公共文化服务平台

共 9 条记录，以下是 1-9

全选清除导出

排序方式：

MK2不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究被引量：2: 2008年; 目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2,MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况。方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况。结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布。在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变。结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响。; 魏洁龚小卫明小燕王旭王达安邓鹏姜勇; 关键词：蛋白激酶类突变细胞内定位 P38丝裂原活化蛋白激酶

沉默Toll样受体4基因表达的RNAi慢病毒载体的构建被引量：3: 2011年; 背景:Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)是介导内毒素/脂多糖应答的主要受体,在由内毒素诱导的炎性反应的信号通路中发挥着重要作用。目的:构建人TLR4基因的RNA干扰慢病毒载体,并观察其对人脐静脉内皮细胞TLR4在蛋白水平的沉默效应。方法:利用Invitrogen在线软件设计人TLR4基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核苷酸后克隆到线性载体pENTRTM/H1/TO的黏性末端,并进行DNA测序。得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组反应,从而获得干扰TLR4基因真核表达的慢病毒载体。在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助复合体和TLR4基因的真核表达慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人脐静脉内皮细胞,检验其干扰TLR4基因表达的有效性。结果与结论:实验成功构建TLR4基因真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8.7×106U/mL。免疫印迹杂交结果表明,所获得的慢病毒感染人脐静脉内皮细胞TLR4基因在蛋白水平的表达显著降低。实验成功构建了人TLR4基因慢病毒RNA干扰表达载体,并验证了其在人脐静脉内皮细胞上的有效性。; 阮静王旭李煜生刘爱华姜勇; 关键词：TOLL样受体4 RNA干扰慢病毒炎症

pNTAP-PRAK真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达: 2010年; 目的:构建pNTAP-PRAK真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法:将人的PRAK亚克隆至串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-PRAK,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用PolyFect脂质体介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAP tag-PRAK融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAP tag-PRAK的表达及细胞内定位情况。结果:重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-PRAK主要分布在核内。结论:成功构建pNTAP-PRAK真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对PRAK定位产生明显影响。; 王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇; 关键词：基因表达

pNTAP-MK2真核表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立: 2010年; 目的构建pNTAP-MK2真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法将MK2亚克隆至串联亲和纯化载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-MK2,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用脂质体PolyFect介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAPtag-MK2融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAPtag-MK2的表达及细胞内定位情况。结果重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAPtag-MK2主要分布在核内。结论成功构建pNTAP-MK2真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对MK2定位产生明显影响。; 王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇; 关键词：真核表达载体分子克隆

Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达被引量：1: 2010年; 目的构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况。方法采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位。结果重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆。结论成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础。; 王丹梅柱中刘爱华明小燕王达安王旭姜勇; 关键词：红色荧光蛋白基因表达

p53基因敲除对细胞迁移的影响被引量：1: 2007年; 目的研究p53基因敲除对细胞迁移的影响。方法观察p53+/+和p53-/-细胞中血清诱导的板状伪足形成情况,以及利用Transwell细胞迁移系统观察p53基因敲除对血清诱导的细胞迁移的影响。结果在血清诱导下,p53+/+细胞能形成板状伪足和进行迁移,而p53-/-细胞中板状伪足的形成和细胞迁移都被阻断。结论p53在血清诱导的细胞迁移中具有重要作用。; 龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚王旭邓鹏姜勇; 关键词：P53 基因敲除细胞迁移

肌动蛋白和Tau蛋白荧光蛋白融合载体的构建、表达及其细胞内定位: 2009年; 背景:肌动蛋白和Tau蛋白分别是微丝和微管的重要组成成分,肌动蛋白和Tau蛋白的分布能否作为微丝和微管的观察指标。目的:构建肌动蛋白和Tau蛋白的红色和绿色荧光蛋白融合表达载体并转染真核细胞,观察其在细胞内的表达和定位情况。设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2008-03/08在南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室共同完成。材料:克隆在pcDNA3载体上的肌动蛋白和Tau蛋白真核表达载体pcDNA3-actin和pcDNA3-Tau,以及红色荧光蛋白表达载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2、大肠杆菌株DH5α和小鼠NIH3T3细胞系由南方医科大学病理生理学教研室保存。方法:将克隆在pcDNA3上的肌动蛋白和Tau蛋白亚克隆到红色荧光蛋白载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,然后转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察重组载体的表达和细胞内定位。主要观察指标:NIH3T3细胞转染24h后,利用Leica荧光显微镜观察上述重组载体在细胞中的表达和定位情况。结果:重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在NIH3T3细胞中可获得高量表达。融合蛋白发出的红色和绿色荧光均表明,肌动蛋白在细胞质中呈短丝状弥散分布,Tau蛋白以细胞核为中心呈放射状排列。结论:成功构建了肌动蛋白和Tau蛋白的不同荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中得到有效表达,这为研究细胞骨架在信号分子移位中的作用提供了一个重要的工具。; 明小燕龚小卫王丹王达安王旭姜勇; 关键词：肌动蛋白 TAU蛋白荧光蛋白细胞内定位

RNAi技术应用于妇科肿瘤治疗的研究进展被引量：5: 2009年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种在动植物中广泛存在的通过双链RNA(dsRNA)分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因沉默的过程,即转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS),由与被抑制基因同源的dsRNA启动。近年来,RNAi作为一种研究工具在生命科学领域得到了广泛的应用,其在医学领域中的应用尤为突出,不仅可应用于基础研究,还有望成为攻克肿瘤、病毒性疾病及遗传性疾病的新手段。现就RNAi应用于妇科肿瘤治疗的研究进展作一概述。; 祝颖王旭姜勇; 关键词：RNA干扰宫颈癌卵巢癌子宫内膜癌

中国中原地区汉族人群染色体4q25上rs17042171与心房颤动的关联性: 心房颤动（房颤）是临床上最常见的心律失常之一，住院率可达10％-40％。该病可使卒中风险增加5倍、心力衰竭风险增加3倍以及死亡风险增加2倍，为个人和社会带来了巨大的经济负担。尽管目前对房颤发生的病理生理机制进行了诸多研究...; 王旭; 关键词：心房颤动染色体单核苷酸多态性病理机制

全选清除导出

共1页<1>

王旭

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

王旭

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈