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结核分枝杆菌候选抗原基因克隆与表达质粒构建被引量：2: 2003年; 目的克隆并构建编码结核分枝杆菌(MTB)ESAT6,Ag85B和MPT64分泌蛋白的重组表达质粒。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中分别扩增出ESAT6,Ag85B和MPT64基因(288bp,978bp and 687bp),并克隆到T载体,然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pGEX-4T-2连接,转化大肠杆菌E.coli DH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致,证实符合表达框架。结论成功地克隆并构建了ESAT6,Ag85B和MPT64基因的重组表达质粒pGEX-ESAT6,pGEX-Ag85B和pGEX-MPT64。; 陈建波罗一鲁谭守勇冯蝶仪曹智忠刘志辉; 关键词：结核分枝杆菌抗原基因克隆表达质粒聚合酶链反应

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应研究: 2003年; 目的　研究单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV1 TK)基因转染并联合抗病毒药更昔洛韦 (Ganciclovir ,GCV)对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应。方法　采用基因工程技术构建带HSV1-TK基因的逆转录病毒重组体pLX SN TK ,采用脂质体介导入PA317包装细胞 ,建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株PA317 TK ;用该细胞上清液转导人胶质母细胞瘤细胞 ,用不同浓度GCV作用人胶质母细胞瘤细胞SW0 38 C2 TK和野生型SW0 38 C2 ,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测 72h后细胞存活率 ,并求出半杀伤浓度。结果　重组逆转录病毒载体pLXSN TK能有效地将TK基因导入SW0 38-C2细胞内 ,并使其获得对GCV的敏感性 ;体外细胞毒实验 :在 2 0 μmol LGCV存在的情况下 ,野生型细胞无明显改变 ,而实验组细胞明显死亡 ,半杀伤浓度IC50 为 0 8μmol L ,与SW0 38 C2相比 ,对GCV的敏感性提高了 6 0 0倍 ,旁杀效果也较明显。结论　SW0 38 C2转染TK基因后 ,能有效地被GCV杀灭。; 郭中敏林以理陈建波陈系古; 关键词：胶质母细胞瘤单纯疱疹病毒基因细胞转染

脑脊液腺苷脱氨酶测定在结核性脑膜炎患者诊断中的价值被引量：8: 2005年; 目的探讨脑脊液腺苷脱氨酶(ADA)含量在结核性脑膜炎患者中的诊断价值。方法选取结核性脑膜炎患者,无菌性脑膜炎患者及对照组96例,应用连续监测法,采用日立7170型全自动生化分析仪,对脑脊液中的ADA含量进行测定。结果结核性脑膜炎患者脑脊液中ADA含量明显高于无菌性脑膜炎组及对照组(P<0.01),无菌性脑膜炎患者脑脊液中的ADA含量与对照组比较没有显著性变化(P>0.05)。结论脑脊液ADA含量测定有助于结核性脑膜炎的诊断。; 冯品宁龙伟清高玲陈建波; 关键词：脑脊液腺苷脱氨酶结核性脑膜炎无菌性脑膜炎

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对肺腺癌细胞杀伤作用探讨: 2002年; 目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转染联合抗病毒药物更昔洛韦(GCV)对人肺腺癌细胞系的杀伤作用。方法应用基因工程技术构建了携带单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因的逆转录病毒重组体pLXSN-tk,通过脂质体法转染PA317细胞,G418筛选出产重组病毒颗粒的生产细胞PA317-tk细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSV-tk/GCV系统对人肺腺癌细胞系GLC-82的生长抑制率。结果重组逆转录病毒载体能有效地将HSV-tk(基因导入GLC-82细胞系内并使其获得对GCV的敏感性。结论肺腺癌细胞转染HSV-tk基因后,能有效地被GCV杀死。; 陈建波罗一鲁郭中敏陈系古; 关键词：肺腺癌更昔洛韦基因疗法胸苷激酶

结核分枝杆菌Ag85B基因克隆及表达质粒构建被引量：1: 2003年; 目的　克隆并构建编码结核分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B基因 (978bp) ,并克隆到T载体 ,然后用双内切酶消化后 ,与同样酶消化的pGEX 4T 2连接 ,转入大肠杆菌E .coliDH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果　酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符 ,测序结果与文献报道一致 ,证实符合表达框架。结论　成功地克隆并构建了Ag85B基因的重组表达质粒 pGEX Ag85BV。; 刘俊华冯蝶仪陈建波陈郁筠; 关键词：结核分枝杆菌抗原 AG85B 基因重组

鼠疫二价颗粒疫苗和重组李斯特菌载体疫苗的研究: 鼠疫耶尔森菌被普遍认为是可能用于生物战剂或生物恐怖的高致病微生物，同时，也存在肺炎型鼠疫在人类传播导致致死性肺炎的可能性。用于人群使用的鼠疫疫苗有两种，一种是用毒性鼠疫杆菌经甲醛处理而成的死菌疫苗，另一种是用减毒突变株E...; 陈建波; 关键词：鼠疫李斯特菌载体疫苗; 文献传递

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肿瘤基因治疗中的应用被引量：2: 2004年; 胸苷激酶基因在细菌和哺乳动物细胞中都存在,但只有病毒的胸苷激酶如单纯疱疹病毒胸苷激酶才能使更昔洛伟(ganciclovir,GCV)等核苷类似物磷酸化,磷酸化的核苷类似物干扰DNA的合成而中止细胞的复制,尤其在肿瘤细胞中。在近10年,人们利用HSV-tk基因通过病毒载体转染多种肿瘤细胞,然后给予更昔洛伟(GCV)或阿昔洛伟(acyclovir,ACV),在体外、体内试验对肿瘤细胞的杀伤作用都很明显。另外HSV-tk/GCV系统在抗肿瘤作用中有“旁观者”效应,即转染有HSV-tk基因的靶细胞与未转染的HSV-tk基因的靶细胞同样可被GCV杀伤。由于HSV-tk/GCV系统的抗肿瘤作用效果明显,安全性好,越来越多的肿瘤患者志愿接受实验,该系统已获准临床实验。本文综述了近10年来HSV-tk/GCV系统在抗肿瘤治疗探索中的应用,大量资料显示HSV-tk基因用于抗肿瘤治疗将是本世纪的重要方法。; 郭中敏陈建波陈颖青陈系古; 关键词：药物敏感基因胸苷激酶基因肿瘤基因治疗

结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：1: 2004年; 目的通过结核分支杆菌Ag85B蛋白编码基因在大肠杆菌中稳定表达,以获得大量纯化的Ag85B蛋白。方法采用DNA重组技术构建结核分支杆菌Ag85B基因的表达载体,双酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定重组子,阳性重组子转化大肠杆菌,并诱导表达外源蛋白。十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中的表达,对染色的凝胶扫描,以测定目的蛋白表达水平。结果菌体蛋白经SDSPAGE,含阳性重组质粒的菌体蛋白中出现一条新蛋白带,表达量占菌体总蛋白的33%～38%。Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中表达方式主要是包涵体形式。结论构建的大肠杆菌重组体能高效表达结核分支杆菌Ag85B蛋白抗原。; 罗一鲁陈建波冯蝶仪谭守勇陈郁筠; 关键词：分支杆菌抗原重组体

单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV1-tk)基因的逆转录病毒载体构建及其抗肿瘤基础研究: 研究目的:目前肿瘤基因治疗中,最常用的载体是逆转录病毒载体,研究最多的基因是单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV1-tk)基因.以单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV1-tk)联合抗病毒药物更昔洛韦治疗癌症的方案受到广泛支持,许多国...; 陈建波; 关键词：单纯疱疹病毒基因重组; 文献传递

HSV-tk基因逆转录病毒重组体的构建与DNA序列分析被引量：4: 2002年; 目的　构建含有单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (HSV1 tk)基因的逆转录病毒重组载体pLXSN TK。方法设计一对寡核苷酸引物 ,用PCR方法从质粒pHSV10 6中特异扩增HSV tk基因片段 ( 1168bp) ,分别用BamHI和Eco RI酶切后 ,定向连接到质粒pLXSN中 ,转化宿主菌TG1,分别用上述内切酶 ,PCR和DNA测序鉴定重组质粒。结果　酶切鉴定所切下的片段和PCR扩增的片段大小均与预计相符 ,测序结果与文献报道序列及预计结果一致 ,证实符合表达框架。结论　成功构建了HSV tk嵌合重组质粒pLXSN TK。; 陈建波罗一鲁郭忠敏陈系古; 关键词：单纯疱疹病毒属胸苷激酶 HSV-TK基因 DNA序列质粒

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陈建波

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