李丹
- 作品数：25 被引量：72H指数：6
- 供职机构：广州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目NSFC-广东联合基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体位指导联合气道干预在老年重症肺炎患者呼吸机治疗中的应用效果
- 2024年
- 目的:探讨体位指导联合气道干预在老年重症肺炎患者呼吸机治疗中的应用效果。方法:选取2022年1月—2023年1月广州市第一人民医院收治的60例老年重症肺炎患者。根据随机数表法将其分为对照组和观察组,各30例。对照组采用常规护理,观察组在对照组基础上采用体位指导联合气道干预。比较两组干预前、干预7 d后心功能及肾功能指标、应激指标及并发症。结果:干预7 d后,两组左室射血分数(LVEF)升高,舒张早期充盈峰速度/舒张晚期充盈峰速度(E/A)、血肌酐、血尿素氮(BUN)均降低,观察组LVEF高于对照组,血肌酐、BUN均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预7 d后,两组皮质醇(Cor)、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)均降低,观察组Cor、AngⅠ、AngⅡ均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组并发症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体位指导联合气道干预用于老年重症肺炎患者呼吸机治疗中,能改善患者心功能及肾脏功能,减轻应激反应及降低并发症发生率。
- 李丹
- 关键词：体位指导老年重症肺炎呼吸机治疗应激反应
- plenti6.3-hHGF-IRES-hrGFP慢病毒表达载体的构建和鉴定
- 2013年
- 目的构建人肝细胞生长因子(hHGF)基因慢病毒表达载体并进行鉴定。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增IRES和hrGFP,拼接成IRES-hrGFP,并克隆到pLenti6.3载体;进一步采用PCR技术扩增hHGF,并克隆到plenti6.3-IRES-hrGFP载体,然后BamHI/AscI双酶切和测序鉴定构建的plenti6.3-hHGF-IRES-hrGFP重组载体。脂质体法转染293T细胞,24h、48h、72h后显微镜下观察细胞的绿色荧光蛋白表达情况和ElISA测定细胞上清液中HGF蛋白表达情况。最后利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将表达质粒与包装混合物(PackagingMix)共转染293T细胞产生包装病毒颗粒,以293T细胞hrGFP表达水平(荧光显微镜下对hrGFP表达阳性细胞进行计数)测定病毒滴度。结果 IRES,hrGFP和hHGF基因片段重组到plenti6.3载体,电泳结果和双酶切鉴定均能得到与理论大小相符的片段,测序结果与Genebank序列完全一致。质粒转染293T细胞后绿色荧光蛋白表达量和上清中HGF蛋白含量随时间增长而增多,72h最高。24h、48h、72h后HGF蛋白含量分别为(477±19),(1424±78),(4274±128)μg/L。测得病毒的滴度为1.9×108TU/mL。结论携带hHGF基因的慢病毒载体构建成功,在293T细胞中正确表达,并获得较高的病毒滴度,为其体内外研究提供基础。
- 赖丽莎陈俊伟朱康顺李丹李征然单鸿
- 关键词：人肝细胞生长因子慢病毒肝纤维化
- SPIO标记下大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能及体外MR成像被引量：11
- 2009年
- 【目的】探讨超顺磁氧化铁纳米颗粒(SPIO)标记对骨髓间充质干细胞生物学特性和多向分化潜能的影响以及体外磁共振(MRI)成像的可行性,为移植干细胞活体MRI成像提供实验基础。【方法】采用梯度密度离心法和贴壁法获取大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),采用25μg/mLSPIO联合0.75μg/mL多聚赖氨酸(PLL)标记BMSC,比较标记和未标记MSC细胞活力、增值、细胞周期、凋亡和成骨、成脂多向分化能力;应用1.5TMR对不同数量级细胞分别进行T1WI、T2WI和T2*WI序列扫描。【结果】普鲁士兰染色显示SPIO(25μgFe/mL,48h)对细胞的标记率接近100%,细胞活力、增殖、周期和凋亡检测,均显示SPIO标记细胞与未标记细胞间无统计学差异(P>0.05);成骨、成脂诱导显示,BMSC和标记BMSC均具备成骨、成脂分化能力;对不同数量级的SPIO标记BMSC行MR扫描,T1WI、T2WI和T2*WI能检测到的最小数量级细胞分别为2×104,1×104,0.5×104,呈低信号。【结论】25μg/mLSPIO联合0.75μg/mLPLL能有效标记BMSC,不影响BMSC的活力、增值、细胞周期、凋亡和多向分化能力,1.5TMR示踪标记细胞可行,与T1WI和T2WI序列相比,T2*WI最敏感。
- 许杰华李丹于春鹏周斌颜荣华王劲朱康顺单鸿
- 关键词：骨髓间充质干细胞超顺磁性氧化铁粒子
- 骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭被引量：9
- 2011年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗大鼠急性肝衰竭(ALF)的机制,并示踪MSCs在ALF大鼠体内的分布、迁移。方法①以流式细胞仪检测hrGFP慢病毒感染的UE7T-13细胞株(hrGFP-MSCs)和氯甲基苯甲酰氨(CM-DiI)标记MSCs(MSCs-DiI)的绿色荧光蛋白阳性表达率或红色荧光染料标记阳性率。②CCK-8体外检测MSCs、hrGFP-MSCs和MSCs-DiI的细胞增殖情况。③取SD大鼠38只,建立急性肝损伤模型,30只造模成功,随机分为3组:CCL4组(A组)、CCL4/hrGFP-MSCs组(B组)和CCL4/MSCs-DiI组(C组)。B组和C组造模12 h肝内注射MSCs悬液。④分别于造模24 h、72 h、7天取肝组织以及肺组织观察移植hrGFP-MSCs、MSCs-DiI分布、迁移情况。造模后72 h,检测血清IL-10,TNF-α炎症因子水平,另取肝组织行PCNA免疫组化染色。结果①hrGFP-MSCs的hrGFP表达阳性率达99.21%,MSCs-DiI的CM-DiI标记率为99.98%。②CCK8检测示MSC-DiI、hrGFP慢病毒标记MSCs均不影响其增殖能力。③冰冻切片示CM-DiI标记MSCs可更好地示踪移植细胞,造模24 h、72 h及7天非注射部位肝组织和肺组织MSCs-DiI均可见散在的移植细胞团,而hrGFP-MSCs未见明确荧光阳性细胞。④MSCs治疗ALF大鼠模型下调了系统性炎症应答,造模72 h A组的TNF-α、IL-10水平大于B组及C组;PCNA示MSCs治疗促进了宿主肝细胞增殖。结论 CM-DiI标记MSCs能更好地示踪少量散在的移植细胞。异种移植MSCs可通过下调系统性炎症应答,促进肝细胞增殖,修复ALF大鼠肝组织。
- 赖丽莎陈俊伟王劲李丹李征然单鸿
- 关键词：间充质干细胞肝再生
- 慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白报告基因对间充质干细胞的标记被引量：10
- 2010年
- 目的 探讨慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记间充质干细胞（MSC）是否影响其细胞生物学特性,以及EGFP基因能否持久稳定表达.方法 以不同病毒感染复数（MOI）实行EGFP慢病毒对MSC的感染,通过流式细胞分析法（FACS）检测EGFP的阳性率,并在荧光显微镜下观察EGFP在MSC的表达情况;通过锥虫蓝染色、MTT比色法、Hoechst染色和FACS检测细胞活力、增殖、凋亡和周期;EGFP慢病毒感染MSC体外持续培养2、4、8、16周时通过FACS检测EGFP的阳性率和荧光强度,以评价EGFP基因在MSC表达的稳定性.结果 EGFP慢病毒以MOI=20感染MSC 96 h,EGFP阳性率达97.39%±0.68%;与对照MsC相比,EGFP慢病毒感染MSC时,对细胞活力、增殖、凋亡和周期均没有影响（P＞0.05）;EGFP-MSC在体外持续培养2,4、8、16周,EGFP阳性率分别为97.50%±0.54%、97.32%±0.51%、97.39%±0.11%、97.48%±0.13%,荧光强度（A值）分别为440 ±13、445±12、458±13、456±16,均能够保持稳定水平.结论 EGFP慢病毒能够高效标记MSC,并且不影响其生物学特性,EGFP基因在MSC能够持久稳定表达,可以用于下一步的细胞示踪研究.
- 李丹朱康顺周斌王劲颜荣华李征然孟晓春黄明声姜在波单鸿
- 关键词：干细胞慢病毒属增强型绿色荧光蛋白
- 远红荧光蛋白报告基因mKate2对肝癌细胞的标记及荧光成像被引量：5
- 2011年
- 目的 制备远红荧光蛋白报告基因mKate2慢病毒,用于标记人肝癌细胞株HepG2,并进行体外的细胞荧光成像,为肿瘤的活体荧光成像示踪提供基础.方法 以pmKate2-N质粒为模板,将mKate2基因克隆到慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DEST;pLenti6.3-mKate2表达质粒和包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,并测定慢病毒的活性滴度;mKate2慢病毒以病毒感染复数（MOI）=6感染HepG2 96 h后,通过荧光显微镜观察和流式细胞分析法（FACS）检测感染效率;收集2×106个mKate2-HepG2细胞,通过光学成像系统进行荧光成像,确定最佳成像参数.结果 测序结果显示,mKate2基因序列正确,无突变或缺失;mKate2慢病毒的活性滴度为1.6×106TU/ml;mKate2慢病毒感染HepG2 96 h后,荧光显微镜下观察到大量红色荧光蛋白的表达,FACS检测显示mKate2的阳性率为93.8%±0.4%;激发光（530±15）nm和发射光（710±28）am为对mKate2-HepG2细胞进行荧光成像的最佳参数.结论 慢病毒能够介导远红荧光蛋白报告基因mKate2对人肝癌细胞株HepG2的高效标记,并且mKate2标记的HepG2能够进行体外细胞荧光成像,可以用于下一步的活体肿瘤示踪研究.
- 李丹沈敏张波李征然庞鹏飞朱康顺王劲黄明声孟晓春单鸿
- 关键词：肝肿瘤
- 过表达E2F1保护神经元依赖其转录活性
- 2009年
- 目的探讨E2F1对小脑颗粒神经元死活的影响及机制。方法构建表达质粒pcDNA-E2F1(pE2F1)及突变体pcDNA-E2F1-m132(pm132),转染293细胞验证表达,转染小脑颗粒神经元用6×E2F-luciferase报道基因检测转录活性。转染神经元24 h或48 h后Hoechst 33258核染色,统计转染pE2FI及pm132神经元(GFP阳性细胞)的核固缩率(即凋亡率);或者转染48 h后进行25K、5K处理12hr,统计凋亡率。结果构建质粒表达E2F1及突变体E2F1-m132成功,E2F1具有转录活性而E2F1-m132没有;表达E2F1及E2F1-m132均未诱导神经元凋亡(P>0.05);表达E2F1抑制5K诱导的神经元凋亡(P<0.05),而E2F1-m132没有抑制效应。结论E2F1抑制神经元凋亡依赖其转录活性。
- 袁忠民李丹王进刚李明昌陆永建何伟文
- 关键词：E2F1转录活性小脑颗粒神经元凋亡
- 细胞高浓度磁性标记导致细胞外大量纳米颗粒聚集物的形成被引量：1
- 2009年
- 细胞移植在修复和替代受损器官、改善组织功能和基因治疗方面具有重要作用。活体细胞示踪是分子影像学的任务之一，能够实时监测移植细胞靶向迁移、迁移速度以及细胞在靶器官停留时间，有助于指导细胞移植技术在临床的合理应用。MRI具有组织和空间分辨率高、无放射损伤等优点，成为活体细胞示踪的重要研究手段。
- 李丹许杰华周斌朱康顺王劲孟晓春姜在波单鸿
- 关键词：细胞外细胞移植技术磁性细胞示踪
- 功能与分子影像学技术在肝脏疾病诊疗中的应用研究
- 单鸿梁长虹陈德基朱康顺李丹刘再毅王劲孟晓春庞鹏飞吴春周斌帅心涛姜在波黄明声李征然
- 肝脏疾病病种复杂，特别是乙型肝炎、肝硬化、肝癌，中国是高发区，严重危害中国人民的生命健康，乙肝相关性肝病的防治一直是国家疾病防治工作的重点。该项目围绕功能与分子影像学技术在肝脏疾病中的应用展开一系列研究，取得了多项创新性...
- 关键词：
- 关键词：功能成像分子影像学
- 大鼠骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记及MR成像被引量：8
- 2008年
- 目的描述超顺磁氧化铁(SPIO)颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)后对细胞的影响及MR成像特点,评价其标记效果。方法分离、纯化并培养大鼠BMSCs,使用多聚赖氨酸(PLL)对细胞进行SPIO(50μgFe/ml,48h)标记,采用普鲁士蓝染色、细胞内铁含量检测等评定SPIO标记BMSCs的效率;通过台盼蓝染色、二甲基亚砜比色法检测细胞活力和增殖情况,通过Hoechst染色观察细胞凋亡情况,评价SPIO是否影响BMSCs的生物学特性;并对标记的BMSCs进行MR成像(序列:T1SE、T2FSE及T2*GRE)。结果细胞标记率达100%,标记细胞铁含量明显高于未标记细胞;细胞活力、增殖、周期和凋亡检测显示标记细胞与未标记细胞间无统计学差异(P>0.05);MR成像显示标记细胞数目大于5×103个细胞时,3个序列图像均能够观察到信号变化,以T2*WI最为明显。结论大鼠BMSCs可以被SPIO(50μgFe/ml,48h)有效标记,且对细胞的生物学特性无明显影响;1.5TMR能够在体外观察到标记后的细胞。
- 周斌于春鹏李丹姜在波钱结胜朱康顺庞鹏飞单鸿
- 关键词：间充质干细胞超顺磁氧化铁磁共振成像
