任婧婧
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 干扰人ATP1B1基因对胃腺癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响被引量：4
- 2009年
- 背景与目的:Na+-K+ATP酶B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化的表达低,并且ATP1B1的表达与细胞紧密连接和上皮细胞的极性有关。因此,我们构建了特异性干扰ATP1B1 mRNA的短发夹RNA,以探讨干扰ATP1B1对人胃腺癌细胞株SGC-7901增殖和迁移能力的影响。方法:构建特异性干扰ATP1B1 mRNA的短发夹RNA质粒表达载体,转染SGC-7901细胞,G418筛选阳性克隆细胞,RT-PCR和real-timePCR法检测ATP1B1 mRNA的表达。通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,以及克隆形成实验、Transwell小室迁移实验等方法观察ATP1B1对细胞增殖和迁移的影响。结果:瞬间转染后24h,sh150,sh295,sh562,sh765干扰位点及shNC对SGC-7901细胞ATP1B1mRNA的抑制率分别为(60.87±4.38)%,(44.93±2.24)%,(49.28±2.02)%,(52.17±2.60)%,(3±0.15)%,4个位点对ATB1B1 mRNA均有抑制效应。150位点对ATB1B1基因的抑制效应强于其它3个位点,用作后续实验。G418筛选后,获得了具有稳定干扰ATP1B1 mRNA效应的细胞株shATP1B1-7901,RT-PCR初步分析,sh150位点对ATP1B1-7901细胞的ATP1B1 mRNA的抑制率为(85.72±5.22)%,与阴性对照组的(3.3±0.22)%相比,P<0.05;Real-timePCR检测结果显示,shATP1B1-7901细胞中ATP1β1 mRNA的抑制率为(87.53±3.23)%,高于阴性对照组shNC-7901的(4.17±0.33)%,P<0.05。MTT法细胞增殖实验中,第三天后,shATP1B1-7901细胞的增殖率大于阴性对照组和空白对照组,经统计学分析,P<0.05,差异有统计学意义。流式细胞术结果显示,shATP1B1-7901的S期和G2/M期细胞比例增加,大于阴性对照组和空白对照组,P<0.05,差异有统计学意义,阴性对照组和空白对照组的周期分布差异无统计学意义。shATP1B1-7901稳定株细胞的克隆形成率为(68.50±2.65)%,大于阴性对照组的(50.00±2.53)%及空白对照组的(52.50±2.11)%,P<0.05。shATP1B1-7901稳定株细胞的迁移率(2.80±0.02)%,大于阴性对照组的(1.15±0.05)%和空白对照组的(1.25±0.02)%,P<0.05�
- 刘凯张洁任婧婧王修杰杨洪亮林苹
- 关键词：胃肿瘤腺癌细胞RNA干扰细胞增殖细胞迁移
- ATP1B1协同阿霉素抑制乳腺癌细胞MCF-7生长及逆转耐药的作用被引量：1
- 2009年
- 背景与目的:Na+-K+ATP酶(Na+-K+泵)是细胞能量转换的重要系统,可能与肿瘤转移有关,其B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化细胞中表达低。本实验研究ATP1B1协同阿霉素(ADM)在人乳腺癌细胞株MCF-7和其耐药株MCF-7/ADM中的作用以及其逆转耐药效应的影响。方法:将重组质粒PEGFP-ATP1B1转染到MCF-7和MCF-7/ADM细胞,MTT法检测质粒及其B1亚基因沉默后ADM抑瘤效应,荧光显微镜和流式细胞术分析细胞内药物荧光强度,定磷法检测ATP酶活性,RT-PCR和real-time PCR检测MDR1 mRNA的表达,Western blot法检测P-gp蛋白的表达。结果:转染PEGFP-ATP1B1的MCF-7和MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性相对阴性对照ADM-C3组(pEGFP-C3空载体转染)和空白对照ADM-RPMI-1640组均明显增加,且ADM各浓度梯度ADM-ATP1B1组与ADM-RPMI-1640组比较差异有统计学意义(P<0.05);而B1亚基沉默后阴性对照组ADM-shNC,相对实验组ADM-shATP1B1和空白对照ADM-RPMI-1640组细胞对ADM的敏感性明显偏高。荧光显微镜下观察ADM-ATP1B1组MCF-7和MCF-7/ADM细胞ADM红色荧光均高于对照组。流式细胞术显示,ADM-ATP1B1组MCF-7细胞中ADM平均荧光强度较对照组高(P<0.05),ADM-ATP1B1组MCF-7/ADM细胞中ADM平均荧光强度高于对照组(P<0.05)。MCF-7和MCF-7/ADM细胞的ADM-ATP1B1组ATP酶活性均高于ADM-RPMI-1640组(P<0.05),而ADM-C3组与ADM-RPMI-1640组相比差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR和real-time PCR检测结果显示,MCF-7/ADM细胞ADM-ATP1B1组MDR1 mRNA相对表达水平与两对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。Western blot显示P-gp蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ATP1B1对ADM抑制乳腺癌细胞生长具有协同作用,并可逆转耐药细胞MCF-7/ADM对ADM的耐药效应,其机理与MDR1基因无明显的相关性,可能是通过与Na+-K+ATP酶相关的一种新途径而发挥作用的。
- 齐彦宇刘凯张洁李凯任婧婧林苹
- 关键词：NA^+-K^+阿霉素乳腺肿瘤MCF-7细胞逆转耐药
