梅淼
- 作品数：18 被引量：29H指数：3
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划四川省青年科技基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪巨细胞病毒SC株DNA聚合酶基因的克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2011年
- 为克隆出猪巨细胞病毒SC株DNA聚合酶(DPOL)基因并对其进行分析,根据GenBank中的DPOL基因序列(AF268040)设计了1对引物,用PCR法扩增出猪巨细胞病毒SC株DPOL基因,将其克隆到T载体,测序并进行生物信息学分析。测序结果表明,猪巨细胞病毒DPOL基因全长3 024bp,为一个完整ORF,共编码1 008个氨基酸;与参考毒株的核苷酸同源性为98%,系统进化树表明猪巨细胞病毒与人疱疹病毒6型和7型关系最近;运用生物信息学软件推导出该蛋白的基本性质,并预测出高级结构。成功地进行了猪巨细胞病毒SC株DPOL基因的克隆和生物信息学分析,为今后此基因生物学功能和猪巨细胞病毒复制机理的研究以及病毒系统分类工作提供了参考。
- 王燕群徐志文郭万柱朱玲梅淼
- 关键词：DNA聚合酶基因克隆生物信息学分析
- 一种克隆载体重组质粒pMDl8～TSimpIe-PCV2的构建
- 2013年
- 为了研究猪圆环病毒2型（PCV2）的全基因组变异特性，试验设计了1对特异性引物，并从疑似断乳仔猪多系统衰竭综合征（PMws）的病料中经PCR直接扩增出PCV2全基因组，
- 王赞梅淼杨雪
- 关键词：重组质粒克隆载体多系统衰竭综合征猪圆环病毒2型特异性引物
- 猪圆环病毒2型的分离鉴定及全基因组克隆和序列分析被引量：2
- 2012年
- 通过PCR方法对采自四川省某规模化猪场一批疑似断奶仔猪多系统衰弱综合征病例的肺脏、淋巴结进行PCV-2的抗原检测,并将检测结果为阳性的对应组织研磨、过滤除菌后接种无PCV-1污染的PK-15细胞,盲传15代后,IFA方法检测出有明显的特异性荧光,将该毒株命名为PCV-2-SC株,并对PCV-2-SC病毒基因组全长进行扩增及克隆、测序与比对分析。测序结果显示该病毒基因组全长1 767bp,分离株与国内外参考毒株核苷酸序列相似性在95.2%～99.5%之间,进化树分析表明,PCV-2分离毒株在进化上存在地域相关性。PCV-2四川株的分离鉴定为其诊断试剂的研制及检测方法的建立奠定了基础。
- 王赟梅淼杨雪朱玲
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 七种犬饲料对SD大鼠的饲喂效果比较
- 2010年
- 梅淼钟瑶黄小波
- 关键词：犬饲料SD大鼠实验动物模型动物营养学饲养数量试验动物
- 猪巨细胞病毒四川株gB基因的克隆表达及抗原性分析
- 2012年
- 为研究猪巨细胞病毒(PCMV)SC株gB蛋白的免疫学活性,采用PCR扩增PCMV SC株gB全基因和不含跨膜区及信号肽的gB基因片段,将后者克隆至pET-30a(+)载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导以获得高效表达。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,分别用琼脂扩散试验和Western-blot对多克隆抗体和复性的gB蛋白进行检测。结果显示,扩增的PCMV gB基因全长2 580bp,编码860个氨基酸。与国内外参考株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为97.8%～99.5%和96.6%～99.0%;与其他9株β疱疹病毒核苷酸和氨基酸序列相似性分别为33.3%～41.4%和13.3%～49.4%;系统进化分析显示,PCMV与人疱疹病毒6型和7型属于一个分支。gB肽链N端1～23位氨基酸为信号肽,729～751位氨基酸间含有跨膜区。构建的表达载体pET30a-gB-B在Rosetta(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导后以包涵体形式表达出大小约80ku的蛋白。所制备的血清琼扩抗体效价为1∶16,Western-blot显示重组gB蛋白可与PCMV阳性猪血清反应。结果表明,PCMV gB基因较为保守,与国内外不同地区的PCMV毒株具有较高的相似性,所表达的重组蛋白具有很好的抗原性。
- 朱玲史小红王潇娣梅淼周远成刘孟良吴云飞徐志文郭万柱
- 关键词：GB基因原核表达抗原性
- PRRSV感染致断奶仔猪肺脏和外周免疫器官的病理损伤被引量：4
- 2011年
- 用PRRSV ATCC VR-2332株感染8头28日龄仔猪,同时设立2头健康对照猪。PRRSV单独感染猪分别于感染后7,17,25 d各剖杀2,3,3头,对照组于17,25d各剖杀1头。剖杀后采集脾脏、肺脏和全身主要淋巴结(颌下淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等免疫器官,用甲醛溶液固定,组织石蜡切片以观察显微病理变化。试验组猪的抗体和抗原检测结果均表明,感染后7 d血清PRRSV抗体和免疫器官组织PRRSV抗原部分呈阳性;剖检和石蜡切片结果均显示,试验猪于攻毒后,随着病程的发展,发生了不同程度的间质性肺炎及相应的显微病变,PRRSV单独感染能引起免疫器官以淋巴细胞及巨噬细胞变性坏死为特征的急性炎症变化,造成免疫损伤,进而引起免疫抑制。
- 熊丁杰徐志文梅淼余庆彭西刘彬尹雪琴刘万铃
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒仔猪免疫器官病理损伤
- ORF9基因缺失突变PCV2的构建与部分生物学特性被引量：2
- 2012年
- 设计1对针对猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组的特异性引物,从疑似断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病料中经PCR直接扩增出PCV2全基因组,再与载体pMD18-T Simple连接后构建重组质粒pMD18-T Simple-PCV2(命名为P-S-PCV2)。用ORF9特异的限制性内切酶Bpu10Ⅰ对P-S-PCV2进行酶切、补平连接反应,构建了ORF9基因缺失突变的重组质粒(命名为P-S-PCV2-J)。用SacⅡ对基因缺失突变的重组质粒进行酶切,获得的线性化基因突变PCV2基因组在体外进行自身环化,形成了相应缺失基因DNA(命名为PCV2-J)。用PCV2-J缺失突变株进行细胞转染、动物致病性和免疫原性、T淋巴细胞亚群的动态变化等部分生物学特性的研究。结果显示:PCV2-J转染IBRS-2细胞后,电镜观察可见病毒颗粒,PCR-RFLP检测有突变株生长;PCV2-J接种仔猪后无临床典型大体病变,PCR-RFLP检测淋巴结中有PCV2-J突变病毒的感染;PCV2-J免疫仔猪后的抗体水平在第2周开始上升,与对照组相比差异显著,CD3+下降,与对照组无差异,CD4+下降,第1周与对照组差异显著,CD8+与对照组差异不显著。结果表明,ORF9基因缺失突变的PCV2仍具有复制感染能力,但免疫原性减弱。
- 曾秀梅淼郭万柱朱玲徐志文王印余庆
- 关键词：猪圆环病毒2型生物学特性
- 猪细环病毒实验室诊断方法的研究进展
- 2012年
- 1997年12月，日本学者Nishizawa等利用代表性差异分析（representationaldifferenceanalysis）法，首次从一位名为TorqueTero的输血后非甲一非庚型肝炎病人的血清中克隆获得了一种新的不明病原DNA（N22），
- 梅淼赵玲朱玲李淞
- 关键词：病毒实验室日本学者病原肝炎
- PCV2 ORF2 B细胞表位与PPV VP2真核表达质粒的构建及其免疫原性被引量：3
- 2012年
- 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2B细胞表位与猪细小病毒(PPV)VP2重组真核表达质粒的免疫原性,将PCV2ORF2的B细胞表位基因(141～257bp)重组到PPV SC-1株VP2基因的N端,构建了真核表达质粒pCI-VP2.ORF2B。用脂质体转染法将重组质粒pCI-VP2.ORF2B转染至Vero细胞中,利用间接免疫荧光法检测其在体外的表达情况。将重组质粒免疫小鼠,并设猪细小病毒灭活疫苗、猪圆环病毒亚单位疫苗和空载体对照组,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法分别对免疫小鼠脾淋巴细胞的转化功能,外周血CD4+和CD8+淋巴细胞比例,PCV2和PPV IgG抗体效价进行了检测。结果表明,转染Vero细胞后第48小时用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达;pCI-VP2.ORF2B免疫组脾淋巴细胞从第7天开始对ConA有明显反应,显著高于对照组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组;在免疫后第14天检测到PPV/PCV2IgG抗体。提示pCI-VP2.ORF2B能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。
- 梅淼陈燕凌朱玲熊丁杰郭万柱王颖旺吴云飞徐志文
- 关键词：VP2基因ORF2基因B细胞表位
- 一种克隆载体重组质粒pMD18-T Simple-PCV2的构建被引量：2
- 2012年
- 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)的全基因组变异特性,试验设计了1对特异性引物,并从疑似断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病料中经PCR直接扩增出PCV2全基因组,再与载体pMD18-T Simple连接后形成重组质粒pMD18-T Simple-PCV2(命名为P-S-PCV2),经酶切鉴定、PCR鉴定和序列测定分析的阳性重组质粒被证明含有长为1 767 bp的PCV2片段,同时通过Blast与GenBank中国内外的部分PCV2毒株进行同源性比较分析。结果表明:与国内外12个毒株间的同源性介于95.0%～100%之间,与国内的河北株(HB株)亲缘关系最近,同源性高达100%;与澳大利亚株(AUT2株)亲缘关系最远,同源性为95.0%。说明来源不同国家和地区的猪圆环病毒2型毒株存在地域性差异。
- 王赟梅淼杨雪朱玲
- 关键词：酶切同源性分析
