刘忠湘
- 作品数：79 被引量：132H指数：5
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- 复合聚合酶链反应检测恶性疟原虫及混合感染被引量：2
- 1998年
- 目的应用一种简易、快速的复合ＰＣＲ扩增系统检测恶性疟原虫及混合感染。方法以间日疟原虫（Ｐｖ）和恶性疟原虫（Ｐ．ｆ）小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）特定片段为靶基因，设计并合成引物，建立复合ＰＣＲ扩增系统。采用煮沸法快速制备ＤＮＡ模板研究本系统的敏感性和特异性，并用于临床血样的检测。结果从Ｐ．ｖ和Ｐ．ｆ感染血样中分别扩增出分子量大小为７０５ｂｐ和５７５ｂｐ的特定扩增带。而食蟹猴疟原虫、诺氏疟原虫及正常人血样均无扩增带出现。单独检测Ｐ．ｆ敏感度达到０４７×１０－６（约２虫／μｌ全血），在Ｐ．ｖ存在的情况下，检测Ｐ．ｆ敏感度为０４７×１０－５。检测１０４例疟区门诊患者冻存血标本，８４例与镜检法结果相同，并发现２４例混合感染和２例为镜检虫种鉴别失误。结论本系统敏感性高，特异性强，操作简单，并可在一次扩增中同时检出Ｐ．ｖ和Ｐ．ｆ，具有一定的推广应用价值。
- 孙明林薛采芳樊荣刘忠湘
- 关键词：聚合酶链反应疟原虫恶性
- 异源初始—强化免疫策略在疟疾亚单位疫苗研究中的应用
- ＜正＞ 目的:探讨异源初始—强化免疫策略在提高疟疾亚单位疫苗免疫效能中的作用。材料与方法:①以恶性疟原虫顶端膜抗原1（AMA1）基因为基础制备3种疟疾原型疫苗,包括DNA疫苗VR1020/E+pcDNA3/GM-CSF（...
- 李珣缪军薛采芳雷俊川王宪锋刘忠湘
- 文献传递
- 以恶性疟原虫MSP1和AMA1疫苗组合免疫小鼠诱导保护性免疫被引量：3
- 2006年
- 目的以MSP1和AMA1的DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗组合免疫小鼠,诱导针对疟疾红内期抗原MSP1和AMA1的保护性抗体。方法将编码恶性疟原虫MSP1全片段和AMA1胞外域的DNA免疫质粒(VR1020/190.3和VR1020/E)、痘苗病毒载体(rMVA/190.3和rMVA/E)及重组蛋白(d-GX190H和E)的同种类型疫苗混合,作为核酸疫苗(D)、病毒疫苗(V)及蛋白疫苗(P)按照“初始-强化”策略免疫小鼠。间接ELISA测血清中抗MSP1和AMA1抗体;用免疫血清进行体外原虫入侵红细胞抑制实验;由转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19和P.bANKA株分别对免疫鼠进行体内攻击。结果各组免疫血清中均产生了较强的抗体应答,抗MSP1抗体与抗AMA1抗体滴度的变化趋势一致。实验组免疫小鼠血清在体外对两株原虫入侵红细胞均有较大程度的抑制。体内攻击实验中实验组小鼠平均存活时间较对照组略长。结论采用以MSP1和AMA1为基础的DNA、重组痘苗病毒和重组蛋白疫苗的组合免疫小鼠能诱导出有效的保护性抗体。以上结果为疟疾红内期疫苗合理免疫方案提供了重要的实验依据。
- 李淑梅李珣缪军刘忠湘薛采芳
- 关键词：恶性疟原虫疫苗
- HIV-1 Gag抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析被引量：1
- 2008年
- 初步筛选HIV-1 Gag抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。采用超基序、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞株测定肽与HLA-A*0201分子的亲和力和稳定性试验来评价修饰后表位与HLA-A*0201之间亲和性。结果:筛选出3个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。YIYKRWIIL(259-267Y1),YQANFLGKI(429-437Y1)和YTNNPPIPV(249-257Y1)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.68、2.54和2.35,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8h。预测的低亲和力表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。
- 李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳
- 关键词：HIV-1CTL表位
- 伯氏疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子的表达和纯化被引量：2
- 2006年
- 目的表达和纯化伯氏疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子(PbMIF)。方法根据GenBank中PbMIF mRNA的预测序列,设计特异引物,采用RT-PCR方法从伯氏疟原虫ANKA株红内期RNA扩增获得PbMIF基因。将PbMIF基因与T载体连接并测序,利用NCBI中Blast程序分析测序结果。阳性T/A克隆质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,将目的片段克隆至原核表达载体pET28a,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),收集经IPTG诱导表达的细菌进行SDS-PAGE分析,并对表达产物进行亲和纯化。结果从伯氏疟原虫RNA中扩增到PbMIF cDNA,长度为351 bp,编码116个氨基酸。测序结果显示,其核苷酸序列与GenBank中PbMIF cDNA的预测序列完全一致,编码的氨基酸在一级结构上与恶性疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子(PfbbMIF)的同源性为76%,与人类和小鼠MIF的同源性为31%。表达产物为可溶性的PbMIF蛋白,亲和纯化后的PbMIF蛋白纯度为71%。结论表达并纯化出可溶性PbMIF蛋白,为进一步研究疟原虫的生物学特性奠定了物质基础。
- 陈俊李珣刘忠湘赵亚李淑梅薛采芳
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子基因表达伯氏疟原虫
- 恶性疟原虫富组氨酸蛋白-2基因诱导的免疫应答研究被引量：1
- 2000年
- [目的 ]探讨编码恶性疟原虫富组氨酸蛋白 2 (HRP Ⅱ )C端基因的真核表达重组质粒诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。 [方法 ]将起始码和终止码引入HRP ⅡC端基因片段两端 ,经测序鉴定读框 ,将包含起始码和终止码的HRP Ⅱ基因片段克隆入真核表达质粒pcDNA3 1( )中 ,进行酶切鉴定。用重组真核表达质粒pcDNA3 1( ) /HRP Ⅱ 经肌肉免疫小鼠 3次 ,每次间隔 3wk。第 3次免疫后 2wk ,取小鼠血清和脾细胞 ,分别用ELISA测定HRP Ⅱ抗体水平和用脾细胞增殖实验测定细胞免疫反应。 [结果 ]序列测定结果表明 ,HRP ⅡC端基因片段被准确地引入起始码和终止码 ;酶切鉴定表明包含起始码和终止码的HRP ⅡC端基因片段成功地克隆入pcDNA3 1( ) ,形成pcDNA3 1( ) /HRP Ⅱ 。在pcDNA3 1( ) /HRP Ⅱ 免疫鼠血清中可检测出高水平的HRP Ⅱ抗体 ,用原核表达的HRP Ⅱ蛋白刺激免疫脾细胞 ,可检测出明显的细胞增殖反应。 [结论 ]编码HRP Ⅱ的真核表达重组质粒可诱导小鼠产生明显的体液和细胞免疫反应。
- 缪军李珣薛采芳刘忠湘王宪锋甄荣芬
- 关键词：恶性疟原虫DNA疫苗免疫反应
- 恶性疟原虫顶端膜抗原1（AMA1）不同区段重组蛋白诱导小鼠抗体应答的特性分析
- ＜正＞ 目的:分析AMA1不同结构域在诱导保护性抗体应答中的可能作用,为研制包含该抗原保护性成份的疟疾亚单位疫苗提供基础。方法:采用PCR自Pf基因组扩增编码AMA1成熟胞外域（E）及构成E的三个独立结构域（Ⅰ Ⅱ Ⅲ ...
- 李珣珣薛采芳刘忠湘王宪锋丁劲甄荣芬
- 关键词：恶性疟原虫顶端膜抗原1免疫应答
- 文献传递
- 西安市某单位附属幼儿园蛲虫感染情况调查被引量：1
- 2007年
- 目的:了解西安市区某幼儿园儿童感染蛲虫情况。方法:采用透明胶纸法。结果:该幼儿园蛲虫感染率为1.7%且有随年龄增大有增高趋势。结论:该幼儿园卫生条件较好感染率较低,但是还应加强卫生措施,搞好环境卫生,教育儿童养成良好的卫生习惯。
- 黄豫晓刘忠湘毛张翔李英辉薛采芳
- 关键词：蛲虫病透明胶纸法感染率儿童
- 人体寄生虫学课程结构、内容和教学方法改革的研究与实践
- 2000年
- 以课程之间的交叉融合为主线 ,首先进行人体寄生虫学课程结构改革 ;在此基础上 ,探索与之相适应的教学内容、教学过程和教学方法等改革的途径 ,引导并提高学生的自学能力 ,综合知识、运用知识解决问题的能力和创新精神。
- 甄荣芬赵亚刘忠湘雷俊川王宪锋缪军刘军
- 关键词：人体寄生虫学教学改革课程结构教学方法
- 应用计算机技术实现人体寄生虫学教学最优化
- 2000年
- 计算机多媒体技术和网络教学是当今计算机应用于教学的两大热点。我们充分利用这二者各自的优势 ,取长补短 ,优化教学资源和教学过程 。
- 赵亚甄荣芬刘忠湘雷俊川
- 关键词：人体寄生虫学计算机多媒体互联网
