长濑文彦
- 作品数：3 被引量：20H指数：2
- 供职机构：名古屋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- C端带Myc和多聚组氨酸双标记的重组人β-防御素-2在COS-7细胞的转染表达被引量：17
- 2003年
- 本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素 - 2 (h BD- 2 ) ,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线。将 h BD- 2的全长 c DNA片段插入编码双重报告基因 Myc和 6个多聚组氨酸 (His)的真核表达质粒 pc DNA3.1/Myc- His(+) ,构建出 C端带 Myc和 6× His的 rpc DNA3.1/Myc-His(+) /h BD- 2。用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入 COS- 7细胞 ,分别从 m RNA和蛋白质水平分析 h BD-2的表达情况并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。采用 RT- PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约 2 4 0 bp的片段 ,其大小与预测相符。采用 Western blot法 ,用抗 His抗体检测到细胞可溶性蛋白在约 10 Kd处有强反应条带显示 ,其大小与该重组质粒结构中由 p CMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量 (10 .1)相符。双层肉汤琼脂平板扩散法结果显示 :分别与正常细胞可溶性蛋白和培养上清比较 ,转染重组质粒的 COS- 7细胞的可溶性蛋白及培养上清在金黄色葡萄球菌的平板上均形成明显抑菌环。这些结果提示 :所建立的 h BD- 2哺乳类动物细胞表达系统能有效表达和分泌活性 h BD- 2。
- 蔡绍晖杜军陈新年黄宁长濑文彦长谷川高明王伯瑶
- 关键词：COS-7细胞RT-PCR法Β-防御素-2
- C端带cmyc和多聚组氨酸双标记的重组人β防御素-2真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的转染表达
- 2000年
- 目的：人类β-防御素(β-defensins hBDs)是一类具广谱抗微生物活性的小分子阳离子多肽，在人体多种器官尤其是粘膜上皮细胞中广泛存在，起着重要的屏障防御作用。由于hBD-2在粘膜上皮组织受炎症刺激呈诱导性表达，提示其在机体粘膜防御中的作用更为突出。本研究旨在探索建立不仅能有效表达和分泌人类β-防御素-2而且其表达产物易于被检测和分离纯化的哺乳类动物型工程细胞的可能性及技术路线。
- 蔡绍晖杜军陈新年黄宁王莉长濑文彦长谷川高明王伯瑶
- 关键词：防御素转染COS-7细胞粘膜上皮细胞HBD-2
- 克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠β-防御素-4基因表达及其信号传递被引量：3
- 2001年
- 目的 探讨用克雷伯氏肺炎杆菌内毒素 (L PS)对小鼠 β-防御素表达的影响及其相关的信号传导通路。方法 分别给予 C3H /He J和 C3H /He N小鼠腹腔注射 L PS (4mg/kg) ,于不同时间点采取气管、肺、肾等组织 ,提取总 RNA。用 RT- PCR检测各组织β-防御素 - 3和 /或β-防御素 - 4m RNA的表达 ,并对扩增出的 c DNA片段进行测序 ;同步用 Western blot法检测该两系小鼠肺脏 I-κBα磷酸化情况 (p- I-κBα)和 I-κBα的含量。结果 1经L PS处理 2 4小时后的 C3H/He N小鼠 ,其肺脏表达 β-防御素 - 4m RNA 而 C3H/He J小鼠未见表达 ;2与未给予L PS处理小鼠比较 ,经 L PS处理 4小时后 ,C3H/He N小鼠肺组织 p- I- κBα含量明显增高 ;L PS处理后 8小时 ,p- I-κBα以及 I- κBα含量均呈减少趋势 ;至第 2 4小时 ,p- I- κBα和 I- κBα含量均明显减少。而 C3H/He J小鼠肺组织 p- I-κBα及 I- κBα含量均未见相应变化。结论 克雷伯氏肺炎杆菌内毒素能诱导 C3H/He N小鼠肺 β-防御素 - 4的表达 ;其诱导表达作用与 Toll受体蛋白 - 4介导的
- 蔡绍晖杜军陈新年黄宁王伯瑶长谷川高明王莉马秀杨北市清幸长濑文彦Takaiki Hasegawa
- 关键词：Β-防御素NF-KB
