高宝安
- 作品数：14 被引量：18H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- IL-5反义寡核苷酸对哮喘大鼠CD4^+T淋巴细胞IL-5mRNA和蛋白质表达的影响被引量：3
- 2005年
- 高宝安熊维宁徐永健张珍祥曹勇唐以军叶涛钟声
- 关键词：IL-5反义寡核苷酸哮喘CD4IL-5蛋白质
- 筛选反义寡核苷酸抑制哮喘大鼠CD4^+T细胞IL-4表达的研究
- 2006年
- 目的:探讨不同序列的反义寡核苷酸对哮喘大鼠CD4+T细胞IL4表达的抑制作用。方法:采用脂质体转染技术,将不同的反义寡核苷酸(AS1:反外显子1;AS2:反外显子2;AS3:反翻译终止部位)和空白对照分别转入经免疫磁珠阴性分离的哮喘大鼠CD4+T淋巴细胞,细胞培养28小时后,用ELISA和半定量RTPCR分别检测细胞培养上清IL-4和细胞内IL4mRNA的水平。结果:不同组RTPCR结果(IL4/βactin相对吸光度):AS1、AS2、AS3及空白组分别为0.2615±0.1476、0.2885±0.1411、1.1012±0.3641及1.2068±0.3836(F=22.597,P<0.01)。ELISA检测培养上清液IL-4结果:AS1、AS2、AS3及空白组分别为13.800±7.233、15.329±7.358、52.643±12.075及58.286±14.100(F=34.976,P<0.01)。经AS1、2干预后细胞内IL4-mRNA和细胞培养上清IL4的水平均较AS3和空白组干预后IL-4的水平低(P<0.01)。结论:IL4反义寡核苷酸能够抑制哮喘大鼠CD4+T淋巴细胞IL-4和IL-4mRNA表达;不同序列IL-4反义寡核苷酸抑制作用存在差异。
- 曹勇熊维宁徐永健张珍祥高宝安
- 关键词：哮喘IL-4反义寡核苷酸
- 钾通道在一氧化氮诱导的哮喘患者血清被动致敏的人气道平滑肌舒张中的作用被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨大电导钙依赖性钾通道(BKCa)、电压门控钾通道(Kv)和ATP敏感性钾通道(KATP)在一氧化氮(NO)诱发正常及哮喘血清被动致敏人气道平滑肌(HASM)张力变化中的作用。方法:应用等长张力记录方法,以钾通道阻断剂为工具药,观察NO及联合钾通道阻断剂对正常人及哮喘血清被动致敏的HASM环收缩张力的影响。结果:(1)在正常组和哮喘血清被动致敏组中,Kv的阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)可浓度依赖性地增加组胺(0.1mmol/L)引起的收缩反应,4-AP(1、5、10mmol/L)可显著提高组胺的收缩张力(P<0.05),而KATP的阻断剂格列苯脲(Glib)(10mmol/L)、BKCa的阻断剂四乙铵(TEA)(1mmol/L)对组胺引起的收缩反应无明显影响。被动致敏组中组胺的最大张力明显高于正常组(P<0.05)。(2)NO供体硝普钠(SNP)对正常人及哮喘血清被动致敏的HASM都有舒张作用,其对被动致敏组的舒张作用[(29.4±3.3)%]明显低于正常组[(44.1±10.2)%],两组比较差异有显著性(P<0.05)。(3)Glib对SNP(0.1mmol/L)的舒张作用无影响,4-AP(10mmol/L)对SNP的舒张效应有明显抑制作用(P<0.01)。TEA(1mmol/L)可明显抑制SNP的舒张作用(P<0.05),并且在哮喘血清被动致敏组的抑制作用显著低于正常组(P<0.05)。结论:NO供体SNP部分通过BKCa通道开放舒张HASM,在体外被动致敏状态下,该舒张效应减弱可能与BKCa通道活性下调有关。
- 叶涛徐永健张珍祥刘先胜杨朝高宝安
- 关键词：哮喘一氧化氮被动致敏人气道平滑肌钾通道一氧化氮诱导致敏状态
- 重组腺相关病毒载体抑制哮喘大鼠T淋巴细胞表达白介素5
- 第一部分IL-5反义寡核苷酸对哮喘大鼠CD4+T淋巴细胞IL-5mRNA和蛋白质表达的影响
目的
探讨不同序列的IL-5反义寡核苷酸对哮喘大鼠CD4+T淋巴细胞IL-5mRNA和蛋白质表达的影响。
...
- 高宝安
- 关键词：哮喘大鼠质粒构建质粒转染腺相关病毒
- 哮喘大鼠外周血T淋巴细胞T_H1/T_H2细胞因子和PKCα的表达及银杏叶制剂对其影响被引量：1
- 2006年
- 目的探讨银杏叶制剂对在哮喘免疫学发病机制中起关键作用的T淋巴细胞部分生物学功能的影响。方法14只SD大鼠随机分成哮喘和正常两组,每组7只。从每只大鼠外周血分离出T淋巴细胞进行分组培养,72h后用RT-PCR检测各组IL-2、IL-4、IL-5mRNA的表达量,Westernblot检测各组细胞膜与细胞浆蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)的表达比率。结果IL-2、IL-4、IL-5mRNA表达量在哮喘组分别为0.58±0.086、1.03±0.12、0.48±0.08,正常组分别为0.45±0.03、0.35±0.08、0.15±0.05,各因子两组间比较差异有统计学意义(P<0.01);哮喘组T淋巴细胞给予BN-52021干预后IL-2、IL-4、IL-5mRNA的表达量明显下降(分别为0.49±0.05、0.55±0.09、0.27±0.05,P<0.05);正常组IL-2/IL-4mRNA的比值为1.27±0.20,哮喘组为0.60±0.18,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),其中哮喘组给予BN-52021干预后比值有所增大0.92±0.15,与未干预组比较有明显变化(P<0.01)。哮喘PMA+BN-52021干预组IL-2、IL-4、IL-5mRNA表达量分别为1.52±0.25、1.99±0.36、0.68±0.21,明显低于哮喘PMA干预组(P<0.05),而PMA+Ro31-8220组与PMA+Ro31-8220+BN-52021干预组比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘空白组PKCα在T淋巴细胞胞膜与胞浆的表达量比率为0.629±0.093,显著高于正常对照组(0.056±0.012,P<0.01),BN-52021干预后哮喘组比率较未干预组明显下降0.395±0.098(P<0.05),PMA+BN-52021干预组PKCα比率为0.719±0.163,较PMA干预组(1.28±0.28)低(P<0.05);哮喘各组T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα表达量的比率与IL-4mRNA表达量的相关性分析(n=42,r=0.845,P<0.01)显示呈明显正相关。结论银杏叶制剂对体外培养的哮喘大鼠T淋巴细胞因子IL-2、IL-4、IL-5的分泌均具有抑制作用,而对IL-2分泌的抑制作用相对较弱;银杏叶制剂对哮喘大鼠T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα的表达量比率具有明显的下调作用。
- 唐以军徐永健张珍祥倪望陈仕新高宝安叶涛曹勇杜春玲
- 关键词：银杏叶制剂蛋白激酶C
- 反义白介素4重组腺相关病毒载体气道给药对哮喘大鼠的影响
- 2006年
- 目的构建携带反义Ⅱ-4基因的重组腺相关病毒(rAAV)真核表达载体,并以此干预大鼠哮喘模型,探讨其作为哮喘基因治疗方案的可行性。方法磷酸钙沉淀法将质粒pasIL-4、pXX2及pXX680共转染293T细胞合成携带反义IL-4基因的重组腺相关病毒(rAAV-asIL4)。Southem blot法检测合成病毒的滴度。rAAV-asIL4在动物实验开始的第1天和第14天2次通过气道给药干预哮喘大鼠(T组),实验中同时设立大鼠正常组(N组)、哮喘组(A组)以及rAAV-GFP干预组(C组)。末次激发后处理大鼠,计数肺泡灌洗液(BALF)中有核细胞以及嗜酸性细胞总数,ELISA检测BALF中IL-4和IgE蛋白量,RT-PCR检测肺组织IL-4 mRNA变化,取肺组织作病理学检查。结果分析BAIF中有核细胞细胞总数和Eos总数,结果表明:T组该2项指标较A组和C组有降低趋势,但这3组间差异无统计学意义(P>0．05)。BALF中IL-4、IgE的ELISA检测结果以及肺组织IL-4 mRNA RT-PCR半定量检测结果表明:T组的上述指标水平较A组和C组均明显降低(P<0．01)。T组大鼠肺组织病理学改变较A组和C组轻。结论携带反义IL-4基因的rAAV载体,对于哮喘的干预具有一定的作用。rAAV-asIL4可能具有一定临床应用前景。
- 曹勇熊维宁徐永健张珍祥高宝安杜春玲陆俊羽唐以军
- 关键词：哮喘重组腺相关病毒
- 银杏叶提取物对哮喘豚鼠气道上皮E-钙黏素的影响被引量：5
- 2007年
- 目的研究银杏叶提取物(GBE)对哮喘豚鼠气道上皮E-钙黏素(E-cadherin)水平的影响,以探讨银杏叶提取物治疗哮喘的机制。方法将32只豚鼠随机分成正常对照组(A组)、哮喘未治疗组(B组)、哮喘地塞米松治疗组(C组)、哮喘GBE治疗组(D组)。通过苏木精-伊红染色观察气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况,利用免疫组织化学检测气道上皮的E-钙黏素蛋白水平,利用Western blot检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中可溶性E-钙黏素胞外段的水平,利用RT-PCR检测气道上皮细胞内E-钙黏素mRNA水平。结果C组、D组气道上皮的E-钙黏素水平明显高于A组,低于B组;C组、D组气道壁EOS计数及BALF中E-钙黏素胞外段的水平则显著高于A组,低于B组;各组上皮细胞内E-钙黏素mRNA水平无显著性差异。结论GBE可抑制气道上皮E-钙黏素的胞外段裂解、脱落,从而维持E-钙黏素水平,保护上皮细胞的屏障功能,减轻气道炎症。这很可能是GBE治疗哮喘的机制之一。
- 杜春玲徐永健张珍祥曹勇唐以军陆俊羽高宝安
- 关键词：银杏叶提取物哮喘E-钙黏素
- 银杏叶提取物对哮喘大鼠气道炎性细胞蛋白激酶Cα表达及白细胞介素-4分泌的影响被引量：4
- 2006年
- 目的探讨银杏叶提取物(EGb)对哮喘的治疗效果及可能机制。方法48只SD大鼠随机分成:正常对照组(6只)、哮喘组(此组再分为:未处理组,激素处理1、2、4周组,EGb处理1、2、4周组,每组各6只)。采用Wright染色法计数肺泡灌洗液中各类炎性细胞的相对数,免疫组化(SP)法测定蛋白激酶Cα(PKCα)的表达情况,ELISA法测定肺泡灌洗液上清中IL-4的含量。结果哮喘未处理组大鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞相对计数百分比、PKCα在淋巴细胞和总的细胞中的阳性表达率以及上清液中IL-4含量均显著高于正常对照组(均P<0.05)。与未处理组比较,激素处理不同时间组前述各指标均明显下降(均P<0.05)。EGb处理1、2周组各指标明显高于激素处理组(P<0.05),4周组与激素处理组比较无明显差异。EGb处理1周组除淋巴细胞PKCα阳性表达率外,其余检测指标与哮喘未处理组比较均无明显差异(均P>0.05),而EGb处理2、4周组相关检测指标均明显下降(均P<0.05),且随时间延长,下降更明显(P<0.05)。EGb处理组炎性细胞PKCα阳性表达率与上清液中IL-4、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的相对计数百分比呈显著正相关(r值分别为0.641、0.699、0.625,均P<0.01,n=18)。结论EGb可减轻气道EOS和淋巴细胞等炎性细胞的浸润以及气道炎性细胞PKCα的阳性表达率和IL-4的分泌量,其作用弱于糖皮质激素,但随着药物治疗时间的延长其药理作用逐渐明显。EGb治疗哮喘的作用可能与其减少炎性细胞PKCα的表达进而降低EOS和淋巴细胞在气道的浸润以及IL-4的浓度有关。
- 唐以军徐永健张珍祥倪望陈仕新高宝安叶涛曹勇杜春玲
- 关键词：支气管哮喘银杏叶提取物蛋白激酶CΑ白细胞介素-4
- 白细胞介素4反义基因腺相关病毒载体质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建携带大鼠反义白细胞介素4(IL-4)基因并含有腺相关病毒(AAV)末端反向重复序列(ITR)结构的重组质粒载体pasIL-4。方法利用基因重组技术将大鼠IL-4 cDNA反向克隆到已酶切去除绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体phMGFP中,构建重组中间质粒载体。通过PCR技术扩增获取重组中间质粒载体上的目的片段CMVp-asIL4-SV40E,将此目的片段定向插入已酶切处理的psub201中,构建出重组质粒pasIL-4。进一步通过阳离子脂质体介导,将pasIL-4转染哮喘大鼠CD4+T细胞,RT-PCR法和ELISA法分别检测细胞中IL-4 mRNA和细胞培养上清液IL-4蛋白的变化。结果pasIL-4经限制性酶切及部分序列测序分析证实IL-4反向插入正确。pasIL-4重组质粒转染的CD4+T细胞IL-4 mRNA水平和细胞培养上清液中IL-4水平较未转染组明显下降。结论pasIL-4重组质粒载体构建成功,为今后利用其进行哮喘基因治疗的研究奠定基础。
- 曹勇熊维宁徐永健张珍祥高宝安陆俊羽
- 关键词：哮喘白细胞介素4腺相关病毒质粒
- 反义IL-5重组腺相关病毒真核表达载体质粒pasIL-5/rAAV的构建和转染被引量：2
- 2005年
- 高宝安熊维宁徐永健张珍祥曹勇唐以军叶涛钟声杜春玲
- 关键词：CD4^+T淋巴细胞腺相关病毒
