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IL-1β和TNF-α在小鼠巨细胞病毒性心肌炎组织中的表达及其意义: 2005年; 目的研究IL-1β和TNF-α在巨细胞病毒(M CM V)心肌炎小鼠心肌组织中的表达及在心肌损伤中的作用。方法将60只4周龄BALB/C小鼠随机分为两组,实验组(36只)腹腔注射10-4TC ID M CM V,对照组(24只)注射3T 3细胞裂解液。观察腹腔注射后3、7、14d心肌组织中IL-1βTNF-α的表达及心肌病理改变。结果实验组心肌组织出现灶性或弥散性炎性细胞浸润、心肌细胞变性和坏死,对照组无病理改变。实验组IL-1β、TNF-α蛋白主要表达在炎性浸润细胞、变性或坏死的心肌细胞,而对照组几乎无表达。结论IL-1β、TNF-α在M CM V心肌炎心肌组织中表达,并可能在其发病中起重要作用。; 陈志坚廖玉华唐省三高翔刘坤董继华; 关键词：小鼠巨细胞病毒心肌炎免疫组化

丹参酮ⅡA磺酸钠对Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激的影响被引量：11: 2012年; 目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞氧化应激反应的影响及其机制。方法培养新生大鼠心肌细胞,建立AngⅡ诱导的心肌细胞氧化应激反应模型。用活性氧(reactive oxygen species,ROS)敏感的二氮荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针测定胞内ROS水平。酶联免疫分析法测定细胞培养物上清中8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)含量。以细胞存活率、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性作为反应心肌细胞损伤的指标。比色法测定还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶(NADPH oxi-dase,NOX)活性。蛋白质印迹法(Western-blot)测定NOX亚单位p47 phox表达。结果 Ang Ⅱ能显著提高心肌细胞内DCF荧光信号强度,降低细胞存活率及SOD活性,同时上调培养上清液LDH活性及MDA含量。以上氧化应激相关指标能被各浓度STS抑制。进一步研究发现,STS能抑制Ang Ⅱ上调的NADPH氧化酶活性及亚单位p47 phox表达。结论 STS可以抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激损伤反应,机制可能与下调NADPH氧化酶活性及亚单位p47 phox表达有关。; 杨乐邹晓静高翔李树生梁黔生杨光田; 关键词：心肌细胞肥大活性氧 NADPH氧化酶

阿魏酸钠对人心房肌细胞超快激活延迟整流钾电流的影响被引量：1: 2007年; 目的:观察阿魏酸钠对人心房肌细胞超快激活延迟整流钾电流(IKur)的影响。方法:酶解法分离制备单个人心房肌细胞。采用全细胞膜片钳技术记录人心房肌细胞的IKur。比较加入阿魏酸钠前后IKur的变化。结果:0.4g/L阿魏酸钠不改变IKur电流-电压对应关系,0.4g/L阿魏酸钠对各个电压水平下IKur的电流密度(pA/pF)均有不同程度的抑制,+60mV时IKurpA/pF由4.99±0.35减小为3.33±0.26(P<0.05)。阿魏酸钠对IKur的抑制作用呈浓度依赖性,半数有效浓度IC50是(0.41±0.03)g/L;希尔系数是0.95±0.05。结论:阿魏酸钠作为一种钾通道阻滞剂,能有效地抑制人心房肌细胞IKur。; 刘坤高翔刘金平张昌伟陈志坚曾秋棠廖玉华; 关键词：阿魏酸钠心房钾通道膜片钳

人Kv1．5通道基因转染人胚胎肾细胞的研究: 2007年; 目的建立表达人Kv1.5通道的细胞模型。方法采用Lipofactamine 2000脂质体将人Kv1.5通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.5通道基因的表达。结果pcDNAHKv1.5真核表达载体转染HEK293细胞2d后,荧光显微镜可观察到人Kv1.5通道表达;3d后全细胞膜片钳技术记录到人Kv1.5通道基因编码的通道电流。结论pcDNAHKv1.5真核表达载体转染HEK293细胞为人Kv1.5通道的研究提供了良好的真核细胞表达系统和细胞模型。; 刘坤高翔田苗刘金平张昌伟水志刚陈志坚廖玉华; 关键词：转染

鼠巨细胞病毒心肌炎自身免疫致室性心律失常机制的研究被引量：4: 2007年; 目的探讨自身免疫机制在鼠巨细胞病毒(MCMV)诱导BALB/c鼠心肌炎室性心律失常中的作用。方法将无病原体4周龄BALB/c鼠60只,随机分为实验组(36只)和对照组(24只);实验组腹腔注射MC-MVTCID50悬液,对照组腹腔注射3T3细胞裂解液;记录所有小鼠心电图,观察心肌病理及炎性因子表达情况,检测血清抗心脏β1受体自身抗体滴度,膜片钳观察抗β1受体抗体对心肌细胞动作电位(AP)及L型钙通道(ICa-L)电流的影响。结果实验组心肌炎发病率69.4%,表现为心肌细胞变性或灶性坏死,炎性因子白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α蛋白阳性表达,血管周围大量炎症细胞浸润。实验组心律失常累计发生率达50%,第6周起该组血清抗β1受体抗体滴度显著增高(与对照组比,P<0.01),且心律失常发生亦增加。1∶100抗β1受体抗体使小鼠心室肌细胞APD50和APD90延长15.3%和5.8%,使ICa-L密度显著增加。结论MCMV可能通过诱导抗β1受体自身抗体产生,增加ICa-L电流导致室性心律失常发生。; 陈志坚廖玉华肖华唐省三高翔郭和平王敏; 关键词：心肌炎心律失常巨细胞病毒自身免疫

抗Nav1.5抗体对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响: 2007年; 目的了解钠通道亚型特异性抗体——抗Nav1.5抗体对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响。方法用急性酶解法获得成年豚鼠单个心室肌细胞,并行随机分组,各组分别给予不同稀释浓度的抗体(15μg/ml)(室温下)处理10min:(1)1:100抗体稀释组给予0.15μg/ml抗体处理;(2)1:50抗体稀释组给予0.30μg/ml抗体处理;(3)1:25抗体稀释组给予0.60μg/ml抗体处理;(4)对照组(未给予抗体处理)。而后分别进行全细胞膜片钳实验测定钠电流并计算电流密度。数据采用one-way方差分析及SNK检验、Dunnett检验。结果与对照组相比,三个抗体处理组(抗体浓度分别为0.15、0.30和0.60μg/ml)的I_(Na)峰值从对照组的(0.026 296±0.004 436)nA/pF分别降至(0.018 41±0.007 161)nA/pF(P<0.01,n=10)、(0.013 484±0.002 933)nA/pF(P<0.01,n=9)和(0.012 738±0.004 554)nA/pF(P<0.01,n=8),并使I_(Na)的Ⅰ—Ⅴ曲线上移,激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。三个不同浓度抗体处理组之间的电流密度虽有差异,但差异并无统计学意义(P>0.05)。结论抗Nav1.5抗体可抑制心室肌细胞钠电流,但无浓度依赖性。; 史钰芳程龙献雷鸣张涛刘坤高翔赵芳; 关键词：钠电流全细胞膜片钳技术

BALB/c小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型的特征被引量：7: 2008年; 目的:探讨BALB/c小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎模型的特征。方法:60只4周龄BALB/c小鼠随机分成2组:实验组(36只,MCMV腹腔注射)和对照组(24只,3T3细胞裂解液腹腔注射)。在注射后3、7、14、21、28、35、42、49、56、63和70 d,记录心电图,测血清抗心肌β1受体抗体,分批处死小鼠行心肌病理、免疫组化和MCMV DNA检测。结果:实验组心肌炎累积发病25只(25/36,69.4%),死亡4只(4/36,11.1%);心肌炎急性期心肌呈现弥漫性炎性细胞浸润和灶性心肌细胞变性坏死,慢性期心肌间质散在炎性细胞浸润,急慢性期心肌炎病理积分均在2分或以下;免疫组化示急性期心肌IL-1β和TNF-α蛋白强阳性表达。实验组心律失常累计发生率达50.0%,可出现各种心律失常,急性期以窦性、房性心律失常和传导阻滞为主,慢性期以室性和房性心律失常为主。实验组3-7 d时心肌组织可检测到MCMV DNA片段,14-70 d时则不能检测到。实验组前5周血清抗β1受体抗体滴度为0,第6-10周明显升高;对照组前7周该抗体滴度为0,第8-10周轻微升高。结论:MCMV心肌炎并不严重,心肌细胞变性坏死具有局灶性和散在性特点,可出现各种心律失常;心肌炎早期病变和心律失常的发生可能与病毒感染直接损伤有关,慢性期病变和心律失常的发生则可能与抗β1受体抗体的作用有关。; 陈志坚廖玉华唐省三高翔刘坤田苗王敏董继华; 关键词：巨细胞病毒小鼠 BALB/C 心肌炎

BALB/c小鼠巨细胞病毒性心肌炎的特征: 目的探讨BALB/c小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎模型的特征。方法60只4周龄BALB/c小鼠随机分成2组:实验组(36只,MCMV腹腔注射)和对照组(24只,3T3细胞裂解液腹腔注射)。在注射后3、7、14、21、...; 陈志坚廖玉华唐省三高翔刘坤田苗王敏董继华; 文献传递

脂多糖对心肌细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响被引量：1: 2010年; 目的:观察脂多糖(LPS)对心肌细胞损伤及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法:培养新生乳鼠心肌细胞,以LPS(1μg/ml)分别作用0～4h,建立脓毒症心肌抑制细胞模型,测定各时点细胞存活率、LDH漏出率、锥虫蓝摄取率及肌酸激酶(CK)活性。用免疫印迹法测定LPS对HIF-1α表达的影响。结果:LPS处理后,LDH漏出率、锥虫蓝摄取率及CK活性均明显上调,而细胞存活率下调,同时伴HIF-1α表达明显上调。结论:LPS能导致明显的心肌损伤;同时伴随HIF-1α表达明显上调,但HIF-1α在脓毒症心肌抑制中扮演的角色尚需进一步研究。; 高翔毛奕邹晓静杨乐; 关键词：心肌抑制脂多糖缺氧诱导因子-1Α

单个人心房肌细胞的分离、鉴定及影响因素分析被引量：1: 2008年; 目的探讨分离、鉴定单个人心房肌细胞的最佳方法及其影响因素。方法人心房肌组织取自5例先天性心脏病（PCHD）、8例冠心病（CHD）、15例瓣膜性心脏病（VHD）手术患者，采用两步酶解法分离制备心房肌细胞，光学显微镜下观察细胞形态，全细胞膜片钳技术记录乙酰胆碱敏感钾电流（Ik,Ach）情况。结果两步酶解法分离所得杆状、横纹清楚、折光性好、静止、贴壁良好的心肌细胞产率为30％～50％。PCHD记录Ik,Ach成功率最高（9／10个细胞），其次为CHD（6／10个细胞），VHD最低（3／10个细胞）。结论两步酶解法可用于人心房肌细胞的分离，全细胞膜片钳技术有助于细胞活性的鉴定，其分离数量和活性受酶解情况、年龄、病种等因素影响。; 刘金平孙宗全张昌伟刘坤高翔水志刚; 关键词：心房肌细胞膜片钳影响因素

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高翔

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