黄益民
- 作品数：84 被引量：374H指数：10
- 供职机构：首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞（ MSCs ）的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点，运用生长曲线和MTT法检测其原代细胞增殖能力，台盼蓝法测定细胞传代成活率，采用流式细胞术测定2种第3代（ P3）细胞DNA周期及表面标志物的表达，并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果：酶消化法分离培养的脐带MSCs 1 d后，细胞贴壁呈成纤维形，2 d后呈漩涡状生长且增殖明显，3 d后达80％融合即可传代；应用密度梯度离心法分离骨髓MSCs，体外培养4 d后，细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长，5 d后呈克隆样生长且增殖明显，7 d后达80％融合即可传代。原代培养的脐带MSCs生长曲线近似“S”形，骨髓MSCs 生长曲线较平缓；MTT法显示脐带MSCs在3～5 d增殖较明显，骨髓MSCs 7 d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96％以上，G0／G1期细胞均为85％以上，无明显差异（P＞0．05）；2种P3细胞CD44、CD90和CD105阳性率均为（60．7±2．3）％以上高表达，CD45、CD19、CD14和CD79a均为（25．6±4．8）％低表达，两者无明显差异（ P＞0．05）；2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细胞分化的潜能，脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90％以上，与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异（ P＜0.05）。结论：脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋白转基因小鼠的脐带MSCs可作为较好干细胞示踪的细胞源。
- 辛毅李娜张颖黄益民刘飒许秀芳张兆光
- 关键词：脐带间充质干细胞生物学特性绿色荧光蛋白转基因小鼠
- 西藏高原红细胞增多症患者促红细胞生成素基因多态性研究
- 黄益民张世馥裴澍萱刘舒
- G突变和T/G杂和的发生率，与EPO基因3'端低氧诱导因子结合位点没有任何多态性。该研究有关EPO多态性的研究发现，不仅首次证明了西藏地区藏汉两族男性的EPO基因3'端氧敏感区同一位点存在突变和杂和等两种多态性特征，同时...
- 关键词：
- 关键词：红细胞增多症促红细胞生成素基因多态性
- 大鼠淋巴细胞P59<Sup>fyn</Sup>基因定量表达测试用引物、探针
- 一种大鼠淋巴细胞P59<Sup>fyn</Sup>基因定量表达测试用引物、探针，其特征在于：所述的引物序列中，上游引物378U的序列为5’TCGCGGTGAAGGCTATGT 3’，下游引物485L的序列为5’CCAGG...
- 黄益民顾云张颖朱文斯
- 文献传递
- 环孢素A对心脏移植大鼠外周血单个核细胞免疫分子表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的 通过对大鼠心脏移植 ,探讨环孢素A对免疫排斥反应过程中免疫分子表达的影响。方法 将大鼠分为 2组 ,用药组大鼠心脏移植术前后以 15mg·kg-1体重环孢素A灌胃给药 ;对照组灌胃给予同等体积的生理盐水。 2组分别在移植前、移植术后 1,3,7,10和 12d取血 ,用荧光单克隆抗体 (mAb)标记单个核细胞免疫分子 ,流式细胞仪检测MHC II,CD4 ,CD8,ICAM I和IL2 R的表达水平。结果 大鼠心脏移植前 ,环孢素A组外周血单个核细胞表面免疫分子CD4的表达水平明显低于对照组 ,移植术后 ,环孢素A组的CD4和ICAM I的正调表达时相出现于移植后的前 2 4h内 ,环孢素A组的CD8于移植后第 2 4小时至第 3天时 ,出现一个负调表达的低谷 ,这一负调表达期比对照组延长了 2d ,而环孢素A组CD8开始正调表达时相是移植后第 3天 ,比对照组正调表达时相晚 2d ,比同组CD4和ICAM I开始正调表达时相晚 2～ 3d ,比同组IL 2R开始正调表达时相晚 2d。结论 ①环孢素A不抑制急性器官移植排斥反应早期 (抗原呈递期 )外周血单个核细胞对MHC Ⅱ 抗原肽复合物的表达过程 ;②环孢素A不能有效抑制ICAM I的表达 ,而是促进其表达 ;③环孢素A不能有效抑制MHC Ⅱ 抗原肽和ICAM I通过TCR共同介导的CD4 + T单个核细胞激活过程 。
- 王盛宇顾云黄益民李玉梅吕燕宁张颖葛六平
- 关键词：心脏移植环孢素A免疫分子
- 生物发光技术在活体干细胞治疗学研究中的应用被引量：1
- 2007年
- 胡著涛黄益民
- 关键词：干细胞活体内治疗学实验动物荧光素酶
- 心肌缺血/再灌注期间硒拮抗自由基损伤机理的研究
- 黄益民刘燕霞张兆山韩玲
- 该项目为国家自然科学基金(39270199)、北京市自然科学基金(7942013)联合支持项目的延续研究，属医学基础与临床治疗学理论综合研究领域。其研究结果既可应用于指导临床防治自由基损伤时的用药选择，又可应用于指导抗自...
- 关键词：
- 关键词：心肌缺血再灌注谷胱甘肽过氧化物酶脂质过氧化损伤自由基损伤硒
- 大鼠淋巴细胞P59<Sup>fyn</Sup>基因定量表达测试用引物、探针
- 一种大鼠淋巴细胞P59<Sup>fyn</Sup>基因定量表达测试用引物、探针，其特征在于：所述的引物序列中，上游引物378U的序列为5’TCGCGGTGAAGGCTATGT 3’，下游引物485L的序列为5’CCAGG...
- 黄益民顾云张颖朱文斯
- 文献传递
- 环孢霉素A对异体心肌诱导大鼠脾淋巴细胞表面分子表达时间窗的影响
- 2012年
- 目的:体外建立异体心肌组织抗原诱导大鼠淋巴细胞表面蛋白分子及编码基因表达时间窗模型,动态观察环孢素A对表达时间窗的影响。方法:实验分4组:对照组、抗原组、环孢组和抗原+环孢组。2、6、12、24、48h和72h观察脾白细胞其表面蛋白分子及编码基因的变化。结果:4组MHC-Ⅱ、CD4、CD8分子、ICAM-1无显著差异,CD4分子环孢霉素组2～24h有一个平台期。IL-2R分子抗原组12h达高峰值,环孢素A组6h有小峰值,抗原+环孢素A组表达较平稳。P59基因对照组逐步负调,而抗原组在2h内和12～24h有2个正调表达,2～12h负调至谷底,后再正调、负调表达,环孢素A组表达较稳定,抗原+环孢素组48h达到谷底,后迅速上升。CD4基因对照组2h、抗原组6h到谷底,后迅速上升,环孢素A组48h达到峰值,抗原+环孢素A组2h内有一个峰值,2组后逐步负调。CD8基因4组均负性表达,除抗原组无谷底外,对照组加药12h出现谷底,环孢素组加药6h出现谷底,抗原+环孢素A组加药12h出现谷底,3组后迅速上升。结论:异体心肌组织抗原可在2h内引发白细胞开始释放细胞表面蛋白分子IL-2R、P59基因表达,刺激6h可以诱发CD4基因开始转录表达,环孢素A 2h开始释放ICAM-I、IL-2R分子。这些结果为更加具体的描述移植免疫排斥反应的时间进程提供了详实的依据,并为更深入阐述环孢素A抑制移植排斥反应的机理提供了可靠依据。
- 许秀芳张颖辛毅黄益民顾云李娜孟旭伍冀湘周玉杰张兆光
- 关键词：CD8
- 环孢素A,庆大霉素和硒制剂对大鼠外周血淋巴细胞分子和基因表达的影响被引量：4
- 2003年
- 目的 为比较环孢素A ,庆大霉素和硒制剂对细胞免疫功能的不同影响 ,本实验观察了大鼠短期服用环孢素A ,庆大霉素和硒制剂后外周血多种淋巴细胞分子和基因的表达水平变化 ,并对 3组药物进行了对比。方法 将 2 4只大鼠分为 4组 ,分别ig给药。于第 3天取血并分离淋巴细胞。用荧光单克隆抗体 (mAb)标记淋巴细胞分子并提取淋巴细胞总RNA。流式细胞仪检测淋巴细胞分子MHC Ⅱ ,CD4,CD8,ICAM Ⅰ和IL2 R的表达水平 ,基因差异显示分析法检测多基因表达水平。免疫组化法检测各组心肌组织中CD4+,CD8+淋巴细胞数。结果 与对照组相比 ,环孢素A ,庆大霉素和硒制剂都抑制淋巴细胞分子ICAM I,CD4和CD8的表达 ,同时 3组心肌组织中CD4+和CD8+淋巴细胞数降低 ,心肌组织中CD4+淋巴细胞数与CD4分子表达水平明显正相关 (P <0 .0 0 0 1)。 3组的细胞分子表达和心肌淋巴细胞数的降低程度依次为环孢素A >庆大霉素 >硒制剂。不同的是 ,环孢素A还负调MHC Ⅱ和IL2 R的表达水平 ,而庆大霉素却正调MHC II和IL2 R的表达 ,硒制剂负调MHC Ⅱ ,正调IL2 R的表达。 3组都表现出对凋亡基因 gig18和一个 45 0bp左右的待测基因的正调表达。 结论 ①短期服用环孢素A ,庆大霉素和硒制剂 ,都抑制大鼠外周血淋巴细胞对ICAM I 。
- 王盛宇黄益民顾云张颖赵颂军
- 关键词：环孢素A庆大霉素硒制剂基因表达
- 大鼠静脉多次注射人脐带间充质干细胞安全性的研究被引量：4
- 2015年
- 目的：观察多次静脉输注人脐带间充质干细胞（hu MSCs）对大鼠的毒性反应。方法：1贴块法培养hu MSCs;流式细胞仪鉴定第4代hu MSCs特异性表面抗原;标准试剂盒鉴定第4代hu MSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能;2182~203g的SD大鼠分为对照组、0.9%氯化钠组和干细胞组,各8只,雌雄各50%。3干细胞组分别于第1、4和15天时经尾静脉注射（2.5×106）个/kg体质量的第4代hu MSCs,0.9%氯化钠组于同等时间注射与细胞悬液等量0.9%氯化钠液。4第3次注射转染RFP基因（中文）的hu MSCs后11天,腹主动脉取血,检测和比较血常规和生化指标;取脑、心、肺、肝及肾进行病理学检查;荧光显微镜观察器官组织中表达RFP的hu MSCs细胞分布情况,流式细胞仪检测骨髓中表达RFP的hu MSCs;ELISA检测血清γ-IFN、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10及IL-12含量。结果：1第4代hu MSCs特异性表面抗原CD73、CD90和CD105表达强阳性,纯度分别为98.7%、99.6%和98.6%,而CD34、CD45、CD11b、CD19、CD79a和HLA-DR的表达水平为阴性,CD14表达水平为23.1%;hu MSCs分化成脂细胞和成骨细胞的比例均为99%;2注射3次干细胞后实验动物全部存活,干细胞组部分血常规和生化指标与0.9%氯化钠组相比有差异,但与对照组相比,只有PLT明显降低、CHOL明显升高;3干细胞组脑、心、肺、肝、肾的形态和组织病理学无明显改变;（4）干细胞组的器官组织和骨髓中未检测到表达RFP的hu MSCs;（5）干细胞组血清IL-8水平明显升高。结论：多次尾静脉注射hu MSCs对大鼠没有明显的毒性反应。
- 张颖李娜林筝辛毅崔巍刘飒王忠陈雄赵颂军袁惠黄益民周玉杰罗毅张兆光
- 关键词：人脐带间充质干细胞毒性反应
