李民友
- 作品数：14 被引量：33H指数：4
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- 抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:运用噬菌体展示技术构建抗人β-淀粉样肽(Aβ)特异性单链抗体的抗体库并进行初步鉴定.方法:从Aβ免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,分离纯化mRNA,经逆转录合成其总cDNA.以PCR方法分别扩增出抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段,再经重组PCR将两基因片段由编码十五肽(Gly4Ser)3的接头连在一起,克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染后回收全部重组噬菌体,构建噬菌体抗体库,SDS-PAGE鉴定纯度.结果:经琼脂糖凝胶电泳分析,RT-PCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350bp和325bp,与预期VH,VL基因片段理论值相符.经重组PCR得到大小约750bp的ScFv基因片段.ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体,回收后构建成库容量为1.1×108的噬菌体抗体库,经SDS-PAGE鉴定,得到Mr约为30000ku,纯度较好的ScFv抗体.结论:成功构建了库容量大的特异性噬菌体抗体库,为抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定、临床实验诊断方法建立和治疗应用打下基础.
- 段朝晖毛越苹罗晓红李民友劳伟思王英朱振宇
- 关键词：噬菌体展示技术单链抗体阿尔茨海默病Β-淀粉样肽
- TNF-α诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡及其对小鼠B16细胞移植瘤生长的抑制作用被引量：2
- 2004年
- 目的:探讨TNF-α对小鼠B16黑色素瘤(MM)细胞凋亡的诱导及其对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用。方法:用不同浓度的TNF-α直接作用于培养的小鼠B16黑色素瘤细胞,36h后,采用流式细胞仪(FCM)及原位末端标记法(TUNEL法)检测B16细胞的凋亡率。动物实验观察TNF-α小量瘤体内注射对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用。结果:在1000、3000、5000及10000U/mLTNF-α作用下,B16细胞的凋亡指数均明显高于空白对照组(P<0.01),随着TNF-α浓度增加,B16凋亡细胞数呈增加趋势。动物实验结果显示,TNF-α治疗3周后,治疗组荷瘤小鼠MM移植瘤的体积和重量明显低于对照组(P<0.01)。结论:TNF-α能够诱导小鼠B16黑色素瘤细胞发生凋亡,且小剂量TNF-α瘤体内注射能显著抑制小鼠移植性MM的生长。
- 吉琼梅朱振宇王晓华李秀英李民友冯哲玲马涧泉
- 关键词：TNF-Α黑色素瘤细胞细胞凋亡恶性黑色素瘤
- 应用蛋白质L检测和纯化培养上清液中的单链抗体被引量：2
- 2004年
- 目的 探索一种检测和纯化单链抗体的新方法。方法 使用不同的酶标记物 ,观察ELISA法检测培养上清液中单链抗体的相对灵敏度。含单链抗体的培养上清液经超滤、313g L饱和硫酸铵沉淀及蛋白质L 琼脂糖亲和层析纯化单链抗体。结果 HRP标记蛋白质L可检测到 1∶16孔的阳性结果 ,而HRP标记蛋白质A仅检测到 1∶2孔的阳性结果。用 9E10单抗检测培养上清液中的单链抗体时 ,除加入未经稀释培养上清液孔略有显色外 ,其他加入稀释后的培养上清液孔均不显色。蛋白质L亲和层析纯化的单链抗体经SDS PAGE及ELISA鉴定 ,所得到的单链抗体纯度高、活性保持良好。结论 蛋白质L是一种能灵敏检测和有效纯化单链抗体的结合物 ,本实验建立的方法是一种有效。
- 李民友虞东方张海涛冯哲玲李秀英刘祖国朱振宇
- 关键词：单链抗体培养上清液纯化
- 抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的制备及性能鉴定
- 抗体技术已经由细胞工程抗体发展到了基因工程抗体.噬菌体抗体库技术的出现及噬菌体抗体的研制成功已成为抗体研究领域的突破性进展之一,该技术被誉为抗体技术的第三次革命,必将为生物技术领域的发展带来巨大的推动.噬菌体抗体库(ph...
- 李民友
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体阿尔茨海默病Β-淀粉样肽
- 文献传递
- PEA抑酸作用的脑内过程
- 李民友
- DAPK1基因转染对高转移性肺癌细胞PGCl_3的影响被引量：7
- 2004年
- 背景与目的:死亡相关蛋白激酶DAPK1失活是影响非小细胞肺癌患者生存的独立因子,过表达的DAPK1可以诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤转移,但抑制转移的机制尚未完全清楚。本文探讨DAPK1基因抑制高转移性肺癌PGCl3细胞生长及转移的可能机制。方法:利用基因重组技术构建含DAPK1基因开放读码框(ORF)的真核表达载体pcDNA3.1-DAPK1,用脂质体LipofectAMINE2000介导转染PGCl3细胞系,检测转染后PGCl3细胞的生长曲线、体外软琼脂克隆形成率、体外侵袭、运动和粘附能力的变化,同时检测了胶原酶活性,p53,bcl-2基因表达的变化。结果:转染DAPK1基因的细胞生长比空白组及pcDNA3.1转染组减缓;体外软琼脂克隆形成率下降P<0.05;pcDNA3.1-DAPK1转染组体外侵袭能力是空白组的68.5%,而pcDNA3.1转染组是空白组的88.0%;pcDNA3.1-DAPK1转染组运动能力是空白组的87.3%,pcDNA3.1转染组是空白组的95.7%;pcDNA3.1-DAPK1转染组粘附能力是空白组的62.7%,pcDNA3.1转染组是空白组的91.2%;各组的胶原酶变化不明显;pcDNA3.1-DAPK1转染组p53基因表达升高,bcl-2基因下调。结论:DAPK1基因的过表达可以在一定程度上逆转PGCl3细胞的恶性表型,使PGCl3细胞生长受抑制,体外侵袭、运动和粘附能力下降,p53基因表达的上调及bcl-2基因表达下调。
- 张海涛朱振宇冯哲玲李秀英李民友马涧泉梁念慈
- 关键词：PGCL3影响因素
- 抗乳铁蛋白单链抗体及其制备方法和用途
- 本发明涉及抗乳铁蛋白单链抗体及其制备方法和用途，是一种针对乳铁蛋白的特异性单链抗体，是以乳铁蛋白LF为研究靶象，从制备抗LF的单链抗体开始，通过检测乳铁蛋白的表达量协助干眼的诊断。其制备方法是：首先进行抗LF噬菌体抗体的...
- 刘祖国虞东芳李民友
- 文献传递
- 人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：3
- 2004年
- 【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定?【结果】 PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mut1基因片段,正确插入pET-22 b(+)载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量Mr≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L?【结论】 成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白?
- 蔡卫斌李朝阳杨中汉骆晓枫周世豪李民友刘祖国高国全
- 关键词：纤溶酶原基因突变大肠杆菌血管增生
- 泪液乳铁蛋白夹心法酶联免疫吸附试验的建立及初步临床应用被引量：6
- 2007年
- 泪液乳铁蛋白（lactoferrin，LF）是泪液中最主要的抗菌蛋白质，对眼表组织起积极防护作用，其含量在很大程度上能反映泪腺的外分泌功能。干眼是与泪膜密切相关的眼表疾病，病因复杂、临床表现多样，诊断存在较大困难。多项研究表明，泪液LF含量检测可能是诊断干眼最敏感特异的指标。本研究应用噬菌体抗体库技术和动物免疫制备了抗人LF单链抗体和兔抗人LF多克隆抗体，建立LF的双抗夹心酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法，以检测泪液LF含量，评价该指标对于干眼的诊断价值。
- 虞东芳刘祖国胡皎月蒋爱华郝尚臣许传超邹文进李民友
- 关键词：酶联免疫吸附试验初步临床应用泪液夹心法噬菌体抗体库技术眼表疾病
- 人颗粒酶B真核表达载体的构建与表达分析被引量：1
- 2004年
- 目的构建能在Hep2细胞中表达的颗粒酶B的表达质粒pVAX1-GrB。方法用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,用RT-PCR方法扩增其分泌蛋白颗粒GrB的全部外显子片段,利用基因重组技术将其定向插入pVAX1多克隆位点。脂质体介导转染Hep2细胞,用间接免疫荧光法观察目的蛋白在细胞中的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得GrB基因片段,GrB准确克隆入pVAX1的多克隆位点,未改变读码框架。转染Hep2细胞后,检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了VAX1-GrB,并在Hep2细胞中得到表达。
- 李秀英夏良平谢金卫赵肃清曾宗渊张海涛吉琼梅李民友朱振宇
- 关键词：颗粒酶B淋巴细胞
