汪孙杰 作品数:5 被引量:6 H指数:1 供职机构: 江苏科技大学生物与化学工程学院 更多>> 发文基金: 吉林省科技发展计划基金 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
坏死梭杆菌斑马鱼模型建立与LD_(50)的测定 被引量:1 2012年 建立斑马鱼人工感染坏死梭杆菌动物模型。牛源坏死梭杆菌FN(AB)株以3×1010cfu/mL、3×109cfu/mL、3×108cfu/mL、3×107cfu/mL不同菌量,腹腔接种斑马鱼,定时观察斑马鱼的发病和死亡情况,建立动物感染模型。FN(AB)对斑马鱼的半数致死量(LD50)为1.06×106cfu/尾;感染发病鱼呈现出侧游、腹水、注射部位出血红肿等症状,肝脏、肾脏、肠道出现明显的病理学变化。斑马鱼可作为坏死梭杆菌致病性研究的动物模型。 曹阅 陈立志 刘晓颖 冯二凯 汪孙杰 徐晶 冯卓关键词:坏死梭杆菌 斑马鱼 动物模型 半数致死量 致病性坏死梭杆菌白细胞毒素部分融合基因真核表达及免疫活性研究 以国内分离的牛源致病性坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum, F.n.)F4菌株基因组为模板,通过PCR和克隆技术构建高效真核表达载体,体外对重组的融合蛋白进行免疫特性和细胞毒性研究。研究内容如... 汪孙杰关键词:基因表达 免疫活性 坏死梭杆菌白细胞毒素bsbse-gas-sh真核表达载体的构建 被引量:1 2012年 根据GeneBank中提供的白细胞毒素基因序列,设计引物并扩增bsbse和gas-sh片段。通过T4 DNA Ligase连接形成融合片段bsbse-gas-sh,亚克隆pMD○R18-T质粒和测序。成功构建表达bsbse-gas-sh毕赤酵母表达载体pPIC9K-bsbse-gas-sh。为下一步bsbse-gas-sh的真核表达及免疫机理研究奠定了基础。 汪孙杰 陈立志 刘晓颖 冯二凯 曹阅 徐晶关键词:基因克隆 真核表达载体 影响坏死梭杆菌分泌白细胞毒素因素的研究 被引量:2 2012年 利用已分离坏死梭杆菌菌株,建立坏死梭杆菌白细胞毒素活性体外检测方法,并评价培养条件对坏死梭杆菌天然白细胞毒素活性的影响。结果表明,预还原、厌氧无菌心脑浸液肉汤培养基(pH7.3左右)、培养时间10h~12h(对数生长期后期),此工艺参数下获取的细菌培养物上清液的白细胞毒性最大。获得的坏死梭杆菌天然白细胞毒素经Western blot证实,能被抗白细胞毒素重组BSBSE蛋白的兔血清识别,表明提取的白细胞毒素具有反应原性。 冯二凯 陈立志 刘晓颖 汪孙杰 曹阅 徐晶关键词:坏死梭杆菌 分泌 坏死梭杆菌外膜蛋白基因的克隆与表达 被引量:1 2013年 依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量为93ku,为包涵体表达,具有反应原性。本试验结果为坏死梭杆菌OMP免疫机制的研究提供了基础数据。 徐晶 陈立志 刘晓颖 冯二凯 汪孙杰 曹阅关键词:坏死梭杆菌 OMP 免疫活性