钱春艳
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MHC-Ⅰ^(pep)四聚体技术检测人类巨细胞病毒特异性细胞免疫功能的新进展
- 2005年
- 钱春艳季育华
- 关键词：四聚体细胞免疫功能病毒特异性
- 外周血白细胞中人巨细胞病毒pp65抗原的定位及意义被引量：1
- 2008年
- 目的明确人巨细胞病毒(HCMV)磷酸基质蛋白65(pp65)抗原在阳性细胞中的定位并初探其定位与病毒活动间的关系,为指导临床病毒抗原血症的监测提供依据。方法利用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料能与细胞双链DNA结合的特点,在激光共聚焦显微镜下对HCMV pp65单抗阳染细胞进行抗原定位;同时通过外周血白细胞与病毒共培养技术,检测分析其定位与病毒活动的关系。结果临床标本检测的HCM- Vpp65抗原阳染细胞的表现形式有3种,即细胞浆型、细胞核型和细胞浆核混合型,其中细胞核中的HCMV pp65抗原聚集于细胞核的内部,而非仅仅附着于核表面。进一步的白细胞与病毒共培养结果显示,只有野生型病毒株感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)与外周血白细胞共培养,才能检出HCMV pp65抗原阳性的白细胞,而且表现为仅初期(培养1 h内)可检出细胞浆阳染型,随着时间延长,约80%～90%的抗原阳染白细胞表现为细胞核型,偶见细胞浆核混合型。结论HCMV pp65抗原血症时阳染的外周血白细胞的表现形式有3种,即细胞核型、细胞浆型以及细胞浆核混合型,其中细胞核型属细胞核内部型,并非细胞核表面附着型。结合共培养结果认为,细胞核型阳染细胞的检出更能提示病毒的活动。
- 章莉张玥方风琴钱春艳季育华
- 关键词：人巨细胞病毒共聚焦显微镜白细胞外周血
- 不同核酸提取法对HCMV-DNA准确定量的影响被引量：2
- 2006年
- 目的评价不同核酸提取法对人巨细胞病毒核酸(HCMV-DNA)荧光定量PCR准确定量的影响。方法含HCMVAD169株病毒颗粒的病毒培养物,以不同浓度分别与10份健康人HCMV-DNA阴性血浆标本混合;另取15份临床移植患者HC-MVpp65抗原血症阳性血浆样本,上述2种标本分别用碱裂解吸附法、沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿抽提法提取病毒核酸模板,随后运用荧光定量聚合酶链反应对样本进行定量分析,并作评价。结果15例临床检测阳性血浆标本中,酚-氯仿法提取效率为最高(P<0.05),换算后其相对提取效率为100%,而沉淀煮沸裂解法为90%,碱裂解吸附法为65%;此外,沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿法的重复性均好于碱裂解吸附法,变异系数(CV)值分别为0.26、0.30和0.39。结论经典、传统的酚-氯仿抽提法仍不失为实验室首选的核酸提取方法。
- 张玥方风琴钱春艳季育华
- 关键词：核酸荧光定量PCR人巨细胞病毒
- 三株抗人巨细胞病毒pp65蛋白单克隆抗体的鉴定和应用被引量：3
- 2007年
- 目的 制备抗HCMVpp65蛋白的单克隆抗体（简称单抗），并对其进行相关研究。方法 以重组表达的HCMVpp65蛋白为抗原，运用杂交瘤技术制备单抗，对获得的单抗进行Ig亚型、特异性、效价和亲和常数的鉴定与测定，并以免疫荧光检测法与进口同类产品进行比较。结果 获得3株针对HCMVpp65蛋白的单抗，即B6、G12、2812；Ig亚型依次为IgG1κ型、IgG1κ型、IgMg型；亲和常数依次为3．6×10^7L／mol、3．8×10^7L／mol、3．1×10^7L／mol；免疫印迹试验结果表明，3株单抗都与HCMVpp65蛋白特异性的结合，除2B12外，B6、G12与EB病毒（EBV）、单纯疱疹病毒（HSV）Ⅰ、HSVⅡ均无交叉反应；与进口单抗平行检测140份临床标本，结果一致（r=1．00，P〉0．05）。结论 成功获得3株稳定分泌抗HCMVpp65蛋白的杂交瘤细胞株，所产生的抗体特异性和亲和力较理想，为HCMVpp65蛋白抗原血症检测国产化试剂盒的研制奠定了基础。
- 钱春艳王升年张玥陈盈盈施艳何妍陆皓季育华
- 关键词：巨细胞病毒PP65蛋白
- 流式细胞术检测分析人巨细胞病毒核酸疫苗诱导宿主细胞免疫效应
- 2007年
- 目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)pp65核酸疫苗对宿主细胞免疫功能的诱导效应。方法用自行构建的含HCMVpp65基因的重组质粒免疫小鼠,用流式细胞仪检测免疫小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化以及CD8+T细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4的情况,并以四甲基偶氮唑盐(MTT)增殖试验作补充验证。结果接种重组质粒组与仅接种空质粒或生理盐水对照组小鼠的免疫效应不同,表现为CD8+T细胞百分率增加(P<0.05),分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的CD8+T细胞百分率亦增高(P<0.05),两者的平均荧光强度值增高更为显著(P<0.05)。免疫小鼠的脾脏T细胞经HCMVpp65蛋白刺激后,实验组的刺激指数(SI)较对照组明显增高(P<0.05)。结论HCMVpp65核酸疫苗接种可诱导宿主的细胞免疫反应,倾向于表现为细胞毒性T细胞(Tc)1和Tc2的混合应答以及脾脏T细胞的增殖效应。
- 方风琴张玥钱春艳卫蓓文史桂英季育华
- 关键词：PP65人巨细胞病毒特异性细胞免疫流式细胞术
- 采用原位杂交法检测移植患者外周血白细胞中HCMV DNA
- 2008年
- 目的建立DNA原位杂交方法(ISH)检测移植患者外周血白细胞中的人巨细胞病毒(HCMV),并与HCMV-pp65抗原血症(免疫组织化学法,IHC)结果比较。方法选取本院肾移植患者标本60例,移植前后采集外周血标本250例,分离获得白细胞经涂片固定后分别采用ISH和IHC检测HCMV。结果ISH检测阳性率高于IHC,ISH检测的HCMV DNA阳性细胞见于外周血单个核细胞,IHC检测的HCMV抗原阳性细胞主要见于中性粒细胞,ISH检出的阳性细胞数明显高于IHC,且显然早于IHC。结论原位杂交检测HCMV DNA,敏感性高、特异性强,有利于早期、快速监测HCMV的激活。
- 张玥钱春艳叶廷军季育华
- 关键词：巨细胞病毒原位杂交免疫组织化学
- 人巨细胞病毒pp65抗体检测方法的建立被引量：1
- 2006年
- 目的建立检测人巨细胞病毒pp65IgG抗体（HCMV pp65 IgG）的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法通过棋盘滴定法选择包被抗原和酶标二抗的最适浓度：以商品抗HCMV pp65单抗为阳性模拟标本，建立检测抗HCMV pp65 IgG抗体，并对临床收集的各类血清标本进行检测和分析。结果检测间接ELISA HCMV pp65 IgG的最佳包被抗原浓度为10ng／孔，酶标二抗的工作浓度为1：3000。当阳性吸光度似）值为0．298时，87份不同组的血清标本（HCMV感染活动组、HCMV感染不活动组、HCMV未感染组）阳件检出率分别为51．6％（16／31）、12．1％（4／33）和0．0％（0／23）。3组两两间差异均存在显著性（P〈0．01）。结论本研究建立了检测HCMV pp65抗体的方法，应用该方法能从相应人群中检出该抗体，检测不存在假阳性，并发现该抗体与抗HCMV IgM的检出有关。
- 钱春艳吴晓玲张玥王升年季育华
- 关键词：人巨细胞病毒酶联免疫吸附试验
