王光清 作品数:22 被引量:199 H指数:9 供职机构: 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 国家攀登计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 化学工程 更多>>
植物转基因的失活与沉默 被引量:40 1995年 植物外源基因转化研究揭示有相当比例的植物转基因表现失活与沉默。这一现象涉及转基因重复拷贝之间的异源配对,基因顺序的甲基化,转录后的衰退调控以及插入位点染色质高级结构的改变,并与外源基因的随机整合有关。克服转基因失活的方法包括单拷贝转基因子代筛选,构建细胞核基质支架附着区栽体以及采用具有特殊功能的启动子与增强子。转基因失活问题的发生提示人们.外源基因的转化与整合存在一些特有的遗传机制。 杨金水 王光清关键词:基因工程 植物基因工程 植物 转基因 大麦遗传转化新技术的研究 1997年 利用大麦的愈伤组织小细胞团为受体,研究了使用PEG+电击法进行遗传转化的技术途径。作者认为:转化参数为PEG+1.5KV/cm电击是合适的,同时研究还表明转化前的一系列预处理对提高遗传转化效率是+分有效的。 马伯军 袁妙葆 王光清 杨金水 葛扣麟关键词:大麦 转基因 Class I patatin基因5′侧翼区驱动的GUS基因在马铃薯块茎中专一性表达 被引量:5 2001年 将1.4kb Class I patatin基因的5′侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体pPATIs(含patatin部分信号顺序)和pPATI(不含patatin部分信号顺序)。pPATI通过基因枪介导在块茎切片中获得了瞬间表达。以上建构物通过农杆菌介导转入了马铃薯品种Desiree。X-Gluc染色(PATIs不能染色)及PCR结果证实已获得转基因植株。利用离体块茎诱导系统,GUS的表达进一步用荧光进行定量检测,结果显示,PATI-GUS的转基因植株中GUS比活性均以块茎明显高于茎段,达10-20倍。蔗糖浓度的升高,PATI-GUS植株中的GUS比活性无明显变化,与前人报道有不同。此外,光照促进PATI-GUS的表达。 宋东光 周健 黄大庆 马欢 司徒继锋 王光清 汪训明关键词:马铃薯 块茎 CLASS GUS基因 不同长度马铃薯GBSS基因启动子的块茎专一性表达的初报 被引量:22 1998年 将0.4,0.8,1.6,2.9kbGBSS基因的5'侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体.0.8kbGBSS-GUS通过基因枪转化法在块茎切片中获得了瞬间表达.已将上述构建体通过农杆菌转化法导入了马铃薯.X-Gluc染色及PCR结果均证实已获得转基因再生植株.在离体诱导块茎中,2.9,1.6,0.4kbGBSS启动子驱动的GUS活性均明显高于茎段,高出1~15倍;1.6,2.9kbGBSS启动子驱动的GUS活性则大大高于0.8,0.4kbGBSS启动子驱动的GUS活性;其中2.9kb的GBSS启动子显示最强烈的块茎表达专一性. 宋东光 黄大庆 王光清 汪训明关键词:马铃薯 GBSS GUS 启动子 血管内皮细胞中表达的TNFα诱导基因的分离 1999年 使用一种快速而高效的分离差别表达基因的新方法——抑制消减杂交法,分离了在TNFα作用后血管内皮细胞中差异表达的cDNA,并经反向Northern 杂交试验证实.初步确认TNFα作用后诱导了血管内皮细胞内一些分子的表达。 周炜 喻红 肖靖 王光清 林丽珠 赵寿元 李昌本关键词:血管内皮细胞 TNFΑ 抑制消减杂交 诱导基因 马铃薯GBSS基因5′侧翼区调控作用的研究 被引量:19 1998年 将0.4、0.8、1.6、2.9kbGBSS基因的5′侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体。0.8kbGBSSGUS通过基因枪介导在块茎切片中获得了瞬间表达。以上建构物通过农杆菌介导转入了马铃薯(SolanumtuberosumL.cv.Desiree)。XGluc染色及PCR结果证实已获得转基因植株。利用离体块茎诱导系统,GUS表达用荧光进行定量检测,结果显示,2.9、1.6、0.4kbGBSSGUS的表达均以块茎明显高于茎段,达2~10倍。0.8、1.6、2.9kbGBSSGUS表达高于0.4kbGBSSGUS。蔗糖浓度的升高可诱导GBSSGUS的表达,而光照抑制了GBSSGUS的表达。 宋东光 孙国枫 单海燕 彭翔寅 王光清 汪训明 谈家桢关键词:马铃薯 基因调控 抑制消减杂交法分离血管内皮细胞中表达的TNFα相关基因 被引量:2 2000年 介绍使用快速而高效地分离差别表达基因的新方法———抑制消减杂交法 ,克隆了在TNFα作用后血管内皮细胞中的差异表达cDNA。经反向Northern杂交试验证实。为进一步研究血管内皮细胞中表达的TNFα作用相关基因打下基础。 周炜 王光清 肖靖 喻红 林丽珠 赵强 赵寿元 李昌本关键词:抑制消减杂交 TNFΑ 血管内皮细胞 NORTHERN杂交 差异显示法分离赤霉素调控的水稻(Oryza sativa)cDNA(英文) 被引量:4 1997年 赤霉素(gibberellins)是植物生长发育过程中一类重要的调节激素。本文运用反转录和聚合酶链式反应建立了一套旨在分离差异表达cDNA的差异显示方法。以籼稻珍汕97 B为材料,将赤霉素GA_3处理后的苗期水稻与对照的cDNA片段进行比较,鉴定了15个差异cDNA,并将它们从测序胶中回收和再次扩增获得差异表达的cDNA;用其中一个差异cDNA片段DDF1为探针的Southern和northern杂交证实,DDF1所对应的基因是一个单拷贝基因,可被高浓度的GA_3诱导并获得高水平表达。 王光清 杨金水 程宁辉 高燕萍 钱旻 葛扣麟 谈家桢 严成其 恩和巴雅尔关键词:水稻 赤霉素 CDNA 血管内皮抑素的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 2002年 血管内皮抑素不仅能特异性地抑制血管内皮生长 ,而且对血管形成和肿瘤生长也具有强烈的抑制作用 .利用PCR法从人胎肝cDNA文库中克隆了人血管内皮抑素的编码序列 ,构建了重组质粒pRSendo ,并在E .coli中表达 .SDS PAGE表明其表达产物为包涵体 .此外 。 林丽珠 赵强 周炜 王光清 赵寿元 李昌本关键词:血管内皮抑素 基因克隆 谷类作物基因组研究进展 1996年 王光清 杨金水 徐明良关键词:基因组研究 谷类作物 染色体 甲基化 拷贝数