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石华: 作品数：15 被引量：45H指数：4; 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部“春晖计划”重庆市教委科研基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：10: 2007年; 目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变。结果成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P<0.05)。病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域。结论沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用。; 成海恩张溢张翠莉潘巍巍石华易发平郭风劲宋方洲; 关键词：宫颈肿瘤 RNA干扰 HPV16 E6基因

人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立被引量：2: 2007年; 目的:构建人MCHR2真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染细胞系.方法:采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和PCR鉴定后,脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR,WesternBlot及免疫荧光法检测MCHR2的表达.结果:成功构建了pcDNA3.1-MCHR2真核表达载体并已稳定转入HEK293细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因.结论:稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础.; 杨俊霞石华魏丽丽袁成福陈济易发平马永平宋方洲; 关键词：真核表达载体转染基因表达

人白介素24基因治疗宫颈癌CaSki细胞株的实验研究: 子宫颈癌(cervical cancer，CC)是危害广大妇女健康最常见的恶性肿瘤之一，我国每年新发病例有13.5万，近年来发现，年轻妇女中宫颈癌的发病率呈明显上升的趋势，发病以每年2％～3％的速度增长。宫颈癌越来越引起...; 石华; 关键词：宫颈肿瘤基因治疗分子生物学动物模型

人白介素24基因诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的实验研究被引量：3: 2007年; 目的:研究人白介素24(hIL-24)在体外诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡及其作用机制.方法:①以脂质体包裹重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24转染Ca Ski细胞;②利用RT-PCR技术检测处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平变化;③Western Blot分析处理后Ca Ski细胞中抑癌蛋白P53水平的变化;④流式细胞仪分析处理后的Ca Ski细胞凋亡情况.结果:处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平下降,抑癌蛋白P53水平增加,细胞凋亡率升高.结论:真核表达载体介导的hIL-24基因体外转染宫颈癌Ca Ski细胞后,能抑制Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的表达,使抑癌蛋白P53恢复活性,促使宫颈癌Ca Ski细胞凋亡.; 石华成海恩张溢郭风劲易发平马永平宋方洲; 关键词：CA E6基因蛋白质P53 细胞凋亡

黑色素浓集激素:一种与体重调节有关的下丘脑肽被引量：1: 2005年; 黑色素浓集激素(MCH)是一种含有19个氨基酸的神经肽,主要存在于下丘脑侧面。目前的研究证实,它是机体能量内稳系统中一种关键的调节因子,可能与肥胖综合征的发病有关,阻断其信号的药物将是治疗肥胖的有效药物。; 石华宋方洲; 关键词：肥胖

细胞周期素E的干扰RNA对HeLa细胞增殖的抑制作用被引量：7: 2007年; 目的利用RNAi技术下调宫颈癌HeLa细胞中cyclin E mRNA水平，研究对HeLa细胞增殖及周期的影响。方法构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体，脂质体转染HeLa细胞下调细胞中cyclin E mRNA含量。RT-PCR检测抑制效果；MTr检测细胞生长情况；流式细胞仪分析HeLa细胞周期变化。结果成功构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体，可以特异下调cyclin E mRNA含量，并抑制细胞恶性增殖。细胞周期分析显示干扰使细胞停留在G0-G。期，S期细胞明显减少。结论RNAi能特异地下调HeLa细胞中cyclin E mRNA含量，抑制宫颈癌细胞恶性增殖，提示cyclin E可能成为宫颈癌基因治疗中的一个新的靶点。; 陈济潘巍巍成海恩魏丽丽袁成福石华易发平马永平宋方洲; 关键词：RNA干扰细胞周期素E HELA细胞细胞周期

人黑色素浓集激素1型受体真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立: 2007年; 目的构建人黑色素浓集激素1型受体(MCHR1)真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Westernblot及免疫荧光法检测MCHR1的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR1真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR1功能奠定了良好的实验基础。; 袁成福杨俊霞魏丽丽石华陈济易发平马永平宋方洲; 关键词：真核表达载体 CHO细胞转染

表达HPV-16 E6基因siRNA真核载体的构建及体外转染效率鉴定被引量：1: 2006年; 目的:采用RNA干扰技术选择性的沉默宫颈癌Ca Ski细胞株中HPV-16 E6基因的表达。为观察HPV-16 E6基因的小干扰片段能否在Ca Ski细胞特异性的抑制E6基因的表达,构建能在哺乳动物细胞中表达E6小干扰RNA的真核表达质粒,并观察其转染效率。方法:根据HPV-16 E6基因序列,设计特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至Ca Ski细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率。结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功的构建二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功的转染到Ca Ski细胞株中,转染效率达到50%以上。结论:siRNA真核表达载体的构建及体外转染的成功为下一步研究奠定了良好的基础。; 成海恩张溢张翠莉石华潘巍巍易发平马永平宋方洲; 关键词：HPV16 E6基因 RNA干扰

HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡被引量：5: 2007年; 目的:观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染,联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的效应。方法:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染人宫颈癌Ca Ski细胞,随后利用RT-PCR技术检测细胞中HPV-16 E6癌基因的mRNA水平变化;Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化;流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果:经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPV E6癌基因的mRNA水平均下降,其中联合转染组显著下降(P<0.05);抑癌蛋白p53水平均增高,其中联合转染组显著增高,细胞凋亡率均升高,其中联合转染组显著升高(P<0.05)。结论:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌Ca Ski细胞后,均能抑制Ca Ski细胞中HPV-16 E6癌基因的表达,使抑癌蛋白p53恢复活性,诱导宫颈癌Ca Ski细胞凋亡;两者联合则具有协同效应,能显著提高肿瘤细胞凋亡率。; 石华杨俊霞袁成福易发平魏丽丽刘革力马永平宋方洲; 关键词：凋亡 E6 SIRNA CA

人白介素24基因克隆表达、纯化及活性检测被引量：1: 2007年; 目的克隆人IL-24基因,构建原核表达载体,表达纯化GST-IL-24融合蛋白,检测其活性。方法用密执毒素诱导HeLa细胞表达IL-24 mRNA,通过RT-PCR获取IL-24cDNA,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,IPTG诱导表达,经GSTrap TMF Fcolumn亲合纯化,SDS-PAGE和Westernblot检测融合蛋白的表达,MTT法检测GST-IL-24对宫颈癌CaSKi细胞的抑制作用。结果克隆得到人IL-24的cDNA,序列与GenBank公布序列完全一致,SDS-PAGE电泳可见50kD大小的融合蛋白表达。GST-IL-24以剂量依赖的方式抑制宫颈癌CasKi细胞的生长。结论成功构建人IL-24基因原核表达载体,表达纯化得到GST-IL-24,该融合蛋白对宫颈癌CasKi细胞具有抑制作用。; 魏丽丽李成华杨俊霞石华丁嵩涛马永平易发平宋方洲; 关键词：原核表达纯化 MTT

石华

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