李宇琳
- 作品数：13 被引量：59H指数：5
- 供职机构：国家工程研究中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低温保存对人骨髓基质干细胞在脱钙骨上体外增殖及成骨能力的影响被引量：5
- 2006年
- 目的研究低温保存对人骨髓基质干细胞(BMSCs)在脱钙骨(DBM)上生长特性及成骨能力的影响。方法取3例志愿者骨髓(3～5mL),密度梯度离心、差速贴壁法获得BMSCs。第3代BMSCs在-196℃下保存24h,37℃复苏,测定细胞成活率。低温保存前、后的BMSCs分别用成骨诱导液诱导培养,至90%融合时,收集细胞接种在DBM支架上,并测定细胞在DBM上的粘附率。DiI荧光染料标记BMSCs,例置相差显微镜、荧光显微镜和SEM观察低温保存前、后的BMSCs在DBM上的生长及基质分泌情况,MTT法测定细胞在DBM上的增殖活性。通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量观察细胞在DBM上的成骨能力。结果复苏细胞的存活率为(90．24±0．02)%。低温保存前、后的BMSCs在DBM上的粘附率分别为(97．25±1．17)%和(97．00±1．09)%。倒置相差显微镜及SEM观察显示低温保存前、后的BMSCs在DBM上粘附、生长良好,有大量细胞外基质分泌、沉积。低温保存前、后的BMSCs在DBM上MTT吸光度值和ALP活性的检测结果差异无显著性意义(P＞0．05)；体外培养12d时,MTT吸光度值及ALP活性同时达到峰值。低温保存前、后的BMSCs在DBM上分泌OCN的量差异无显著性意义(P＞0．05),OCN含量随着培养时间延长而不断上升,在观察期(16d)内未出现平台期。结论低温保存对人BMSCs在DBM上的体外增殖、粘附及成骨能力影响差异无显著性意义,低温保存的人BMSCs可作为组织工程骨的种子细胞。
- 刘广鹏舒朝锋尹烁李宇琳崔磊曹谊林
- 关键词：骨髓基质干细胞脱钙骨
- 软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞向软骨细胞表型分化的影响因素被引量：16
- 2005年
- 目的探讨软骨形态发生蛋白1(CDMP1)生长因子体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化的影响因素。方法取包皮环切术后丢弃的真皮组织共3例,分离成纤维细胞体外培养扩增,以含10%胎牛血清的F12培养液加入CDMP1(终浓度为100ng/ml)进行诱导,未加CDMP1的作为对照。观察细胞多次传代后(P2、P5、P10)细胞表型分化情况;调整CDMP1浓度分别为10、30、100、300ng/ml,观察诱导后软骨细胞表型的变化;单层培养与微团块培养成纤维细胞分别体外诱导7、14d,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测细胞诱导前后骨形态发生蛋白受体(BMPR)、Ⅱ、Ⅳ、Ⅹ型胶原表达;Western印迹检测细胞诱导前后Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖的表达;流式细胞术检测表面标志CD29、CD105、CD106、CD166及细胞诱导后Ⅰ、Ⅱ型胶原表达。结果细胞多次传代后(P5、P10)仍可表达特异软骨基质Ⅱ型胶原与蛋白聚糖,Ⅱ型胶原阳性细胞率与P2诱导后差异无统计学意义(P>0.05)。CDMP1浓度为10、30ng/ml诱导7、14d,均未见Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达;CDMP1浓度为100、300ng/ml时,Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达强度差异无统计学意义。单层培养成纤维细胞诱导14d后,软骨基质表达消失;微团块三维培养诱导14d,软骨基质仍保持表达。RTPCR检测诱导后ActRI/ALK2,BMPRIA/ALK3,BMPRIB/ALK6基因表达明显增强。结论在CDMP1生长因子诱导下,人真皮成纤维细胞体外扩增后可保持向成软骨细胞表型分化能力,细胞分化与CDMP1浓度、细胞三维培养条件及BMPR介导有关。
- 崔磊尹烁邓辰亮李宇琳杨光辉陈富国刘伟刘德莉曹谊林
- 关键词：软骨细胞成纤维细胞骨形态发生蛋白质类真皮成纤维细胞成软骨细胞流式细胞术检测逆转录-聚合酶链反应
- 人脐血间充质干细胞修复颅骨缺损的实验研究被引量：7
- 2010年
- 目的应用人脐血间充质干细胞（umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells，UCB—MSCs）复合脱钙骨材料构建组织工程化骨，修复裸大鼠颅骨标准缺损。方法体外扩增培养、成骨诱导人UCB—MSCs，采用AlizarinRed染色和钙离子半定量的方法测定细胞成骨分化能力。将第2代细胞接种在脱钙骨支架材料上继续诱导培养，扫描电镜检测细胞在材料上的生长状况。制备裸大鼠双侧颅骨全层标准缺损（直径5mm），一侧以细胞材料复合物修复作为实验侧（n=8）；另一侧以单纯脱钙骨材料修复作为对照侧（n=8）。术后6、12周取材，分别通过大体形态观察、显微CT（Micro—CT）、组织学方法检测颅骨缺损的修复效果。结果UCB—MSCs体外能够诱导分化为成骨细胞，且在脱钙骨支架材料上生长良好。Micro—CT检测显示术后6周实验侧有部分新生骨组织形成，12周时骨缺损修复率达（78．19±6．45）％，脱钙骨材料降解完全；对照侧6周时无明显新骨生成，12周时材料完全降解，骨缺损未修复。组织学检测显示12周时实验侧有较多成熟骨生成，为骨性愈合；对照侧骨缺损为纤维愈合。结论成骨诱导的人UCB—MSCs复合脱钙骨材料构建的组织工程化骨可修复裸大鼠颅骨全层标准缺损，有望成为新的组织工程骨种子细胞来源。
- 刘广鹏李宇琳孙剑崔磊张文杰曹谊林
- 关键词：间充质干细胞颅骨脱钙骨
- 成骨诱导的人骨髓基质干细胞生物安全性评价被引量：3
- 2008年
- 目的分析人骨髓基质干细胞在体外成骨诱导培养条件下,其染色体核型及端粒酶活性是否发生异常的改变,细胞是否产生致肿瘤性,为验证人骨髓基质干细胞作为骨组织工程种子细胞的安全性提供实验依据。方法采用常规细胞染色体G显带处理方法对3例成骨诱导培养的人骨髓基质干细胞样本进行核型分析,采用端粒酶活性PCR-ELISA检测法分析细胞的端粒酶活性,并通过裸鼠皮下致肿瘤试验对细胞的致肿瘤性进行研究。结果人骨髓基质干细胞体外成骨诱导培养至第7代,未发现染色体核型异常改变,相应的端粒酶活性也未出现异常增高。致肿瘤试验,在观察期内均未见结节形成或可疑病灶产生,符合国家医疗产品生物学评价标准的要求。结论人骨髓基质干细胞在体外长期成骨诱导培养条件下,染色体核型及端粒酶活性均未出现异常改变,且无致肿瘤性,符合作为骨组织工程种子细胞的生物安全性应用要求。
- 刘广鹏李宇琳孙剑周恒
- 关键词：骨髓基质干细胞生物安全性染色体核型
- 低温保存的GFP标记脂肪源性干细胞体外构建组织工程骨的研究被引量：3
- 2011年
- 目的研究经低温保存的GFP基因转染的犬脂肪源性干细胞(ASCs)在脱钙骨(DBM)支架材料上的生长特性及成骨分化潜能。方法胶原酶消化法分离获取并常规培养犬ASCs,用绿色荧光蛋白(GFP)重组逆转录病毒载体转染第2代ASCs,然后进行低温保存。-196℃液氮保存4周后,37℃复苏,测定细胞存活率。低温保存前后的ASCs接种DBM,用成骨诱导液诱导培养2周。激光共聚焦显微镜观察细胞在DBM上的生长情况,DNA定量(Hoechst33258法)测定细胞的体外增殖活性。通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙蛋白(OCN)含量,观察低温冻存对细胞在支架材料上成骨能力的影响。结果低温冻存复苏后细胞的存活率>90%,激光共聚焦显微镜显示细胞在材料上黏附生长良好。体外培养12d时细胞增殖达到平台期,ALP活性与OCN含量则随培养时间延长而不断上升,低温保存前后细胞的检测结果无显著差异(P>0.05)。结论低温保存对GFP标记的犬ASCs在脱钙骨上的体外生长及成骨能力无显著影响,可以作为组织工程骨的种子细胞。
- 刘广鹏孙剑李宇琳周恒崔磊
- 关键词：绿色荧光蛋白质类成体干细胞
- 低温冻存对人脂肪来源干细胞成骨能力影响的实验研究被引量：6
- 2010年
- 目的脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)是组织工程种子细胞的重要来源之一。探讨低温保存对hADSCs体外生长特性及成骨分化潜能的影响,验证冻存后的ADSCs作为组织工程骨种子细胞的可行性。方法取自愿捐献的经脂肪抽吸术获取人脂肪组织,采用胶原酶消化法分离hADSCs。取第2代hADSCs置于-196℃液氮保存4周后,37℃复苏并测定细胞存活率。实验分为两组,实验组为低温保存的hADSCs,对照组为未经低温保存的hADSCs;均用成骨诱导液诱导培养。采用DNA定量(Hoechst33258荧光比色法)测定细胞体外增殖活性,ALP染色及茜素红染色法测定ALP活性和Ca2+含量,观察低温冻存对细胞成骨能力的影响。结果低温冻存复苏后的hADSCs存活率为90.44%±2.62%。两组细胞数量随成骨诱导时间延长不断增加,7d达平台期;ALP表达活性也不断增加,于成骨诱导11d达平台期,且2周时ALP染色均呈阳性;成骨诱导3周时两组茜素红染色均呈强阳性反应。两组各时间点细胞数量、ALP活性和Ca2+含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论低温保存的hADSCs体外生长及成骨能力未发生显著变化,可以作为组织工程骨的种子细胞。
- 刘广鹏李宇琳孙剑周恒崔磊
- 关键词：低温冻存脂肪来源干细胞成骨分化
- 绿色荧光蛋白标记的犬脂肪干细胞体外复合珊瑚材料的生长特性被引量：1
- 2006年
- 目的研究犬脂肪干细胞(AdiposeDividedStromalCells,ADSCs)作为种子细复合珊瑚材料体外培养的生长特性。方法分离犬ADSCs,成骨诱导并转染绿色荧光蛋白(GFP)后,复合珊瑚材料培养。检测细胞总数,激光共聚焦观察细胞形态。结果ADSCs-珊瑚复合物体外增殖良好。激光共聚焦显示培养2周后细胞呈老化形态。结论GFP转染不影响细胞传代、增殖。细胞-材料复合物体外培养7天后回植较为适宜。
- 孙剑李宇琳王衡健刘广鹏
- 关键词：绿色荧光蛋白脂肪干细胞STROMAL激光共聚焦成骨诱导
- 人骨髓基质干细胞染色体核型与端粒酶活性的检测分析被引量：1
- 2006年
- 目的分析人骨髓基质干细胞作为组织工程种子细胞,在长期体外扩增及大规模培养条件下,其染色体核型及端粒酶活性是否发生异常的改变。方法采用常规细胞染色体G显带处理方法及端粒酶活性PCR-ELISA检测法分析3例人骨髓基质干细胞样本。结果人骨髓基质干细胞体外培养至P10代,未发现染色体核型异常改变,相应的端粒酶活性也未出现异常增高。结论人骨髓基质干细胞在体外长期培养扩增的条件下,染色体核型及端粒酶活性未出现异常改变,符合种子细胞安全性的应用要求。
- 李宇琳周恒孙剑刘广鹏
- 关键词：人骨髓基质干细胞染色体核型端粒酶活性细胞体外培养体外长期培养细胞染色体
- 自体骨髓基质干细胞组织工程骨修复颅骨缺损的临床研究被引量：7
- 2009年
- 目的探讨人骨髓基质干细胞(hBMSCs)作为种子细胞的组织工程骨修复外伤后颅骨缺损的可行性。方法自2006年6月至2007年2月,共4例外伤后颅骨缺损患者,抽取患者骨髓,分离得到hBMSCs,体外扩增和成骨诱导后,将hBMSCs与部分脱钙骨复合,体外共培养1周后,手术植入颅骨缺损区。分别于术后1周和3个月、6个月进行临床和三维CT检查随访。结果术后1周,三维CT均显示骨缺损区被所植入的组织工程骨充填;术后3～6个月,CT显示组织工程骨形成并修复骨缺损,新生骨与骨缺损断端融合。高龄患者及骨缺损面积过大患者,组织工程骨体内成活率较差。结论通过选择适宜的病例,以自体hBMSCs作为种子细胞,运用组织工程技术可以在人体内形成稳定的组织工程骨并可用于修复颅骨缺损。
- 王有刚李新庆李春和吴智远崔磊刘广鹏李宇琳孙剑
- 关键词：骨髓基质干细胞颅骨缺损
- 茜素红半定量测定细胞基质钙含量的实验研究被引量：10
- 2008年
- 目的使用茜素红检测的方法,对细胞在成骨诱导和未诱导状态下,细胞基质中钙盐沉积情况进行半定量分析,研究细胞基质中钙盐沉积情况变化趋势规律,为临床实践提供理论参考。方法对4例正常人骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及4例正常人脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs),使用茜素红半定量法检测成骨诱导及未诱导细胞基质中钙盐沉积情况进行半定量分析,研究细胞基质中钙盐沉积情况变化趋势规律。结果对于相同代次的间充质干细胞,未诱导组的钙盐沉积情况,在7d后没有显著的改变;而诱导组钙盐的沉积在10～14d明显增多。实验结果同时显示,同一样本的间充质干细胞,随着代次增加,未诱导组钙盐的沉积时间延后,且沉积量逐渐减少。诱导组钙盐的沉积情况,7d时没有显著的改变;14d时,随代次增加,钙盐沉积量逐渐减少。结论体外成骨诱导的第3～4代的间充质干细胞在第10～14天已经具有较强的成骨活性,可能比较适宜体内回植。本实验为组织工程骨的体外构建时间提供了理论依据。
- 李宇琳周恒刘广鹏崔磊
- 关键词：茜素红细胞基质骨髓基质干细胞脂肪间充质干细胞
