陆鹏
- 作品数：10 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 登革病毒1～4型E蛋白结构域Ⅲ融合蛋白的表达纯化及功能研究
- 2010年
- 目的 了解原核表达的登革病毒（Dengue virus,DV）1～4型融合的E蛋白结构域Ⅲ直接抑制登革病毒感染及其抗体的中和作用.方法 通过连接肽将1～4型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区串联的基因产物插入PET30a在大肠埃希菌中进行表达、纯化后,应用Western Blot及间接ELISA验证表达产物.将融合蛋白免疫新西兰大白兔制备免疫血清,应用间接免疫荧光检测多抗血清的活性.将融合蛋白及多抗血清分别进行阻断实验和中和实验,对抗原及抗体的功能进行研究.结果 在大肠埃希菌中成功表达了串联的登革病毒1～4型E蛋白结构域Ⅲ融合蛋白,并得到兔抗免疫血清,分别对融合蛋白及兔抗免疫血清进行验证.融合蛋白能够阻断1～4型DV感染,兔抗免疫血清能中和1～4型DV,但中和抗体效价不同.结论 串联表达的登革病毒包膜蛋白Ⅲ区可抑制登革病毒感染,串联rEⅢ蛋白免疫新西兰大白兔产生的针对DV1～4型包膜蛋白结构域Ⅲ区的抗体对登革病毒具有中和作用.
- 牛国宇陆鹏张硕张全福李川梁米芳徐方李德新
- 关键词：登革病毒病毒包膜蛋白质类
- 乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体，为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型疫苗奠定基础。方法（1）构建了两个乙脑病毒复制子：一个为完全缺失PrM／E基因（命名为Full △prMJE Replicon）；一个保留E基因C端213bp（命名为Partial △prM／E Replicon），并代之以多克隆位点。（2）将复制子RNA转染BHK-21细胞，于24、48、72、96h采用Real-time PCR验证复制子的自主复制能力。（3）于复制子多克隆位点处插入YFP报告基因，并将含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞，采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证YFP的表达。结果（1）两个复制子RNA转染BHK-21细胞后，RNA有随时间增加而不断增多的趋势。（2）含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞后，荧光信号持续增强，表达YFP的阳性细胞率也逐渐增多。结论构建的乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体Full △prM／E Replicon及Partial △prM／E Replicon具有自主复制能力及对外源蛋白的表达能力。
- 韦艳李川陆鹏于建石李建东刘琴芝张全福李德新
- 关键词：脑炎病毒复制子杂合子检测
- 登革病毒血清学早期诊断试剂
- 本发明提供了登革病毒血清学诊断试剂，具体地是将登革病毒1、2、3和4型的EIII结构域串联得到重组融合蛋白rEIII，用于登革病毒感染的血清学诊断。此外，本发明还提供了适用于登革病毒感染的早期诊断试剂盒。本发明为登革病毒...
- 李德新梁米芳张全福陆鹏李建东王晓芳
- 登革2型病毒ZS01／01株E蛋白在真核细胞中的分泌表达研究被引量：1
- 2011年
- 目的对登革2型病毒（DENV-2）ZSO1／01株E蛋白在哺乳动物细胞及昆虫细胞中的分泌表达进行研究。方法RT．PCR扩增DENV-2prM／E基因，通过融合PCR在prM基因前添加来自乙型脑炎病毒的信号肽序列，并将E基因羧基末端20％区域缺失或替换为乙型脑炎病毒SA14-2株E基因相应序列，将上述基因元件分别克隆人哺乳动物细胞表达载体pcDNA5／FRT及昆虫细胞表达载体pAcUW51-M中，将重组质粒转染293T细胞或Sf9细胞，利用间接免疫荧光（Immunofluoreseence assay，IFA）及Western Blot检测E蛋白的表达与分泌。结果各重组质粒分别转染293T细胞或Sit）细胞后，E蛋白在细胞内均有效表达，而仅有携带乙脑信号肽且缺失或替换E基因羧基末端20％区域的重组质粒转染293T细胞后，上清中可检测到明显的E蛋白分泌。结论信号肽及E基因羧基末端20％区域对登革病毒E蛋白的分泌至关重要，宿主细胞对其亦有一定影响。
- 张硕顾雯李川苗芳陆鹏曲靖韦艳张全福刘琴芝李建东梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒
- 用表达T7RNA聚合酶细胞系拯救麻疹病毒微复制子被引量：4
- 2007年
- 构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系,用于提高拯救麻疹病毒微复制子效率。PCR扩增T7RNA聚合酶基因,克隆到真核表达载体,转染Vero细胞,用G418筛选到稳定表达的细胞株Vero/pcDNA3-T7。用Westernblotting证明了T7RNA聚合酶在细胞中的表达。将T7启动子控制绿色荧光蛋白表达的质粒转染该细胞后,绿色荧光蛋白在细胞株中得到表达。反向插入报告基因的微复制子转染感染麻疹病毒的Vero/pcDNA3-T7细胞后,细胞中能够检测到报告基因的表达。用细胞系取代痘苗病毒系统,可以提高拯救效率。
- 修梅红王芹唐丽华曹守春李伟红韦燕陆鹏梁米芳李德新
- 关键词：细胞系麻疹病毒
- 登革病毒血清学早期诊断试剂
- 本发明提供了登革病毒血清学诊断试剂，具体地是将登革病毒1、2、3和4型的EIII结构域串联得到重组融合蛋白rEIII，用于登革病毒感染的血清学诊断。此外，本发明还提供了适用于登革病毒感染的早期诊断试剂盒。本发明为登革病毒...
- 李德新梁米芳张全福陆鹏李建东王晓芳
- 文献传递
- 登革病毒E蛋白结构域Ⅲ的表达及其在登革热血清学早期诊断中的初步应用
- 登革病毒(Dengue virus,DV)属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus),分为四个血清型。可引起登革热、登革出血热和登革休克综合征。登革病毒通过伊蚊传播,主要在热带、亚热带地区流...
- 陆鹏
- 关键词：登革病毒外膜蛋白
- 文献传递
- 汉坦病毒经不同途径黏膜免疫效果研究
- 2008年
- 目的 以大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位为佐剂研究汉坦病毒经不同黏膜途径免疫的效果。方法 以乳糖为诱导剂，在大肠埃希菌表达不耐热肠毒素B亚单位（LTB），Ni^2＋亲和层析进行纯化。以灭活汉坦病毒84Fii株为疫苗，LTB为佐剂，分别采用滴鼻、口服、经阴道3种黏膜途径接种C37BL／6小鼠。ELISA检测血清中特异IgG和阴道冲洗液中特异IgA。结果 免疫印迹和神经节苷脂结合活性研究，证实了LTB的表达。经滴鼻、口服、阴道免疫，均可诱导分泌型IgA抗体和血清IgG抗体反应，不同途径接种组间差异无统计学意义。结论 以LTB为佐剂的灭活汉坦病毒通过3种黏膜途径均能产生抗汉坦病毒黏膜免疫和系统免疫应答。
- 曹守春李建东陆鹏刘峰王芹刘琴芝张全福李川安琪梁米芳李德新
- 关键词：汉坦病毒免疫黏膜免疫接种
- 重组登革病毒E蛋白结构域Ⅲ抑制登革病毒感染的初步研究
- 2008年
- 目的 了解原核表达的登革病毒（dengue virus，DV）的E蛋白结构域Ⅲ直接抑制登革病毒感染及其抗体的中和作用。方法 在大肠埃希菌中表达l～4型登革病毒E蛋白结构域Ⅲ（EⅢ）。重组蛋白纯化后，进行阻断DV．2感染BHK-21细胞试验。用重组蛋白制备免疫血清，检测抗体中和作用。结果 在大肠埃希菌中成功表达了1～4型登革病毒E蛋白结构域埃希菌，4型重组E蛋白结构域Ⅲ均能够阻断2型DV感染，4型重组蛋白的免疫血清均能中和2型DV，但中和抗体效价不同。结论 原核表达的登革病毒结构域Ⅲ可以直接抑制病毒感染，所产生的抗体具有中和作用。直接抑制和中和抗体均对同型病毒作用较强。
- 陆鹏韦艳曹守春李建东刘琴芝张全福李川苗芳张硕杭小同梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒病毒感染
- 乙脑/登革2型嵌合病毒的构建
- 2009年
- 在乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体pPartial△prM/E中克隆入DV2(Dengue virus serotype 2)的prM/E基因,构建乙脑/登革2型嵌合体克隆。将嵌合体克隆线性化后体外转录,获得的RNA转染BHK-21细胞,5～7d可观察到CPE。收获病毒上清液分别感染BHK-21细胞及C6/36细胞。接种于C6/36细胞中的嵌合病毒可使细胞出现CPE,RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot检测显示:获得的嵌合病毒具有预期嵌合性核酸并能表达DV2的包膜蛋白,但不能在BHK-21细胞中传代培养。成功构建的乙脑/登革2型感染性克隆为进一步研究登革病毒疫苗奠定了基础。
- 韦艳陆鹏于建石李建东刘琴芝张全福李川苗芳张硕杭小同李德新
- 关键词：乙脑嵌合病毒感染性克隆
