曹蕾
- 作品数：31 被引量：64H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 人呼吸道合胞病毒SH蛋白混合多肽免疫原性初步研究
- 2024年
- 本研究旨在探讨人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)小疏水蛋白(Small hydrophobic protein,SH)T细胞表位肽的免疫原性和保护效果。通过设计并合成覆盖SH蛋白序列全长的10条多肽,利用HRSV感染小鼠的脾淋巴细胞进行IFN-γ-酶联免疫斑点(Enzyme-linked immunospot assay, ELISpot)的检测,筛选出5条能显著刺激IFN-γ产生的SH蛋白T细胞表位多肽。将其与CpG和磷酸铝(AL)佐剂配制成混合多肽疫苗,两次皮下给药的方式免疫C57BL/6J小鼠,评价其免疫原性和保护效果。结果显示,与佐剂对照组相比,SH蛋白混合多肽疫苗可以诱导免疫后的小鼠产生抗原特异性IgG抗体和Th1偏向的T细胞免疫应答,降低HRSV感染后肺病毒载量,并减轻肺脏病理损伤。研究结果表明,SH蛋白混合多肽通过免疫小鼠可以引起良好的免疫原性,并保护小鼠抵抗HRSV的感染。为进一步研究基于SH蛋白的HRSV多肽疫苗提供了科学依据。
- 郭宏宋洋李海时雨晴胡宏俏江洁郭晋源毛乃颖曹蕾张燕
- 关键词：人呼吸道合胞病毒多肽细胞免疫
- 2019年中国麻疹风疹实验室网络运转状况被引量：9
- 2021年
- 目的评价2019年中国麻疹风疹实验室网络(China Measles and Rubella Laboratory Network,CMRLN)运转状况。方法利用中国麻疹监测信息报告管理系统(Measles Surveillance System,MSS)和CMRLN实验室监测数据库,分析CMRLN运转指标和麻疹风疹病例实验室监测结果。结果2019年全国报告监测病例78787例,其中散发病例65507例,散发病例的血标本、病原学标本采集率分别为95.86%、50.16%,3d内送达网络实验室的比例分别为97.89%、84.13%。监测病例的麻疹、风疹病毒IgM检测阳性率分别为4.65%(3226/69436)、31.14%(21784/69963)。散发监测病例麻疹、风疹病毒核酸检测阳性率分别为3.28%(1090/33254)、31.31%(10367/33112)。全国报告麻疹、风疹暴发疫情分别为24起、177起,实验室确诊率分别为100%、99.44%。共分离到265株麻疹病毒,其中D8、A(疫苗相似株)、B3和H1基因型分别为176株、18株、51株和30株;分离到风疹病毒2822株,其中1E和2B基因型分别为1608株和1214株。国家、32个省级、27个地市级网络实验室均通过了麻疹和风疹血清盲样、核酸盲样和/或基因定型考核。结论2019年中国麻疹风疹实验室网络运转良好,为中国麻疹和风疹的消除提供了技术支撑。
- 宋金华郭晋源王慧玲朱贞毛乃颖崔爱利曹蕾许文波许文波
- 关键词：病毒学监测
- 腮腺炎病毒核蛋白原核表达及其血清学检测方法的建立被引量：2
- 2017年
- 目的可溶性表达具有良好抗原性的腮腺炎病毒核蛋白(nuclear protein,NP),并建立特异性的腮腺炎病毒IgG抗体血清学检测方法。方法提取腮腺炎病毒RNA,用RT-PCR法扩增NP基因全长,并连接至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-NP,鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,可溶性成分经饱和硫酸铵沉淀粗提后,再利用镍柱进行亲和层析纯化,获得高纯度的NP蛋白,并用Western blot方法进行鉴定。包被纯化后NP抗原建立间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)检测方法 (NP ELISA法),并检测了348份健康儿童血清中抗腮腺炎病毒IgG抗体水平,与维润腮腺炎病毒ELISA IgG抗体检测试剂盒(维润ELISA法)进行平行比较。结果本研究建立的NP ELISA法和维润ELISA法符合率为78.45%(273/348);与维润ELISA法比较灵敏性为72.58%(135/186),特异性为85.19%(138/162)。两种方法检测348份健康儿童血清腮腺炎病毒IgG抗体的阳性率分别为45.69%(159/348)和53.45%(186/348)。结论利用原核表达的方法成功制备出具有腮腺炎抗原特性的NP抗原,并建立了腮腺炎病毒IgG抗体ELISA检测方法,为腮腺炎病毒人群血清流行病学调查奠定了基础,但需进一步使用中和试验评估两种方法的敏感性和特异性。
- 陈红利曹蕾郉文月崔爱利祝双利毛乃颖许文波扈瑞平
- 关键词：腮腺炎病毒血清学间接ELISA检测方法WESTERNBLOT
- 肠道病毒71型病毒样颗粒的制备及其免疫原性的研究
- 肠道病毒71型(Enterovirus71, EV71)属小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Entero virus),是手足口病(Hand-foot-and-mouth Disease, HFM...
- 曹蕾
- 关键词：肠道病毒71型病毒样颗粒杆状病毒免疫原性
- 文献传递
- 狂犬病病毒N基因的杆状病毒表达及鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用分子克隆的方法,将CVS-11株狂犬病毒N基因片段克隆入杆状病毒穿梭载体Bacmid中,构建出含CVS-11 NP基因重组杆状病毒表达质粒Bacmid-N;脂质体介导Bacmid-N转染Sf9昆虫细胞获得表达CVS-11 NP的重组杆状病毒(AcMNPV-N)。用ELISA、FA、SDS-PAGE和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析,证实CVS-11 NP为胞内表达,且具有天然核蛋白良好的免疫反应性,为进一步研制高效、敏感的狂犬病病毒检测试剂和建立实验室检测方法奠定基础。
- 曹蕾唐青陶晓燕黄莹杜加亮张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病毒N基因杆状病毒
- 新型CpG-ODN佐剂增强灭活HAdV-55抗原在BALB/c小鼠体内的免疫应答
- 2022年
- 目的评价人工合成CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)作为佐剂对灭活人腺病毒55型(human adenovirus type 55,HAdV-55)抗原诱导BALB/c小鼠免疫应答的影响。方法HAdV-55 QS原型株经噬斑纯化构建疫苗候选株种子库,将疫苗候选株扩增产物经0.05%β-丙内酯灭活,纯化后制备成全病毒颗粒抗原。纯化HAdV-55抗原按低剂量组(0.2 mg/ml)和高剂量组(1 mg/ml)分别与CpG-ODN和氢氧化铝佐剂等体积混合,乳化后接种BALB/c小鼠,同时设PBS对照组,间隔21 d加强免疫1次。分别在初次免疫后21 d和35 d采集小鼠静脉血并分离血清,采集末次血清时分离小鼠脾脏淋巴细胞。通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和微量中和试验检测免疫后小鼠血清中HAdV-55特异性IgG抗体和中和抗体水平,酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay,ELISpot)检测小鼠分泌IL-4和IFN-γ细胞因子淋巴细胞水平。结果无论有无佐剂,随着免疫次数和接种剂量的增加,灭活HAdV-55抗原诱导BALB/c小鼠产生的病毒特异性IgG抗体显著升高;而中和抗体只有在加强免疫后才能达到可检测水平,中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)在1:11~1:23之间;使用不同佐剂对小鼠免疫应答有显著影响,低剂量抗原联合CpG-ODN和氢氧化铝混合佐剂可诱导小鼠产生较高的体液免疫和细胞免疫应答,其特异性IgG抗体和中和抗体水平分别是单独使用氢氧化铝佐剂组小鼠的2.2和1.8倍,分泌IFN-γ淋巴细胞数是其2.3倍。结论新型CpG-ODN佐剂免疫能显著提高灭活HAdV-55全病毒抗原在BALB/c小鼠体内的免疫原性,同时使细胞免疫应答向偏向Th1型。
- 冯意江洁刘莹马若群蔡建林曹蕾李海任虎朱贞崔爱利张燕许文波毛乃颖
- 关键词：CPG寡聚脱氧核苷酸
- 水痘带状疱疹病毒gE-Foldon融合蛋白的表达及免疫效果的分析
- 2024年
- 水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚体蛋白可以诱导更强的免疫应答,本研究应用中国仓鼠卵巢细胞CHO-S表达连接Foldon结构域的蛋白(gE-Foldon)、连接Fc片段的蛋白(gE-Fc)和gE蛋白。三种抗原(gE-Foldon、gE-Fc和gE)分别联合AlOH+CpG佐剂,比较在BALB/c小鼠中的免疫效果,同时,将商品化的Shingrix作为对照。SDS-PAGE和WB结果显示成功表达纯化三种抗原,非还原条件下可以观察到gE-Foldon以三聚体形式存在。与gE和gE-Fc抗原相比,gE-Foldon在小鼠中诱导产生的IgG抗体(40492)和中和抗体滴度(1190.5)最高(P<0.01),与Shingrix相当。此外gE-Foldon诱导小鼠产生的分泌IL-2、IL-4的淋巴细胞数量显著高于其他免疫组(P<0.0001,P<0.05)。综上所述,gE-Foldon蛋白联合AlOH+CpG佐剂可诱导较强的体液和细胞免疫应答,因此可以作为预防HZ的潜在候选疫苗。
- 李海鑫曹蕾郭晋源孙馨胡宏俏时雨晴张丽武婕慧谢智博张瑶张燕李海李栋
- 关键词：水痘带状疱疹病毒免疫效果
- 狂犬病毒中和抗体检测快速荧光灶抑制试验的建立被引量：10
- 2010年
- 目的建立检测狂犬病毒中和抗体的快速荧光灶抑制试验（RFFIT），检测狂犬病毒中和抗体滴度。方法以狂犬病标准毒株CVS-11为标准攻击毒，制备三代病毒，建立CVS—11病毒库；以国际标准抗狂犬病毒血清为对照血清，参考法国巴斯德研究所的RFFIT操作标准，建立适应于中国狂犬病毒中和抗体检测的RFFIT方法，并验证该方法的特异性、稳定性和重复性。结果成功建立了检测狂犬病毒中和抗体的RFFIT试验，验证该试验方法的特异性为100％；重复性试验表明，在本实验室和不同实验室的检测结果P值均〉0．5，具有很好的重复性。结论RFFIT方法的建立进一步完善了中国狂犬病的实验室检测技术，也将提升中国狂犬病的整体监测能力。
- 于鹏程吕新军申辛欣曹蕾郑新雄单虎唐青
- 关键词：狂犬病毒中和抗体滴度
- 抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定
- 2009年
- 目的制备抗狂犬病毒单克隆抗体，为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础。方法将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经细胞克隆和间接ELISA筛选，获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价，用G蛋白亲和层析柱进行纯化，间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性。结果细胞融合率达100％，经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株，其腹水效价分别为1×10^4，1×10^5，1×10^4和1×10^5；4株单抗均为IgG类型且特异性好。结论制备的单抗具有良好特异性和敏感性。
- 曹蕾李雄张守峰李六斤扈荣良唐青
- 关键词：狂犬病病毒抗体单克隆
- 一种包括水痘带状疱疹病毒gE的融合蛋白、其制备方法与应用
- 本发明涉及一种包括水痘带状疱疹病毒gE的融合蛋白、其制备方法与应用。本发明的融合蛋白包括水痘带状疱疹病毒gE蛋白和多聚体蛋白，所述多聚体蛋白包括Foldon，使得融合蛋白形成多聚体，从而提高蛋白质的稳定性。包含所述融合蛋...
- 李海张燕李海鑫曹蕾郭晋源
