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抗菌药物对泌尿生殖道沙眼衣原体临床株培养的影响被引量：2: 2013年; 目的探讨抗菌药物对泌尿生殖道沙眼衣原体感染者衣原体培养结果的影响，并分析药敏变化。方法取临床经直接免疫荧光检测确定为衣原体感染者的尿道或宫颈拭子进行传代培养，碘染后发现包涵体者为培养阳性。分析患者临床用药与培养阳性及阳性代数之间的关系，并对阳性菌株进行体外药敏测试。结果2010-2012年，共培养临床标本285份，阳性39份；未用药即培养的标本6l份，阳性17份（27．87％）；用药后培养224份，阳性22份（9．82％），两组阳性率比较，r=13．22，P〈0．05。未用药组阳性的17例中，1代阳性4例，2代5例，3代5例，4代2例，5代1例；用药后组阳性的22例中，2代2例，3代3例，4代9例，5代6例，6代2例，未用药与用药后培养标本首次出现沙眼衣原体包涵体的代数经秩和检验，差异有统计学意义（P〈0．05），未用药标本出现阳性代数早于用药后的标本。对培养阳性的39份的标本进行体外药敏检测，结果发现，未用药患者的MIC值低于用药患者。结论与未用药患者的标本相比，用抗菌药物患者的标本在应用细胞培养法检测衣原体时阳性率低，出现阳性者需增加传代才能检出。; 陈立新王蕊尤聪刘志超王敬李卓然刘原君刘全忠; 关键词：衣原体沙眼微生物敏感性试验

D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探被引量：5: 2014年; 目的获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白，并鉴定其免疫原性。方法PCR扩增目的基因，将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中，连接产物转化入大肠埃希菌DH5c~，提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化人大肠埃希菌BL21并诱导表达，Western印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶（GST）磁珠纯化pgp3-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫新西兰家兔，Western印迹检测抗体与pgp3蛋白的结合，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗体效价。结果克隆目的基因序列长度为795bp，与基因库中一致，Western印迹显示目的蛋白相对分子质量为54000，并得到纯化蛋白。所得兔血清可识别pgp3蛋白，ELISA检测多克隆抗体效价达1：25600。结论成功表达具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白，为进一步研究奠定基础。; 孔杰孙毅娜赵乐然肖萌王敬李卓然刘原君刘全忠; 关键词：衣原体沙眼重组融合蛋白质类免疫法

衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1在D型沙眼衣原体外膜中结合位点的检测被引量：5: 2012年; 目的发现噬菌体phiCPGl衣壳蛋白Vpl在沙眼衣原体中的结合位点，为理解噬菌体与衣原体的相互作用提供线索。方法诱导表达噬菌体phiCPGl的衣壳蛋白Vpl，通过胶回收进行目的蛋白的纯化，复性后以Far-Western印迹技术检测Vpl是否能与衣原体外膜中重组多形外膜蛋白（rPmp）家族及主要外膜蛋白（MOMP）结合。结果在大肠埃希菌中成功表达蛋白Vpl；抗Vpl的单克隆抗体作为一抗进行Western印迹，结果无特异性条带出现，可见针对Vpl的单克隆抗体不与任何一种rPmp结合。Far-Western印迹结果显示，在rPmpI的位置出现明显的条带，在相对于其他rPmp和MOMP的位置无特异性条带的出现，证实Vpl能特异结合D型沙眼衣原体标准株的外膜蛋白rPmpI。结论沙眼衣原体外膜中有Vpl的结合位点，可能通过和rPmpI的结合从而特异性地与沙眼衣原体结合。; 刘原君孙毅娜姚卫锋李燕李卓然卫酒荣刘全忠; 关键词：细菌噬菌体细菌外膜蛋白质类

外源性雌二醇促进沙眼衣原体生长最适浓度的探讨被引量：1: 2013年; 泌尿生殖道沙眼衣原体感染是目前世界范围内最为流行的性传播疾病。目前，实验室检测沙眼衣原体的方法中，细胞培养法不仅是检测沙眼衣原体的金标准，而且在进一步的检验和研究中有着优势。由于临床标本中衣原体浓度低、含杂质、杂菌较多，且多次传代培养成本过高，周期过长，局限了细胞培养检测沙眼衣原体在临床上的应用。为提高细胞培养的阳性率，我们在原有实验室条件的基础上做了探索，实验证明，此方法可提高E型标准株及临床株培养的阳性率。; 陈立新刘志超王蕊李卓然王敬刘原君刘全忠; 关键词：泌尿生殖道沙眼衣原体感染雌二醇外源性细胞培养法临床标本

保留腋浅筋膜剪除顶泌汗腺在腋臭手术中的应用: 目的探讨保留腋浅筋膜剪除顶泌汗腺治疗腋臭的重要意义。方法肿胀麻醉下，取两个与腋纹相平行的横切口，用长组织剪在腋浅筋膜浅层分离皮瓣，翻转皮瓣，直视下用眼科剪刀将顶泌汗腺、毛囊、脂肪一同剪除，使皮肤近似全厚皮瓣。冲洗并缝...; 胡建中李卓然孙晨薇张俊艳亓玉青张桂之

HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素敏感性检测被引量：2: 2013年; 目的:检测体外HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素的敏感性。方法:微量稀释法检测沙眼衣原体E型标准株和34例临床株在HaCaT细胞和McCoy细胞中对红霉素、克拉霉素及阿奇霉素在体外的敏感性。同一抗生素在两种细胞的最低抑菌浓度(MIC)值进行配对t检验。结果:沙眼衣原体E型标准株在两种细胞内对红霉素、克拉霉素及阿奇霉素的MIC值一致。在HaCaT细胞和McCoy细胞中测得临床株的MIC最大值,比以往报道的MIC值均有所升高。在两种细胞中红霉素、克拉霉素及阿奇霉素对临床株的MIC值经配对t检验差异有统计学意义,且在HaCaI细胞中MIC值高于McCoy细胞中的MIC值。结论:体外沙眼衣原体对大环内酯类抗生素的敏感性在不同培养细胞HaCaT细胞和McCoy细胞间存在差异。; 王蕊王敬陈立新李卓然刘原君刘全忠; 关键词：沙眼衣原体

采用HaCaT细胞培养沙眼衣原体被引量：1: 2013年; 目的探讨新的培养沙眼衣原体的细胞。方法借鉴McCoy细胞培养沙眼衣原体的方法，将E型标准株和临床标本接种于HaCaT细胞，分别用碘染、单克隆荧光抗体检测、PCR扩增沙眼衣原体内源性质粒的方法检测沙眼衣原体是否可以在体外感染HaCaT细胞。用HaCaT细胞传代培养沙眼衣原体E型标准株5代，分别计数5次传代的包涵体数，并用SPSSl7软件进行单因素方差分析，以确定沙眼衣原体在HaCaT细胞中是否增殖。结果碘染后可见HaCaT细胞胞质内有典型的包涵体。单克隆荧光抗体检测，在荧光显微镜下可见HaCaT细胞内有黄色荧光颗粒。PCR扩增HaCaT细胞内沙眼衣原体内源性质粒为阳性。沙眼衣原体E型标准株在HaCaT细胞内经传代5次，包涵体数逐渐增加。结论HaCaT细胞在体外培养沙眼衣原体成功，且沙眼衣原体E型标准株在HaCaT细胞中可以增殖。; 王蕊王敬陈立新李卓然刘原君刘全忠; 关键词：沙眼衣原体 HACAT细胞单因素方差分析 PCR扩增 MCCOY

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李卓然

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