李晓帆
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：山西省科学技术发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中介素真核表达质粒的构建及其在大鼠近端肾小管上皮细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建带有绿色荧光蛋白的中介素(IMD)真核表达质粒pIRES2-EGFP/IMD,并转染大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E)。方法合成带有IMD基因片段的pMD19-TSimple/IMD质粒,将pMD19-TSimple/IMD质粒和pIRES2-EGFP载体双酶切之后进行高效连接,将IMD亚克隆至pIRES2-EGFP上,对重组表达载体进行酶切、测序鉴定。采用FuGENEHD转染试剂转染NRK-52E细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白。提取细胞mRNA和蛋白,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测基因表达,Western检测IMD蛋白表达。结果经限制性酶切鉴定及测序分析证实pIRES2-EGFP/IMD载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的NRK-52E细胞有绿色荧光蛋白的表达,经RT-PCR和Western测定分析,转染细胞IMD基因及蛋白的表达增加。结论pIRES2-EGFP/IMD载体构建成功,并在NRK-52E细胞内成功表达。
- 周芸李荣山乔晞崔晓燕寇敏于桂花刘兴花李晓帆白波邵珊
- 关键词：质粒转染中介素
