷酸

遗传印记基因PEG10转基因小鼠的建立及其皮下移植瘤生长和转移的变化被引量：1: 2009年; 目的建立PEG10转基因小鼠模型，研究PEG10对小鼠皮下移植瘤的生长和转移的影响。方法PCR阳性转基因鼠经RT—PCR、Westernblot鉴定后，皮下注射H22细胞，连续测量肿瘤体积。12d后取肿瘤和肝脏组织进行HE染色，肝脏组织进行SP染色，检测PEG10蛋白的表达。计量资料采用独立样本的f检验。结果阳性首建鼠的肝脏中检测到目的基因和蛋白的表达。转基因小鼠皮下瘤的体积（4．08、4．23cm3）及质量（6．89、6．48g）均显著高于野生型小鼠（1．61cm。及1．63g，P〈0．05），均向周围组织侵袭并出现肝转移，肝脏中检测到PEG10蛋白；野生型小鼠的肿瘤组织有包膜，未出现肝转移。结论构建的PEG10转基因小鼠模型可促进皮下移植瘤的生长、侵袭和转移。; 刘瑶林菊生郑新民谭锦泉汪志军张强吴伟常莹; 关键词：肝肿瘤转基因小鼠皮下移植瘤模型

靶向Mcl-1的shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响被引量：2: 2009年; 目的设计以髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建携带此shRNA的重组质粒,探讨脂质体转染该重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响。方法设计3对针对Mcl-1基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体psi RNA-hH1neo-Mcl,用阳离子脂质体法将重组质粒转染至人肝癌细胞株HepG2中,通过RT-PCR及Western blot方法检测转染前后Mcl-1 mRNA及蛋白表达情况,筛选能高效抑制Mcl-1基因表达的shRNA重组质粒并应用MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖和凋亡变化的情况。结果成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pMclsi-1、pMclsi-2、pMclsi-3。经测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。重组质粒转染HepG2细胞后,Mcl-1基因的mRNA水平及蛋白水平明显下调,其中以pMclsi-1重组质粒下调效应最强。MTT检测显示pMclsi-1可明显抑制HepG2细胞增殖,流式细胞仪测定转染后24 h细胞凋亡率为6.5%,48 h细胞凋亡率为15.6%,显著高于对照组(3.9%,P<0.05)。结论采用RNAi技术可特异阻断Mcl-1基因的表达,Mcl-1基因有促进细胞增生及抑制凋亡的作用。; 余琴陈琼黄焕军宋宇虎常莹田德安林菊生; 关键词：短发夹状RNA 细胞增殖

乙型重型肝炎并发症对重型肝炎预后影响的荟萃分析被引量：12: 2010年; 目的荟萃分析乙型重型肝炎并发症对病人预后的影响,并探讨并发症成为乙型重型肝炎诊断标准的可能。方法检索截止到2009年11月国内公开发表的乙型重型肝炎相关的论文,提取文献中含有预后和并发症数据,包括肝性脑病、肝肾综合征、感染、上消化道出血和腹水,将上述效应量进行异质性检验,荟萃分析其合并后的效应量。结果共检索到2229篇文献通过遴选,最终有8项研究纳入荟萃分析,共包含1771例乙型重型肝炎病例。荟萃分析生存组(好转组)和死亡组中肝性脑病、肝肾综合征、感染、上消化道出血和腹水,均存在明显差异(P<0.05)。相对危险度依次肝性脑病、肝肾综合征、上消化道出血、感染和腹水。在荟萃分析中肝性脑病、感染和腹水在8项研究中具有同质性。上消化道出血和肝肾综合征有一定异质性。结论荟萃分析发现肝性脑病、肝肾综合征、感染、上消化道出血和腹水在死亡组和生存组之间有明显差异,肝性脑病、感染和腹水同质增加病人死亡率,考虑作为临床乙型重型肝炎预后判断指标。但由于各并发症发病率未超过半数,故各并发症不能作为乙型重型肝炎诊断标准。; 姚津剑于伟玲常莹林圆圆林菊生; 关键词：乙型重型肝炎并发症预后

人XAF1基因启动子的克隆及其在人肝癌细胞株中活性的测定被引量：1: 2009年; 目的分析XAF1基因启动子在肝癌细胞株中的活性,为研究XAF1基因转录调控的基本机制奠定基础。方法从肝癌细胞株中扩增XAF1基因的1 395 bp启动区域片段并分别克隆到报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1中,分别将含有XAF1基因启动子的报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721,检测萤火虫荧光素酶的活性并观察绿色荧光蛋白的表达。通过转染细胞、荧光素酶活性测定及观察绿色荧光蛋白的表达,检测其启动子活性。结果重组的质粒经双酶切和测序结果证实克隆的XAF1启动子片段序列正确;转染后的HepG2、SMMC7721荧光素酶相对发光强度分别是6.97±0.74、6.12±0.59。其绿色荧光蛋白强度明显低于对照组。结论本实验构建的含XAF1启动子的报告基因质粒为研究XAF1基因的转录调控提供实验依据。; 陈琼余琴汪志军里进胡晓文王晶常莹林菊生; 关键词：基因 XAF1 启动区转录调控

靶向Kus基因的串联短发夹状RNA表达系统对HepG2细胞中Ku70和Ku80的同时干预作用: 2007年; 目的在同一载体上串联针对不同靶基因的短发夹状RNA（shRNA）,探讨其同时干预不同靶基因的效应。方法在已筛选到高效干预靶基因Ku70、Ku80的shRNA表达载体的基础上,构建串联的shRNA表达载体psiRNAKus,该载体能同时表达针对Ku70的shRNA和针对Ku80的shRNA,酶切鉴定和DNA测序确定psiRNAKus构建成功后,将其转染入肝癌细胞株HepG2,转染后48 h提取细胞总RNA和蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测其干预靶基因的效果。结果psiRNAKus表达的shRNAs能够同时抑制Ku70和Ku80在转录水平和翻译水平的表达。结论在同一载体上串联的针对不同靶基因的shRNA表达系统有望在实验和临床治疗中得到应用。; 任精华林菊生常莹吴颖张颖慧张强何星星; 关键词：KU70 KU80

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常莹

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