周恒
- 作品数：7 被引量：29H指数：3
- 供职机构：国家工程研究中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成骨诱导的人骨髓基质干细胞生物安全性评价被引量：3
- 2008年
- 目的分析人骨髓基质干细胞在体外成骨诱导培养条件下,其染色体核型及端粒酶活性是否发生异常的改变,细胞是否产生致肿瘤性,为验证人骨髓基质干细胞作为骨组织工程种子细胞的安全性提供实验依据。方法采用常规细胞染色体G显带处理方法对3例成骨诱导培养的人骨髓基质干细胞样本进行核型分析,采用端粒酶活性PCR-ELISA检测法分析细胞的端粒酶活性,并通过裸鼠皮下致肿瘤试验对细胞的致肿瘤性进行研究。结果人骨髓基质干细胞体外成骨诱导培养至第7代,未发现染色体核型异常改变,相应的端粒酶活性也未出现异常增高。致肿瘤试验,在观察期内均未见结节形成或可疑病灶产生,符合国家医疗产品生物学评价标准的要求。结论人骨髓基质干细胞在体外长期成骨诱导培养条件下,染色体核型及端粒酶活性均未出现异常改变,且无致肿瘤性,符合作为骨组织工程种子细胞的生物安全性应用要求。
- 刘广鹏李宇琳孙剑周恒
- 关键词：骨髓基质干细胞生物安全性染色体核型
- 低温保存的GFP标记脂肪源性干细胞体外构建组织工程骨的研究被引量：3
- 2011年
- 目的研究经低温保存的GFP基因转染的犬脂肪源性干细胞(ASCs)在脱钙骨(DBM)支架材料上的生长特性及成骨分化潜能。方法胶原酶消化法分离获取并常规培养犬ASCs,用绿色荧光蛋白(GFP)重组逆转录病毒载体转染第2代ASCs,然后进行低温保存。-196℃液氮保存4周后,37℃复苏,测定细胞存活率。低温保存前后的ASCs接种DBM,用成骨诱导液诱导培养2周。激光共聚焦显微镜观察细胞在DBM上的生长情况,DNA定量(Hoechst33258法)测定细胞的体外增殖活性。通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙蛋白(OCN)含量,观察低温冻存对细胞在支架材料上成骨能力的影响。结果低温冻存复苏后细胞的存活率>90%,激光共聚焦显微镜显示细胞在材料上黏附生长良好。体外培养12d时细胞增殖达到平台期,ALP活性与OCN含量则随培养时间延长而不断上升,低温保存前后细胞的检测结果无显著差异(P>0.05)。结论低温保存对GFP标记的犬ASCs在脱钙骨上的体外生长及成骨能力无显著影响,可以作为组织工程骨的种子细胞。
- 刘广鹏孙剑李宇琳周恒崔磊
- 关键词：绿色荧光蛋白质类成体干细胞
- 低温冻存对人脂肪来源干细胞成骨能力影响的实验研究被引量：6
- 2010年
- 目的脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)是组织工程种子细胞的重要来源之一。探讨低温保存对hADSCs体外生长特性及成骨分化潜能的影响,验证冻存后的ADSCs作为组织工程骨种子细胞的可行性。方法取自愿捐献的经脂肪抽吸术获取人脂肪组织,采用胶原酶消化法分离hADSCs。取第2代hADSCs置于-196℃液氮保存4周后,37℃复苏并测定细胞存活率。实验分为两组,实验组为低温保存的hADSCs,对照组为未经低温保存的hADSCs;均用成骨诱导液诱导培养。采用DNA定量(Hoechst33258荧光比色法)测定细胞体外增殖活性,ALP染色及茜素红染色法测定ALP活性和Ca2+含量,观察低温冻存对细胞成骨能力的影响。结果低温冻存复苏后的hADSCs存活率为90.44%±2.62%。两组细胞数量随成骨诱导时间延长不断增加,7d达平台期;ALP表达活性也不断增加,于成骨诱导11d达平台期,且2周时ALP染色均呈阳性;成骨诱导3周时两组茜素红染色均呈强阳性反应。两组各时间点细胞数量、ALP活性和Ca2+含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论低温保存的hADSCs体外生长及成骨能力未发生显著变化,可以作为组织工程骨的种子细胞。
- 刘广鹏李宇琳孙剑周恒崔磊
- 关键词：低温冻存脂肪来源干细胞成骨分化
- 茜素红半定量测定细胞基质钙含量的实验研究被引量：10
- 2008年
- 目的使用茜素红检测的方法,对细胞在成骨诱导和未诱导状态下,细胞基质中钙盐沉积情况进行半定量分析,研究细胞基质中钙盐沉积情况变化趋势规律,为临床实践提供理论参考。方法对4例正常人骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及4例正常人脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs),使用茜素红半定量法检测成骨诱导及未诱导细胞基质中钙盐沉积情况进行半定量分析,研究细胞基质中钙盐沉积情况变化趋势规律。结果对于相同代次的间充质干细胞,未诱导组的钙盐沉积情况,在7d后没有显著的改变;而诱导组钙盐的沉积在10～14d明显增多。实验结果同时显示,同一样本的间充质干细胞,随着代次增加,未诱导组钙盐的沉积时间延后,且沉积量逐渐减少。诱导组钙盐的沉积情况,7d时没有显著的改变;14d时,随代次增加,钙盐沉积量逐渐减少。结论体外成骨诱导的第3～4代的间充质干细胞在第10～14天已经具有较强的成骨活性,可能比较适宜体内回植。本实验为组织工程骨的体外构建时间提供了理论依据。
- 李宇琳周恒刘广鹏崔磊
- 关键词：茜素红细胞基质骨髓基质干细胞脂肪间充质干细胞
- 人骨髓基质干细胞染色体核型与端粒酶活性的检测分析被引量：1
- 2006年
- 目的分析人骨髓基质干细胞作为组织工程种子细胞,在长期体外扩增及大规模培养条件下,其染色体核型及端粒酶活性是否发生异常的改变。方法采用常规细胞染色体G显带处理方法及端粒酶活性PCR-ELISA检测法分析3例人骨髓基质干细胞样本。结果人骨髓基质干细胞体外培养至P10代,未发现染色体核型异常改变,相应的端粒酶活性也未出现异常增高。结论人骨髓基质干细胞在体外长期培养扩增的条件下,染色体核型及端粒酶活性未出现异常改变,符合种子细胞安全性的应用要求。
- 李宇琳周恒孙剑刘广鹏
- 关键词：人骨髓基质干细胞染色体核型端粒酶活性细胞体外培养体外长期培养细胞染色体
- 人骨髓基质干细胞成骨诱导后端粒酶活性的检测分析被引量：4
- 2007年
- 目的分析人骨髓基质干细胞作为组织工程种子细胞,在长期体外扩增并进行成骨诱导下,其端粒酶活性是否发生异常的改变。方法采用端粒酶活性PCR-ELISA检测法分析3例人骨髓基质干细胞成骨诱导样本。结果人骨髓基质干细胞体外成骨诱导培养至第6代,其端粒酶活性未出现异常增高。结论人骨髓基质干细胞在体外长期成骨诱导培养扩增的条件下,端粒酶活性未出现异常改变。
- 周恒李宇琳孙剑刘广鹏
- 关键词：骨髓基质干细胞端粒酶活性
- 基于快速成形的磷酸钙多孔陶瓷成骨性能初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的磷酸钙生物材料由于其优良的生物相容性而具有广阔的应用前景,但传统方法难以制备具有复杂形状的支架。以快速成形方法制备磷酸钙多孔陶瓷支架材料,并对其体外成骨性能进行初步研究。方法采用快速成形方法制备磷酸钙多孔陶瓷支架材料(直径10mm、高度5mm、孔径800μm),取Beagle犬髂骨髓分离培养BMSCs,接种第3代BMSCs于支架材料上。将实验分为4组,A组为成骨诱导培养的细胞/材料复合物组,B组为未经成骨诱导培养的细胞/材料复合物组,另设平皿成骨诱导培养及常规培养为阳性对照组(C组)及阴性对照组(D组)。于接种后第1、3、7天,利用DNA定量检测方法及ALP定量、定性检测方法检测BMSCs在支架材料上的增殖及ALP的表达;并经DiO荧光染色后,应用激光共聚焦显微镜观察BMSCs在材料上的黏附生长情况。结果 DNA定量结果表明,随培养时间增加,C、D组在第3天时细胞生长进入平台期;A、B组细胞呈持续增长趋势,细胞培养过程中增殖速度均略低于C、D组,且未出现明显的平台期。DiO荧光染色示,BMSCs在以快速成形方法制备的磷酸钙多孔陶瓷支架材料上黏附、生长状态良好。ALP染色示,随培养时间延长,A、B组支架上细胞染色均逐渐加深,A组各时间点染色程度均明显强于B组。培养后第1、3天,4组ALP表达均较低,差异无统计学意义(P>0.05);培养第7天,各组ALP表达均明显升高,A组比其他各组明显高表达(P<0.05),B组及C组均明显高于D组(P<0.05)。结论快速成形的多孔磷酸钙陶瓷具有良好的细胞相容性,BMSCs与支架复合在体外诱导培养可以进行成骨分化。因此通过快速成形技术制备的磷酸钙多孔陶瓷是骨组织工程可选的细胞支架。
- 何晨光赵莉林柳兰谷辉杰周恒崔磊
- 关键词：磷酸钙陶瓷BMSCS成骨分化
