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刘喜富: 作品数：20 被引量：58H指数：5; 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划卫生部科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>

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逆转病毒介导的突变型p53基因增加人肺癌细胞耐药性研究被引量：1: 1997年; 应用PCR等方法从含有p53基因突变的人肺癌细胞系GL总RNA中扩增并克隆了人突变型p53基因(mt)cDNA.序列分析证实该cDNA含有人p53基因全部编码序列,在codon245出现了G→T突变,导致由甘氨酸变为半胱氨酸.构建了其逆转病毒表达载体(pD53M),并将该载体导入没有p53突变的药物敏感癌细胞系GAO.免疫组织化学证实pD53M转染的GAO细胞有突变型p53蛋白表达,说明重组逆转病毒表达载体pD53M在GAO细胞中可以稳定表达.体内和体外实验表明pD53M转染的GAO细胞对几种抗癌药的耐药性有不同程度的增加,最高增加了4倍.用定量PCR和FCM分析发现转染细胞MDR1基因表达没有增高,Pgp功能没有加强,MRP基因表达轻度增高,Mrp功能稍微加强,这提示突变型p53导致的耐药性可能与MDR1/Pgp无关,而与MRP/Mrp可能有一定关系.; 高振强高志萍刘喜富张志华张涛孙仁会; 关键词：肺肿瘤 P53基因癌细胞耐药性

MDR1 ribozyme逆转耐药人肺癌细胞耐药性: 1997年; 恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病,死亡率极高。50％病人可以手术和放疗,另外50％病人因不能手术和放疗而需化疗。然而这些病人常化疗失败,其主要原因是肿瘤产生耐药性。人恶性肿瘤中MDR1基因及其产物P-糖蛋白(Pgp)表达非常普遍,约50％的肿瘤在治疗前即有MDR1基因表达,治疗后MDR1基因表达的百分比更高,同时肿瘤细胞对原先敏感的抗癌药物也不敏感,即产生了耐药性。ribozyme是一类具有RNA限制性内酶活性的RNA分子,可以识别RNA序列中的GUX(X为A,C,U)序列并进行有效切割,其中一种具有锤头结构(hammerhead)模型特征,根据此原理人工设计的ribozyme可以特异地定点切割靶RNA分子,阻断蛋白质表达。我们曾发现MDR1反义RNA可以明显抑制Pgp表达,但没有完全抑制。本研究利用逆转病毒介导的MDR1基因特异ribozyme,抑制人肺癌耐药细胞Pgp表达,探讨逆转其耐药性的可能性。; 高振强高志萍刘喜富; 关键词：逆转录病毒 MDR1基因 RIBOZYME 耐药性肺癌

肿瘤特异表达的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对人肺腺癌的实验治疗被引量：3: 1997年; 利用CEA(癌胚抗原)只在肺腺癌中表达,而不在正常肺组织中表达的特点,构建了由CEA启动子控制的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)的逆转病毒载体(pCEATK),然后将pCEATK导入表达CEA的人肺腺癌细胞GL和不表达CEA的HeLa细胞,在体内外观察了Ganciclovir(GCV)的治疗效果和“旁观者效应”.结果表明pCEATK只在表达CEA的肺腺癌GL细胞中特异表达,而不在HeLa细胞表达;GL的pCEATK转染细胞对GCV的敏感性增加了992倍,在裸鼠体内GCV也可以明显抑制GL转染细胞的生长,并有明显的“旁观者效应”现象;而HeLa的pCEATK转染细胞体内外对GCV的敏感性没有明显变化.这提示由CEA启动子控制的HSV-TK的逆转病毒载体对表达CEA的人肺腺癌的基因治疗可能是治疗人肺腺癌的有效方法.; 高振强高志萍张涛刘喜富; 关键词：肺癌单纯疱疹病毒胸苷激酶基因

抗人CD3改形单链抗体的构建、表达及活性测定被引量：4: 2000年; CD3单抗通过多种途径有效地影响机体的免疫状态，在临床应用中具有极大的潜力。为克服鼠源单抗用于临床的局限性，拟采用抗体工程技术研制抗人CD3改形单链抗体。首先，将鼠源CD3单抗OKT3轻重链CDRs分别移植到人源抗体LS1轻链和Nd重链的框架中，经计算机模拟其空间构象，进行残基替换，确定CD3改形VL、VH_氨基酸序列，化学合成改形VL、VH_基因，将其分别插入至载体pROH80中，构建成抗人CD3改形单链抗体（scFv）基因。再将scFv基因克隆至构建的表达载体pALM中诱导表达，产物主要为包涵体。对包涵体进行变性和复性，用IMAC法纯化，FACS法测定CD3改形scFv与抗原的结合活性，显示其竞争抑制率为18%。; 蒋欣俞小淙刘喜富张卫国黄浩旻林晴孙健陈润生黄华梁; 关键词：CD3

抗甜菜坏死黄脉病毒单抗轻链可变区基因的克隆及全序列测定被引量：1: 1994年; The results showed that PCR product was 318 bp V L gene of monoclonal antibody against beet necrotic yellow vein virus, code 106 amino acids. V L gene belongs to a k chain subelass Ⅱ of mouse, frame region had 85% homogenous with the published sequencing of V L gene of mouse and was in accord with structural characteristics of V L of mouse.; 李振甫吴有强刘喜富黄华樑蔡祝南; 关键词：甜菜坏死黄脉病毒轻链可变区基因

人体乳腺癌细胞系Bcap－37和MCF－7的细胞遗传学研究被引量：2: 1994年; 应用低温同步法与秋水酰胺处理，对人体乳腺癌细胞系Ｂｃａｐ－３７和ＭＣＦ－７的中期及早中期细胞进行Ｇ－显带分析。研究表明，Ｂｃａｐ－３７细胞染色体众数为６３，可识别其结构的标记染色体１７条；ＭＣＦ－７细胞染色体众数为５６，可识别其结构的标记染色体１３条。结合文献报道以及本研究结果显示，乳腺癌中最常涉及到第１、３、５、７、１１、１３和１７号染色体结构及数目的异常，染色体断裂点１ｐ１１（１ｑ１１）、１ｐ１３、３ｐ２１、３ｑ１１、５ｑ１１、６ｑ１３、６ｑ２３、７ｑ２２、１１ｐ１３和１１ｐ１５也经常涉及；它们可能与癌相关基因的激活和抗癌基因的丢失有关，从而在乳腺癌发生发展中起一定作用。; 刘喜富柳家英阎武邹俊华韩玲刘卉王松霞张嘉庆; 关键词：细胞系乳腺癌细胞遗传学

单链抗体通用表达载体构建及抗人CD3单链抗体、改形抗体的研究: 刘喜富; 关键词：单链抗体分子模拟

胃癌组织P53基因突变类型分析被引量：4: 1996年; 为了探讨胃癌病因，我们用聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术分析了胃癌高发区胃癌组织Ｐ５３基因的改变。９０例胃癌中有４５例Ｐ５３基因发生改变，其中３９例为点突变，６例为缺失和插入突变，Ｐ５３基因点突变以Ｇ→Ａ和Ａ→Ｇ突变为主（６６．７％），Ｇ→Ｔ和Ｔ→Ｇ占１５．５％，这些结果提示Ｐ５３基因改变与胃癌的发生有密切关系。; 高振强高志萍刘喜富潘小川潘小川刘兵马洪义; 关键词：胃肿瘤 P53 基因基因突变

抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达被引量：9: 1996年; 设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.; 刘喜富萧飒顾征王勇陈艾林晴张卫国黄华梁孙健陈润生沈倍奋陈兴; 关键词：CD3 单链抗体分子设计基因表达

原位移植人耐药肺癌的p53基因与药物的联合治疗: 1997年; 人耐药肺癌细胞ＧＬＫ的Ｐ５３基因在ｃｏｄｏｍ２４５发生Ｇ－Ｆ突变，利用ＧＬＤ铁裸鼠原位移植模型，将逆转病毒载体介导的野生型Ｐ５３基因通过气管注入，以增加ＧＬＫ细胞的药物敏感性，然后结合腹腔注射阿霉素进行实验治疗，结果发现肺内接种２×１０＾７ＧＬＫ细胞后３０天，７５％的对照组裸鼠形成肉眼可见的肿瘤结节；单独气管注入ＰＤＯＲ５３Ｗ培养上清液的裸鼠有约３７％成瘤，而且肿瘤的肿瘤结节。; 高振强高志萍刘喜富张涛; 关键词：肺肿瘤癌细胞耐药性 P53基因

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