刘艳
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- 携带结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体的构建及鉴定
- 2010年
- 构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。重组质粒双酶切可见0.8bp和10kb的两条特异性条带,与预期大小相一致。重组质粒测序表明克隆的Ag85B基因序列与Genbank上相一致,酶切从农杆菌中所抽提的质粒,片段大小与预期相一致。成功构建与转化了携带结核Ag85B基因的植物双元表达载体,为利用植物反应器生产口服结核疫苗奠定基础。
- 李君武刘艳黄清华叶秋萍
- 关键词：结核分枝杆菌
- 玉米特异表达启动子驱动下结核esat-6抗原基因植物表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Esat-6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,将globulin-1-Esat6联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中,构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GEsat-6,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。通过对pC1300GEsat-6质粒酶切鉴定和测序分析表明克隆的Esat-6与预期相符,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。
- 李君武宋东王珊珊胡建广刘艳黄清华
- 关键词：结核分支杆菌ESAT-6
- 治疗性肾癌疫苗的研究进展
- 2008年
- 肾细胞癌(renal cell cancer,RCC)是泌尿系统肿瘤中常见的恶性肿瘤,近几年发病率有增长的趋势。RCC对放、化疗及内分泌治疗均不敏感,传统的外科手术治疗也不能对中晚期患者取得良好疗效。由于肾癌是一种免疫原性很强的肿瘤,其免疫治疗倍受关注。伴随分子生物学、免疫学、基因工程技术的迅速发展,分子靶向治疗以及肾癌疫苗等生物免疫治疗显示出良好的应用前景。
- 刘艳李科李君武苏泽轩
- 关键词：肾肿瘤疫苗
- 玉米特异启动子驱动下结核Hsp65与Esat-6融合基因表达载体的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 利用转基因玉米研制新型结核口服疫苗。构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GHLE,并转化农杆菌LBA4404。以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-HLE联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。成功构建了pC1300GHLE质粒,酶切鉴定得到3.3 kb和8.6 kb 2条带,测序分析表明克隆的Hsp65和Esat6序列与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。成功构建和转化了pC1300GHLE表达载体,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。
- 李君武王珊珊宋东刘艳黄清华
- 关键词：结核分支杆菌热休克蛋白65ESAT-6
- 乙肝病毒大包膜蛋白基因植物表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 构建包含编码乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物表达载体,并转化根癌农杆菌,为进一步制备转基因植物口服乙肝疫苗奠定基础。通过聚合酶链反应(PCR),以质粒pVAX1-L为模板扩增出L基因片段,插入到含有玉米特异性启动子的pCR2.1载体上;再用PCR技术扩增globulin-1-L融合片段,定向克隆到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。HindⅢ和XbaⅠ双酶切证实,globulin-1-L融合片段已经插入到pCAMBIA1300上,测序结果说明克隆的靶基因序列与GenBank上公布的序列完全吻合。
- 李君武叶秋萍刘艳黄清华王珊珊宋东
- 关键词：乙肝病毒疫苗
- 肾癌G250基因和hGM-CSF基因双顺反子表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的应用分子生物学技术,构建pIG250-GM双顺反子真核表达质粒并进行测序鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pIG250-GM真核表达质粒,并进行酶切鉴定。结果酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.44kμ和0.47kμ,测序分析表明克隆的G250和hGM-CSF序列与GenBank上公布序列完全一致。结论成功构建双顺反子表达pIGM-G250质粒,为研究G250-GMCSF基因负载的DC疫苗防治肾癌提供了必要的实验基础。
- 李科李君武苏泽轩刘艳
- 关键词：肾癌G250HGM-CSF基因佐剂
- 玉米特异启动子驱动下结核hsp65基因植物表达载体构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。结果表明:成功构建了pC1300GHsp65质粒,酶切鉴定得到3Kb和8.6Kb两条带,测序分析表明,克隆的Hsp65与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒条带大小与预期结果相符合。结果显示,已成功构建和转化了pC1300GHsp65质粒,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。
- 李君武黄清华王珊刘艳黄泽棋宋东
- 关键词：玉米特异启动子
