陈新年
- 作品数：16 被引量：50H指数：4
- 供职机构：四川大学华西医学中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金美国中华医学基金会项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- C端带Myc和多聚组氨酸双标记的重组人β-防御素-2在COS-7细胞的转染表达被引量：17
- 2003年
- 本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素 - 2 (h BD- 2 ) ,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线。将 h BD- 2的全长 c DNA片段插入编码双重报告基因 Myc和 6个多聚组氨酸 (His)的真核表达质粒 pc DNA3.1/Myc- His(+) ,构建出 C端带 Myc和 6× His的 rpc DNA3.1/Myc-His(+) /h BD- 2。用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入 COS- 7细胞 ,分别从 m RNA和蛋白质水平分析 h BD-2的表达情况并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。采用 RT- PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约 2 4 0 bp的片段 ,其大小与预测相符。采用 Western blot法 ,用抗 His抗体检测到细胞可溶性蛋白在约 10 Kd处有强反应条带显示 ,其大小与该重组质粒结构中由 p CMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量 (10 .1)相符。双层肉汤琼脂平板扩散法结果显示 :分别与正常细胞可溶性蛋白和培养上清比较 ,转染重组质粒的 COS- 7细胞的可溶性蛋白及培养上清在金黄色葡萄球菌的平板上均形成明显抑菌环。这些结果提示 :所建立的 h BD- 2哺乳类动物细胞表达系统能有效表达和分泌活性 h BD- 2。
- 蔡绍晖杜军陈新年黄宁长濑文彦长谷川高明王伯瑶
- 关键词：COS-7细胞RT-PCR法Β-防御素-2
- 大鼠不同发育阶段β-防御素-2基因在肺组织的表达研究
- 2000年
- 目的：探讨大鼠β-防御素-2基因在肺组织表达的发育调控。方法：根据Genbank大鼠β-防御素-2的cDNA序列，设计一对特异引物。采用RT-PCR技术在大鼠不同发育阶段的肺组织总RNA中，扩增其特异cDNA片段，并进行DNA序列测定。借助Genbank中BLASI、程序，将从该cDNA序列推导的氨基酸序列与人的hBD-2和大鼠的rBD-1做相似性分析。
- 周慧黄宁陈新年吴琦王伯瑶
- 关键词：肺组织Β-防御素-2HBD-2RT-PCR技术CDNA序列发育调控
- 大鼠β-防御素rBD-2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达
- 2000年
- 本文应用RT-PCR技术，根据Genbank公布的Noreway大鼠β-防御素-2cDNA序列设计引物，从Wistar大鼠皮肤组织总RNA中扩增出-cDNA片段，经核苷酸序列测定证实为全长β-防御素-2cDNA,，本文实验还显示大鼠β-防御素rBD-2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强，与人hBD-2的表达相似。
- 陈新年黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词：皮肤组织Β-防御素-2HBD-2分子克隆RT-PCR技术CDNA片段
- β-防御素-1基因在大鼠皮肤和肾脏固有表达
- 2000年
- 目的：检测大鼠β-防御素一1基因表达的组织分布。方法：从Genbank检索到的Norway大鼠β-防御素-1 cDNA序列，据此设计一对特异引物，采用RT-PCR技术在Wistar大鼠10种受检测组织的总RNA中，扩增其特异cDNA片段，然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定。结果：在10种大鼠组织中，
- 黄宁吴琦唐彬陈新年王伯瑶
- 关键词：Β-防御素肾脏扩增CDNA序列限制性内切酶
- 大肠杆菌对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的抑制
- 2000年
- 目的：探讨细菌对大鼠β-防御素-2(rBD-2)基因的表达调控。方法：将大肠杆菌E．coliML-35和绿脓杆菌27853大鼠气管内接种，于24小时后提取肺组织RNA，用RT-PCR法检验大鼠β-防御素-2基因的表达情况。结果：气管内接种大肠杆菌使大鼠肺组织β-防御素-2mRNA的表达受抑制。结论：大肠杆菌及其产物直接或通过炎症细胞因子间接抑制rBD-2mRNA的表达。
- 陈新年黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词：肺组织Β-防御素-2气管内大肠杆菌BDE.COLI
- 克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠β-防御素-4基因表达及其信号传递被引量：3
- 2001年
- 目的 探讨用克雷伯氏肺炎杆菌内毒素 (L PS)对小鼠 β-防御素表达的影响及其相关的信号传导通路。方法 分别给予 C3H /He J和 C3H /He N小鼠腹腔注射 L PS (4mg/kg) ,于不同时间点采取气管、肺、肾等组织 ,提取总 RNA。用 RT- PCR检测各组织β-防御素 - 3和 /或β-防御素 - 4m RNA的表达 ,并对扩增出的 c DNA片段进行测序 ;同步用 Western blot法检测该两系小鼠肺脏 I-κBα磷酸化情况 (p- I-κBα)和 I-κBα的含量。结果 1经L PS处理 2 4小时后的 C3H/He N小鼠 ,其肺脏表达 β-防御素 - 4m RNA 而 C3H/He J小鼠未见表达 ;2与未给予L PS处理小鼠比较 ,经 L PS处理 4小时后 ,C3H/He N小鼠肺组织 p- I- κBα含量明显增高 ;L PS处理后 8小时 ,p- I-κBα以及 I- κBα含量均呈减少趋势 ;至第 2 4小时 ,p- I- κBα和 I- κBα含量均明显减少。而 C3H/He J小鼠肺组织 p- I-κBα及 I- κBα含量均未见相应变化。结论 克雷伯氏肺炎杆菌内毒素能诱导 C3H/He N小鼠肺 β-防御素 - 4的表达 ;其诱导表达作用与 Toll受体蛋白 - 4介导的
- 蔡绍晖杜军陈新年黄宁王伯瑶长谷川高明王莉马秀杨北市清幸长濑文彦Takaiki Hasegawa
- 关键词：Β-防御素NF-KB
- 重组人beta防御素基因在COS-7细胞的转染表达被引量：1
- 2000年
- 为探索建立持续稳定表达hBD-2的哺乳类动物型工程细胞的可能性，本研究构建真核重组表达载体pCMv．tag2B／hBD-2以进行COS-7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的hBD-2全长cDNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒pCMA．tag2B构建出hBD-2的重组表达裁体pCMV．tag2B／hBD-2，并经DNA顺序证明hBD-2eDNA片段的插入方向和其全长cDNA的硷基组成顺序均准确无误。
- 蔡绍晖杜军陈新年黄宁王伯瑶
- 关键词：HBD-2转染COS-7细胞哺乳类动物全长CDNA
- β-防御素-1基因在大鼠皮肤和肾脏固有表达被引量：3
- 2001年
- 目的 :检测大鼠 β -防御素 - 1基因表达的组织分布。 方法 :从GenBank检索到的Norway大鼠 β -防御素 - 1cDNA序列 ,据此设计一对特异引物 ,采用RT -PCR技术在Wistar大鼠 10种受检测组织的总RNA中 ,扩增其特异cDNA片段 ,然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定。结果 :在 10种大鼠组织中 ,仅从皮肤和肾脏扩增出一条长度为 2 72bp的cDNA片段 ,在气管、子宫、骨髓、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、腮腺等均未检测出其mRNA。其RT -PCR产物经测序分析证明系大鼠 β -防御素 - 1cDNA。 结论 :本研究显示大鼠 β -防御素 - 1基因除在肾脏表达外 ,亦在皮肤组织固有表达 ,提示 β -防御素 - 1亦可能在大鼠皮肤天然抵抗微生物感染机制中发挥作用。
- 黄宁吴琦唐彬陈新年王伯瑶
- 关键词：基因表达皮肤
- β-防御素的cDNA克隆及其基因表达调控
- 该研究的目的是克隆大鼠β-防御素rBD-1、rBD-2以及人β-防御素hBD-2的cDNA,并 探讨大鼠β-防御素的基因表达调控.该实验结果显示大肠杆菌引起的肺组织炎症反应抑制 了β-防御素基因的表达,提示大肠杆菌或其产...
- 陈新年
- 关键词：Β-防御素CDNA克隆基因表达免疫大肠杆菌
- 文献传递
- 大肠杆菌感染对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的负相调节作用被引量：3
- 2002年
- 目的 :探讨细菌对大鼠 β -防御素 - 2 (rBD - 2 )基因的表达调控。 方法 :将大肠杆菌E .coliML -35p和绿脓杆菌ATCC 2 785 3大鼠气管内接种 ,于 2 4h后提取肺组织RNA ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法和Northernblot检测大鼠 β -防御素 - 2基因的表达变化。 结果 :气管内接种大肠杆菌 2 4h后使大鼠肺组织 β -防御素- 2mRNA的表达受到显著抑制 ,绿脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论 :大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBD - 2mRNA的表达。
- 陈新年黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词：肺感染基因表达肠杆菌科
