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HIV-1 Gag抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析被引量：1: 2008年; 初步筛选HIV-1 Gag抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。采用超基序、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞株测定肽与HLA-A*0201分子的亲和力和稳定性试验来评价修饰后表位与HLA-A*0201之间亲和性。结果:筛选出3个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。YIYKRWIIL(259-267Y1),YQANFLGKI(429-437Y1)和YTNNPPIPV(249-257Y1)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.68、2.54和2.35,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8h。预测的低亲和力表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。; 李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳; 关键词：HIV-1 CTL 表位

HBV靶向核糖核酸酶及突变体的原核表达和RNase活性分析: 目的研究原核表达的HBV靶向核糖核酸酶(HBV核心蛋白与人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素的融合蛋白)及其突变体(点突变失去核酸酶活性)的RNase活性。方法首先,将构建好的靶向核糖核酸酶(TR)及突变体(TRm)基因克隆入原...; 李英辉刘军薛采芳丁劲赵亚黄豫晓宫卫东; 关键词：原核表达; 文献传递

PbTIP多克隆抗体对恶性疟原虫生长抑制作用的初步研究: 2013年; 首先构建了伯氏疟原虫TIP样蛋白(以下简称PbTIP)的原核表达载体pET32a/PbTIP,在大肠杆菌中成功诱导表达了带His标签的PbTIP融合蛋白。SDS-PAGE分析显示该融合蛋白主要以包涵体形式表达。Western-Blot鉴定虽然证明该融合蛋白表达正确,但即便在变性条件下该蛋白的亲和层析纯化效果也不佳。以PbTIP融合蛋白经过初次和三次加强免疫获得的小鼠PbTIP多克隆抗体滴度达到1∶105以上。进一步的研究表明,小鼠PbTIP抗血清对体外培养恶性疟原虫的生长具有一定的抑制作用,这显示PbTIP多克隆抗体对恶性疟原虫感染具有一定的交叉保护作用。以上实验结果为后续PbTIP在疟原虫免疫抑制中的功能及其机制研究奠定了一定的基础。; 黄豫晓刘学武沈燕李英辉梁娇王军刘忠湘赵亚徐志凯; 关键词：疟原虫免疫抑制

恶性疟原虫复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备被引量：1: 2012年; 原核表达恶性疟原虫多期多表位基因并制备其多克隆抗体。在前期构建恶性疟原虫复合多期多表位重组真核表达载体的基础上,将测序正确的AMAMEG基因克隆入原核表达载体pGEX4T—1并诱导表达。采用包涵体洗涤的方式纯化目的蛋白,以AMA—1抗体对纯化蛋白进行Western—blot分析。将纯化的融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。通过PCR成功获得长度为1 000 bp的恶性疟原虫AMA—1胞外域基因片段,获得了与多表位基因连接后的AMAMEG基因。通过诱导表达,显示在相对分子量约95 000处有预计大小的特异性条带,表明成功表达出融合蛋白。经此纯化的融合蛋白免疫的小鼠能产生特异性抗体,其滴度达到1∶105。纯化的融合蛋白和多克隆抗体为研究新型疟疾疫苗奠定一定的理论和实践基础。; 沈燕赵亚黄豫晓梁姣刘忠湘李英辉; 关键词：恶性疟原虫疫苗多表位基因

当前我国高等医学教育在慕课浪潮中的为与不为被引量：11: 2015年; 慕课(massive open online course,MOOC)的崛起开启了学习方式的革命,必将对未来教育发展产生极其深远的影响。虽然MOOC与传统教学相比具有一定的优势,但现阶段也存在辍学率高、教学效果认证难等明显的缺陷。面对席卷全球的MOOC浪潮,我国高等医学院校应把握好有所为有所不为的原则:首先,我国高等医学院校应适时适度引进MOOC教学;其次,应把握好分类进行、稳步推进的原则,以"微课程"建设为切入点,逐步加大MOOC制作力度;最后,将MOOC平台与传统课堂教学作为一个整体来规划和发展,互相取长补短,培养更多具有可持续发展能力的高素质医学人才。; 赵亚黄豫晓李英辉刘学武沈燕梁姣王军张帅; 关键词：医学教育

靶向核糖核酸酶对乙型肝炎病毒复制的作用: 2004年; 通过定量检测上清液中的乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA),进一步研究靶向核糖核酸酶对HBV复制的影响.; 刘军李英辉薛采芳丁劲宫卫东赵亚黄豫晓; 关键词：病毒复制乙型肝炎病毒聚合酶链反应

靶向核糖核酸酶抗乙肝病毒作用的研究和抗乙肝病毒机制的初步探索: 乙肝病毒感染是一个世界范围的卫生问题。据统计,全世界大约有3.5亿乙型肝炎病毒慢性感染者,我国约有1.2亿,其中相当大的一部分,特别是围产期//幼年期乙肝病毒感染者会迁延转变成为慢性肝炎,肝硬化或者肝癌。在过去的二十年中...; 李英辉; 关键词：乙型肝炎病毒原核表达复性; 文献传递

不同剂量γ射线辐照对小鼠红内期疟原虫杀伤作用的研究: 2009年; 目的探寻不影响正常红细胞活性及功能且能够有效杀伤血液中疟原虫的γ射线辐照方法。方法感染约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii,P.y)种鼠血液,设实验组(辐照组,n=5)和对照组(未辐照,n=5),辐照组采用Gammacell 1000 Elite血液辐照仪,分别经γ射线25、35、45Gy单次均匀照射后,将所有的血液样本置于4℃存放,分别于辐照后1、3及5d取样,感染小鼠,间隔2d采血涂片镜检,计算各组小鼠原虫感染率。结果对照组小鼠出现原虫血症较早(1—2d),疟原虫感染率明显高于辐射组(3.7%vs0.07%),辐照剂量越大,血液中的原虫存活数量越少,小鼠存活时间也随之延长(8—12d);45Gy辐照剂量组4℃放置5d的血液感染小鼠,红细胞内未见疟原虫;对照组血检阳性,小鼠全部死亡。结论血液经45Gy辐照4℃放置5d,可以有效杀伤小鼠红细胞内疟原虫。; 刘忠湘李英辉赵亚雷俊川薛采芳夏爱军张献清; 关键词：Γ射线疟原虫红细胞小鼠

可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统的建立及评价: 2008年; 目的:建立可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统。方法:体外合成编码随机12肽的DNA片段;在最优化的实验参数和反应条件下将DNA片段克隆入带有EGFP标记的逆转录病毒载体后分批次电击转化大肠杆菌,合并转化所得菌液即为可表达随机12肽库的逆转录病毒原始载体库;半固体扩增法扩增该原始载体库,提取质粒并转染GP2-293包装细胞,在EGFP表达最强的时间点收集细胞培养上清,即为可表达随机12肽库的逆转录病毒库。结果:可表达随机12肽库的逆转录病毒原始载体库的库容量为3.14×106cfu;扩增后的逆转录病毒载体库滴度为5.2×109cfu/mL,库容量为2.34×1011cfu;转染了已扩增的载体库质粒后的GP2-293包装细胞可以成功地表达随机12肽库。结论:建立了可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统,为抗病毒寡肽的筛选以及进一步的深入研究奠定了良好的基础。; 赵亚李英辉黄豫晓刘忠湘雷俊川李淑梅刘军薛采芳; 关键词：肽库逆转录病毒电击转化转染

HBV靶向核糖核酸酶真核表达载体的构建及其在2.2.15细胞内的表达被引量：13: 2002年; 目的　构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)与乙肝病毒核心蛋白 (HBVc)的融合真核表达载体(该融合蛋白即为构建的靶向核糖核酸酶 ) ,抑制乙肝病毒在细胞内的复制。方法　分别从HL 6 0细胞和 2 2 15细胞中提取总RNA ,用RT PCR特异性扩增hEDN及HBVc编码基因 ,将hEDN和HBVc克隆入真核表达载体pcDNA3 1(- ) ,hEDN克隆入原核表达载体 pGEX4T 1,并以纯化的原核表达产物免疫Balb/c小鼠 ,制备特异性抗体。用免疫荧光法检验 pcDNA3 1(- ) /HBVc -hEDN在转染 2 2 15细胞内地表达。结果　成功地构建了hEDN和HBVc的真核融合表达载体 ,并在 2 2 15细胞中较高效地表达。结论　pcDNA3 1(- ) /HBVc hEDN的构建和在 2 2 15细胞内的表达。; 李英辉刘军薛采芳; 关键词：乙肝病毒真核表达

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李英辉

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