王敬
- 作品数：24 被引量：55H指数：5
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- 沙眼衣原体E型DNA疫苗细胞免疫效应研究被引量：4
- 2010年
- 目的研究构建的沙眼衣原体E型DNA疫苗所产生的细胞免疫效应。方法以BALB／c小鼠为实验动物，采用肌内接种免疫的方式，将小鼠分为接种空质粒的阴性对照组、DNA疫苗免疫组和接种灭活沙眼衣原体E型原体的阳性对照组。通过观察小鼠后足垫局部的迟发型超敏反应、沙眼衣原体原体刺激后脾淋巴细胞增殖试验、ELISA检测血清IFN-γ水平、实验动物经生殖道进行同型沙眼衣原体攻击后局部的衣原体培养情况以及局部组织病理学变化来研究所构建疫苗的细胞免疫效果。结果DNA疫苗组和灭活原体组小鼠的迟发型超敏反应水平高于阴性对照组。空质粒组、DNA疫苗组和灭活原体组的脾淋巴细胞刺激指数分别为1．48±0．15、2．35±0．25、3．81±0．30，后两组与空质粒组比较差异有统计学意义，且灭活原体组增殖更明显。三组的血清IFN-γ水平分别为（309．2±157．9）μg/L、（593．3±342．6）μg/L、（2891．7±1048．8）μg/L；DNA疫苗组和灭活原体组与空质粒组比较，差异有统计学意义，且灭活原体组IFN-γ水平更高。沙眼衣原体E型原体攻击后，空质粒组小鼠生殖道局部能够培养出衣原体，生殖道局部组织有破坏。另两组衣原体培养阴性，生殖道局部组织完好。结论沙眼衣原体E型DNA疫苗免疫小鼠后能够诱导产生一定的沙眼衣原体特异性细胞免疫，该疫苗对同型沙眼衣原体的生殖道攻击具有保护作用。
- 齐蔓莉王敬刘全忠陈锦英汤乃军
- 关键词：衣原体沙眼疫苗超敏反应迟发型
- 白介素2基因佐剂对沙眼衣原体E型DNA疫苗的免疫增效作用被引量：5
- 2012年
- 目的探讨小鼠白介素2重组质粒对沙眼衣原体E型DNA疫苗细胞免疫效果的影响。方法以BALB／c小鼠为实验动物，采用肌内接种免疫的方式，将小鼠分为接种空质粒的阴性对照组、DNA疫苗免疫组、DNA疫苗联合小鼠白介素2重组质粒免疫组和接种灭活沙眼衣原体E型原体的阳性对照组，观察小鼠后足垫局部的肿胀情况、脾淋巴细胞增殖试验、血清IL-4和IFN-γ水平和同型沙眼衣原体生殖道攻击后局部的衣原体培养情况。结果4组实验动物的脾淋巴细胞增殖指数分别为1．37±0．21、2．524-0．30、3．644-0．41、3．774-0．34，联合免疫组和阳性对照组比较差异无统计学意义，与另2组比较，差异有统计学意义。4组的血清IL4分别为（25．37±18．93）、（24．75±8．49）、（21．74±6．43）、（38．49±12．24）pg／ml，灭活原体组高于其他各组；4个组的血清IFN-γ分别为（310．8±160．7）pg／ml、（601．3±357．9）pg／ml、（1923．3±518．1）pg／ml、（2712．5±887．2）pg／ml，联合免疫组和阳性对照组相当，与另两组比较，差异有统计学意义。沙眼衣原体E型原体攻击后，空质粒组小鼠生殖道局部能够培养出衣原体；另3个组衣原体培养阴性。结论白介素2基因佐剂能够增强沙眼衣原体E型DNA疫苗的细胞免疫效应，且以Th1型反应为主。
- 齐蔓莉王敬刘原君刘全忠陈锦英
- 关键词：衣原体沙眼白细胞介素2
- 喷昔洛韦联合膦甲酸钠治疗带状疱疹的回顾性分析被引量：14
- 2017年
- 目的 探讨喷昔洛韦联合膦甲酸钠治疗带状疱疹的临床疗效.方法 收集2014年1月至2016年8月在天津医科大学总医院皮肤科住院的135例带状疱疹患者临床资料,其中64例给予喷昔洛韦联合膦甲酸钠抗病毒,其余71例仅给予喷昔洛韦.整理两组患者一般资料、止疱时间、结痂时间、疼痛开始缓解时间、疼痛明显缓解时间、不良反应及是否出现带状疱疹后神经痛,并进行统计分析.结果 两组患者一般资料比较差异无统计学意义,（均P 〉0.05,数值为性别0.086、年龄0.062、发病部位0.284、治疗前病程0.387、治疗前病情评分0.225）,而止疱时间、结痂时间、疼痛开始缓解时间、疼痛明显缓解时间,联合用药组均较喷昔洛韦组短（均P〈0.001）,且带状疱疹后神经痛出现例数少（P =0.013）.两组不良反应比较差异无统计学意义（P=0.928）.结论 喷昔洛韦联合膦甲酸钠治疗带状疱疹起效快,带状疱疹后神经痛发生率低,相比单一喷昔洛韦抗病毒治疗未增加不良反应,是治疗带状疱疹的可靠手段.
- 孔杰刘原君齐蔓莉亓玉青李燕侯淑萍郑欣罗素菊邵丽丽王敬王惠平刘全忠
- 关键词：带状疱疹神经痛膦甲酸钠
- 双酶联合消化法培养人皮肤成纤维细胞被引量：5
- 2019年
- 目的建立一种便捷、高效的人皮肤成纤维细胞体外培养技术,获得大量高纯度原代细胞。方法取健康成年男性包皮标本,去除皮下组织,将皮肤剪成小皮片,以0.25%的胰蛋白酶溶液4 ℃消化过夜后分离去除表皮;将真皮组织剪碎,加入0.1%胶原酶Ⅱ溶液后于37 ℃ CO2孵育箱中消化3~4 h,筛网过滤,收集滤液后离心、培养。绘制细胞生长曲线,HE染色观察细胞形态,细胞免疫荧光、Western blot检测Vimentin鉴定成纤维细胞,取第3代、第6代细胞以流式细胞术检测细胞纯度。结果获得原代人皮肤成纤维细胞;细胞生长周期:0~2 d为潜伏期,2~5 d为指数生长期,之后进入平台期;细胞为梭形或星形;Vimentin表达呈阳性,鉴定为成纤维细胞;第3代、第6代成纤维细胞纯度分别为95.82%、99.51%。结论利用双酶联合消化法成功培养高纯度原代人皮肤成纤维细胞,为进一步研究奠定基础。
- 孔杰刘原君范丽云齐蔓莉王敬韩珑刘全忠
- 关键词：皮肤成纤维细胞原代培养酶消化法
- 抗菌药物对泌尿生殖道沙眼衣原体临床株培养的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨抗菌药物对泌尿生殖道沙眼衣原体感染者衣原体培养结果的影响，并分析药敏变化。方法取临床经直接免疫荧光检测确定为衣原体感染者的尿道或宫颈拭子进行传代培养，碘染后发现包涵体者为培养阳性。分析患者临床用药与培养阳性及阳性代数之间的关系，并对阳性菌株进行体外药敏测试。结果2010-2012年，共培养临床标本285份，阳性39份；未用药即培养的标本6l份，阳性17份（27．87％）；用药后培养224份，阳性22份（9．82％），两组阳性率比较，r=13．22，P〈0．05。未用药组阳性的17例中，1代阳性4例，2代5例，3代5例，4代2例，5代1例；用药后组阳性的22例中，2代2例，3代3例，4代9例，5代6例，6代2例，未用药与用药后培养标本首次出现沙眼衣原体包涵体的代数经秩和检验，差异有统计学意义（P〈0．05），未用药标本出现阳性代数早于用药后的标本。对培养阳性的39份的标本进行体外药敏检测，结果发现，未用药患者的MIC值低于用药患者。结论与未用药患者的标本相比，用抗菌药物患者的标本在应用细胞培养法检测衣原体时阳性率低，出现阳性者需增加传代才能检出。
- 陈立新王蕊尤聪刘志超王敬李卓然刘原君刘全忠
- 关键词：衣原体沙眼微生物敏感性试验
- D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探被引量：5
- 2014年
- 目的获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白，并鉴定其免疫原性。方法PCR扩增目的基因，将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中，连接产物转化入大肠埃希菌DH5c~，提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化人大肠埃希菌BL21并诱导表达，Western印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶（GST）磁珠纯化pgp3-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫新西兰家兔，Western印迹检测抗体与pgp3蛋白的结合，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗体效价。结果克隆目的基因序列长度为795bp，与基因库中一致，Western印迹显示目的蛋白相对分子质量为54000，并得到纯化蛋白。所得兔血清可识别pgp3蛋白，ELISA检测多克隆抗体效价达1：25600。结论成功表达具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白，为进一步研究奠定基础。
- 孔杰孙毅娜赵乐然肖萌王敬李卓然刘原君刘全忠
- 关键词：衣原体沙眼重组融合蛋白质类免疫法
- 泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清抗衣原体免疫优势蛋白抗体的检测被引量：4
- 2013年
- 目的检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清中的抗衣原体质粒编码蛋白3（Pgp3）、抗外膜蛋白复合物B蛋白c端肽（OmcBc）、抗ct841编码蛋白（CT841）和抗热休克蛋白60（HSP60）抗体。方法将编码上述4种蛋白基因的重组质粒和空质粒转化人大肠杆菌，IPTG诱导表达，并用谷胱甘肽磁珠进行纯化后包被ELISA孔板。收集天津医科大学总医院性病门诊泌尿生殖道沙眼衣原体感染者和未感染者血清各20份。ELISA法检测血清中上述蛋白抗体。结果20份沙眼衣原体感染者血清中Pgp3、OmcBc、CT841和HSP60抗体的检出率分别是14例（70％）、9例（45％）、8例（40％）、5例（25％）；20份无沙眼衣原体感染者血清中，仅1例检测到HSP60抗体。结论上述4种衣原体蛋白中，Pgp3的抗原性最强，抗体检出率最高；HSP60的抗原性最弱，抗体检出率最低。
- 肖萌王敬刘全忠齐蔓莉
- 关键词：监控蛋白60
- 沙眼衣原体感染血清学筛查候选蛋白组合的优化
- 目的 优化适用于沙眼衣原体感染血清学筛查的候选抗原蛋白组合.方法 收集天津医科大学总医院性病门诊经胶体金法检测沙眼衣原体阳性者的血清和生殖道分泌物拭子各50 份,胶体金法检测沙眼衣原体阴性者的血清和生殖道分泌物拭子各30...
- 高西波肖萌张新美马璟玥王敬刘全忠齐蔓莉
- 沙眼衣原体感染血清学筛查候选蛋白组合的优化被引量：3
- 2015年
- 目的优化适用于沙眼衣原体感染血清学筛查的候选抗原蛋白组合。方法收集天津医科大学总医院性病门诊经胶体金法检测沙眼衣原体感染者的血清和泌尿生殖道分泌物拭子各50份，胶体金法检测沙眼衣原体未感染者的血清和泌尿生殖道分泌物拭子各30份，此30份血清微量免疫荧光（MIF）法检测为阴性。以沙眼衣原体蛋白Hsp60和MOMP为参照，选择沙眼衣原体Pgp3、CPAF、CT143、CT101、CT694、CT875、CT813、Inca共8种免疫优势蛋白为抗原，检测血清中的相应抗体，将该结果与血清MIF检测和泌尿生殖道分泌物沙眼衣原体细胞培养两种传统金标准作比较，确定具有最高敏感性和特异性的抗原蛋白组合。结果50份胶体金法阳性标本中，MIF检测阳性44份，阴性6份；细胞培养阳性14份，阴性36份。沙眼衣原体Pgp3、CT694和CT875这3种免疫优势蛋白组合的血清学实验结果与MIF阳性符合率达到97．73％（43／44）。30份胶体金法检测沙眼衣原体阴性标本中，30份血清标本经MIF检测全为阴性，也未检出上述3种蛋白抗体。结论Pgp3、CT694与CT875免疫优势蛋白组合用于沙眼衣原体感染的血清学初筛具有很好的敏感性和特异性，且操作简单，易于推广。
- 高西波肖萌张新美马璟玥王敬刘全忠齐蔓莉
- 关键词：沙眼衣原体免疫显性表位血清学试验荧光免疫测定
- 沙眼衣原体E型DNA疫苗诱导小鼠体液免疫效应的研究被引量：5
- 2007年
- 近年来，沙眼衣原体（Chlamydia traehomatis，Ct）引起的泌尿生殖道感染迅速增多，所致的前列腺炎、不孕不育、慢性盆腔炎等严重危害患者的身心健康。本研究在构建E型Ct DNA疫苗的基础上，探讨其诱导小鼠产生的体液免疫应答。
- 王敬刘全忠齐蔓莉
- 关键词：DNA疫苗诱导沙眼衣原体体液免疫效应小鼠E型体液免疫应答
