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噬菌体呈示单链抗体表达载体及小鼠非特异抗体库的构建被引量：9: 1999年; 用大肠杆菌丝状噬菌体表面呈示技术构建抗体库的方法，为从抗原出发获得特异抗体提供了新的途径。报道的是，首先构建了一个用于噬菌体呈示抗体的噬粒表达载体ｐＦＵＷ８０，它具有既可以进行外分明表达，又可进行附着表达的特点。然后利用设计的一套扩增小鼠抗体重链和轻链可变区基因片段的ＰＣＲ引物，从未免疫小鼠脾细胞中扩增出了抗体重、轻链可变区基因，构建了一个１．２×１０６库容的小鼠非特异性单链抗体库。从这个抗体库中，筛选出了针对人ＩｇＧ的单链抗体噬菌体，并进行了ＥＬＩＳＡ检测和部分序列分析。这一初步结果为今后继续利用这一系统进行研究奠定了基础。; 张卫国刘喜富王勇蒋欣林晴陈艾吴朝伟黄浩旻李志华张屹黄华梁; 关键词：单链抗体

抗人膀胱癌单克隆抗体重、轻链可变区基因体外扩增、克隆及序列分析被引量：2: 1996年; 应用人工合成的两套引物，从分泌抗人膀胱癌特异性单抗的杂交瘤细胞ＢＤＩ－１中提取总ＤＮＡ。以之作模板，经ＰＣＲ法扩增出重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ＰＵＣ１９质粒，筛选出阳性克隆，用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。结果表明：重链可变区基因全长３６６ｂｐ，编码１２２个氨基酸，属于小鼠重链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＩ，由种系基因中的ＶＨ与Ｄ基因的Ｄｓｐ２．２及ＪＨ４基因重排而成；轻链可变区基因全长３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，属于小鼠轻链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＶ，由种系基因中的Ｖκ与Ｊκ４基因重排而成。与已发表的抗体可变区基因序列比较。; 萧飒俞莉章顾征刘喜富郭应禄顾方六王勇陈艾宋海燕林晴黄华梁; 关键词：基因表达调节单克隆抗体轻链

抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达被引量：9: 1996年; 设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.; 刘喜富萧飒顾征王勇陈艾林晴张卫国黄华梁孙健陈润生沈倍奋陈兴; 关键词：CD3 单链抗体分子设计基因表达

抗人肺腺癌单克隆抗体重、轻链可变区基因的分离克隆和序列测定被引量：8: 1996年; 根据鼠免疫球蛋白重。轻链可变区基因ＦＲ１和ＦＲ４的序列保守性，化学合成了适于体外扩增Ｉｇ重、轻链可变区基因（Ｖ_Ｈ和Ｖ_Ｌ）的数对引物。以分泌抗人肺腺癌单抗的杂交瘤细胞株ＷＬＡ－２Ｃ４的基因组ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增Ｖ_Ｈ和Ｖ_Ｌ基因，分别克隆人ｐＵＣ１９载体。转化子经蓝、白斑筛选，酶切鉴定，双脱氧测序证实确为鼠单抗可变区基因，其中Ｖ_Ｈ基因全长为３４８ｂｐ，编码１１６ａａ，属重链ⅡＢ亚类；Ｖ_Ｌ基因全长３１８ｂｐ，编码１０６ａａ，属Ｋ轻链Ⅵ亚类。; 王勇刘喜富顾征萧飒陈艾林晴黄华梁王登顺李新元; 关键词：单克隆抗体可变区基因克隆

抗人肺腺癌单链抗体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：5: 1999年; 目的:构建抗肺腺癌的单链抗体(scFv),研究其表达条件,为将这一小分子抗体应用于临床奠定基础.方法:将抗人肺腺癌单克隆抗体的重链及轻链可变区基因插入表达载体pFUW80、pTH、pTF,分别在大肠杆菌XL1-Blue、Top10、GI698/GI724中诱导表达,得到噬菌体抗体或包涵体.用SDS-PAGE和ELISA鉴定检测活性.结果:SDS-PAGE的结果表明,在pTH和pTF的表达产物中,有一条43kD的特异条带,其分子量与预期相符,单链抗体以包涵体形式出现,其表达量达细菌总蛋白的18.6%.ELISA的结果表明,噬菌体抗体和经复性处理的包涵体具有与亲本单抗相同的特异性.结论:成功地构建和在大肠杆菌中表达了抗肺腺癌单链抗体.; 吴朝伟张屹张明生黄浩旻林晴俞小淙陈艾黄华梁李新元王登顺; 关键词：肺腺癌单链抗体噬菌体抗体 ELISA

抗人CD3单抗轻、重链可变区基因的克隆及序列分析被引量：2: 1996年; 根据抗体基因可变区两端保守序列ＦＲ１和ＦＲ４，设计并化学合成轻重链ＰＣＲ扩增引物。从体外培养细胞ＵＣＨＴ１中提取总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ扩增轻，重链可变区基因片段。将扩增片段克隆至ｐＵＣ１９质粒，筛选阳性克隆并测序，序列分析结果为重链３６６ｐｂ，编码１２２个氨基酸，轻链３２７ｂｐ。; 萧飒顾征王勇陈艾林晴张卫国蒋欣黄华梁沈倍奋; 关键词：PCR

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