王菲菲
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：河南农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家烟草专卖局基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 烟草打顶对腐胺N-甲基转移酶基因表达的影响被引量：6
- 2009年
- 水培65d的烟株进行打顶后,测定打顶和不打顶烟株上部叶中烟碱含量。分别提取根中总RNA,以腐胺N-甲基转移酶基因(PMT)特异引物、肌动蛋白基因(actin)为内参作半定量RT-PCR分析;同时将提取的总RNA转膜,用地高辛标记PMTRT-PCR产物作探针,进行Northern杂交分析的结果表明,打顶后的上部烟叶中烟碱含量和PMT基因表达量显著增加。
- 戚元成马雷王菲菲刘卫群
- 关键词：烟草打顶半定量RT-PCRNORTHERN杂交
- 盐胁迫下过量表达腺苷甲硫氨酸合成酶基因的转基因烟草的生长被引量：3
- 2010年
- 以转腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SsSAMS2)烟草纯合子ST8-9为实验材料,研究盐胁迫下过量表达SsSAMS2对转基因烟草生长影响的结果表明,200mmol·L-1NaCl处理后的转基因烟草的光合速率和生物量都比野生型烟草高,积累的自由多聚胺比较多,同时精氨酸脱羧酶的转录本也更丰富。显示转基因烟草的耐盐性比野生型烟草高,多聚胺在烟株缓解盐胁中可能是起了重要作用。
- 戚元成王菲菲
- 关键词：盐胁迫转基因烟草
- 过量表达腺苷甲硫氨酸合成酶基因能提高转基因烟草中多聚胺的生物合成被引量：4
- 2009年
- 以土壤农杆菌介导的转化方法将盐地碱蓬的腺苷甲硫氨酸合成酶cDNA(SsSAMS2)转化到烟草K326中。PCR分析的结果表明,SsSAMS2整合进K326的基因组内。共筛选到8个转基因纯合品系,分析其中3个品系(ST8-9、ST14-2、ST3-5)基因表达和多聚胺含量的结果表明,SsSAMS2可在转基因烟草中表达,转基因烟草中的多聚胺含量明显高于野生型烟草。这些结果表明,腺苷甲硫氨酸合成酶基因已在转基因烟草中过量表达并导致多聚胺含量提高。
- 戚元成马雷王菲菲刘卫群
- 关键词：转基因烟草
- 打顶烟草根尖组织抑制性消减cDNA文库的构建及其序列分析被引量：2
- 2011年
- 【目的】构建烟草打顶后根尖组织的消减文库,寻找调控烟碱生物合成的相关候选基因。【方法】以打顶株为测验子(tester)、以非打顶株为驱赶子(driver),利用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和反向Northern杂交技术构建和筛选烟草打顶前后根尖组织消减文库,并对差异表达克隆进行生物信息学分析。【结果】构建了具有高消减效率的cDNA文库。PCR验证消减文库阳性克隆的插入片段为200—1 000 bp。经反向Northern杂交,从850个克隆中筛选到560个杂交信号差异明显的克隆,测序后得到273条有效序列。对273个已知功能基因的ESTs进行分类,生物碱合成类占4%、植物激素代谢类占3%、信号转导和转录因子类占18%、胁迫和防御类占32%、蛋白质代谢占9%、碳代谢占6%、其它代谢占15%、功能未知类占13%。RT-PCR结果显示,NTAT84和NTAT71序列在烟株打顶后转录活性均升高。【结论】应用SSH技术构建了烟草打顶前后根尖组织消减cDNA文库。
- 戚元成马雷王菲菲刘卫群
- 关键词：烟草烟碱
- 烟草中NAC类转录因子基因的克隆及分析被引量：4
- 2011年
- 【目的】克隆烟草NAC类转录因子基因,分析其序列特征和表达特性,为深入研究NAC类转录因子对烟草打顶后根系的生长发育与烟碱生物合成之间的关系奠定基础。【方法】采用电子克隆结合RT-PCR获得烟草NtNAC-R1全长cDNA序列,并进行生物信息学分析,用pRESTB原核表达系统进行该基因的原核表达。分别采用RT-PCR和Northern杂交对烟草打顶前、后根尖组织中NtNAC-R1的表达模式进行分析。【结果】烟草NtNAC-R1开放性阅读框架长度为936 bp,编码311个氨基酸,具有NAC转录因子家族典型的保守结构域。系统进化分析表明,该基因与矮牵牛NAC亲缘关系较近,属茄科植物特异NAC家族,在原核细胞中具有表达活性。该基因在烟草根中的表达水平最高,在烟草打顶后2—4 h表达水平下降,随后上升。【结论】从烟草根尖组织中克隆了一个NAC转录因子基因NtNAC-R1,该基因在根系中具有高水平表达,在烟草打顶后2—4 h表达水平显著降低,具有响应烟草打顶所导致的信号传递作用。
- 戚元成王菲菲刘卫群高美娟
- 关键词：烟草RT-PCRNORTHERN杂交
