曹翠平
- 作品数：37 被引量：121H指数：8
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅国际合作项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- BmNPV多角体蛋白片段引导外源蛋白固定入多角体的研究被引量：7
- 2010年
- 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)晚期产生大量多角体,其主要作用是包埋病毒粒子免受外部恶劣环境的影响,为次代感染提供保障。将BmNPV多角体基因分段克隆并与报告基因——增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合,利用BmNPVPolh+Bac-to-Bac表达系统构建重组病毒,使多角体蛋白与融合蛋白在BmN细胞内共表达。分析感染细胞和形成的多角体中融合蛋白的含量,研究不同的多角体蛋白片段引导EGFP固定入多角体的效果,结果表明构建的5种重组病毒都能大量表达融合蛋白,每种多角体蛋白片段都能引导EGFP固定入多角体内部,且外源融合蛋白在多角体总蛋白中占有较高的比例,其中,以多角体蛋白N末端100个氨基酸和完整多角体蛋白序列作为信号固定EGFP的效率最高。这一现象为解决活性蛋白长期保存提供了新思路,同时对于开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂和新型疫苗的转运载体也具有较好的参考价值。
- 曹翠平于少芳郭爱芹杨锐相兴伟陈琳吴小锋
- 关键词：家蚕核型多角体病毒多角体
- 利用基因工程技术在家蚕体内生产重组人乳铁蛋白的方法
- 本发明公开了一种利用基因工程技术在家蚕体内生产重组人乳铁蛋白的方法。利用申请人构建的AcNPV和BmNPV的杂交杆状病毒HyNPV作为载体，构建了含有人LF基因的重组病毒。利用家蚕作为重组病毒的宿主，表达、生产了重组人L...
- 吴小锋姚慧鹏曹翠平
- 文献传递
- 利用细菌转座子构建适于家蚕的Bac-to-Bac快速基因表达系统被引量：16
- 2006年
- 为了较好地解决家蚕杆状病毒基因表达系统(BmNPV expression system)在重组病毒构建和纯化过程中存在的重组率低、空斑分析技术繁琐、花费时间长等缺点,借鉴国外AcNPV Bac-to-Bac快速基因表达系统工作原理,对家蚕BmNPV基因组进行了改造。通过同源重组的方法,将含有单拷贝数细菌F复制子、插入有细菌转座子整合靶位点、编码LacZα肽的部分DNA片段和抗性选择标记基因的基因片段重组入家蚕BmNPV基因组,替换多角体蛋白基因,获得了家蚕BmNPV病毒穿梭载体BmBacm id;并利用供体质粒上的表达盒和细菌转座子以及细菌转座子的基因定位转移作用,在细菌体内实现外源目的基因向家蚕BmNPV基因组上的转移整合,快速完成重组BmN-PV病毒的构建。
- 吴小锋曹翠平鲁兴萌
- 关键词：家蚕杆状病毒
- 快速、高效家蚕杆状病毒基因表达系统的构建及应用研究
- 为了较好地解决家蚕杆状病毒基因表达系统在重组病毒构建和纯化过程中存在着重组率低、空斑分析技术繁琐、花费时间长的缺点，借鉴国外AcNPV Bac-to-Bac快速基因表达系统工作原理，利用细菌转座子的基因定位转移作用，对家...
- 曹翠平吴小锋鲁兴萌
- 关键词：畜牧学家蚕杆状病毒基因表达
- 文献传递
- 利用家蚕BmNPV多角体晶体固定外源蛋白质的研究
- 家蚕核型多角体病毒在感染晚期大量表达产生多角体蛋白,并形成结构致密的超大分子蛋白质晶体,其作用是有效保护内部包埋的病毒粒子,保证子代病毒的传播得以延续。本研究借鉴多角体包埋病毒粒子的原理,观察多角体是否也能够将外源蛋白质...
- 曹翠平何芳青郭爱芹相兴伟陈琳吴小锋
- 关键词：多角体
- 文献传递
- 应用脂质体介导技术改变重组杆状病毒感染方法被引量：1
- 2005年
- 昆虫 重组杆状病毒表达系统是有效的真核表达系统之一 ,广泛应用于重组蛋白的生产。目前常采用将重组病毒直接注射入家蚕体内的方法进行感染表达 ,在实际操作过程中很容易造成病毒对环境的污染 ,具有潜在的危险性。为了严格控制作业环境重组病毒的扩散和潜在污染 ,开发安全、有效的感染方法显得非常必要。本研究直接将病毒基因组DNA导入家蚕体内取得同样的感染效果 ,探讨了利用阳离子脂质体介导下的避免病毒污染和提高感染效果的感染方法。
- 吴小锋曹翠平崔为正
- 关键词：重组杆状病毒家蚕脂质体
- 家蚕作为宿主生产重组人bFGF的方法
- 本发明公开了一种家蚕作为宿主生产重组人bFGF的方法。利用构建的AcNPV和BmNPV的杂交杆状病毒HyNPV作为载体，构建了重组含有人bFGF基因的重组病毒。利用家蚕作为重组病毒的宿主，表达了具有生物活性的重组人bFG...
- 吴小锋曹翠平姚慧鹏
- 文献传递
- 蜜蜂肽Apidaecin突变体的外稳定性研究
- Apidaecin型抗菌肽指由昆虫细胞诱导表达的一类小的、富含脯氨酸(Pro)的、长度为18～20个氨基酸的抗菌肽.本研究通过对Apidaecin的分子改良,研究了N端氨基酸组成对其抗菌活性的影响,并在此基础上研究了改良...
- 胡胜兰李卫芬孙建栋林志伟曹翠平周绪霞
- 关键词：抗菌活性热稳定性
- 粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)培养细胞对家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)的吞噬过程观察被引量：3
- 2009年
- 观察微孢子虫在非天然宿主细胞系的生物行为过程,有助于探究微孢子虫的侵染特异性机制。选用鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,Tn)细胞系为材料,接种家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)孢子后观察其吞噬过程。结果发现:经氢氧化钾发芽预处理的Nb孢子虽然可以在Tn培养细胞液中发芽,但未见发芽孢子的孢原质进入Tn培养细胞;在接种Nb孢子浓度为2.0×105mL-1以上时,观察到孢子通过内吞作用进入了Tn培养细胞,但未见孢子的增殖;随着时间的延长和进入Tn培养细胞的Nb孢子的增加,可引起Tn培养细胞的超微结构变化,并导致细胞的裂解。以上结果说明,虽未见Nb以发芽形式感染Tn培养细胞,但Nb能够被吞噬进入Tn培养细胞并破坏其结构。
- 冯真珍曹翠平邱海洪吴小锋鲁兴萌
- 关键词：家蚕微孢子虫内吞作用超微结构裂解
- BmNPV和AcNPV扩大寄主域杂交重组病毒表达载体的构建和改进被引量：24
- 2004年
- 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographacalifornicanuclearpolyhedrosisvirus,简称AcNPV)和家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus,简称BmNPV)表达系统是目前最主要的两类昆虫杆状病毒表达系统.两者各具特点,前者寄主昆虫个体较小,但寄主范围广、适合较大规模的细胞悬浮培养生产体系;而后者虽然寄主专一,但以个体较大、易饲养的家蚕为寄主,具有表达量高、特别适合产业化水平开发的要求.为了利用AcNPV和BmNPV各自的优势,扩大昆虫杆状病毒的寄主范围,以BmNPV为基础,利用决定病毒寄主范围的DNA解旋酶基因及同源重组原理,构建了介于BmNPV和AcNPV间的杂交重组病毒(hybridbaculovirusofAcNPVandBmNPV,简称HyNPV).这样构建的杂交重组病毒具有AcNPV和BmNPV的双重优点,既能感染所有AcNPV的寄主,又可以在家蚕中表达.以人碱性成纤维细胞成长因子基因作为应用实例,克隆构建了这样的一种重组杂交病毒,可在Sf21,Tn-5,BmN培养细胞及家蚕个体中穿梭表达.为了减少表达后重组蛋白的降解,利用基因敲除法删除了杆状病毒本身的一种主要蛋白酶-半胱氨酸蛋白酶基因,提高了重组蛋白的稳定性和表达效率.
- 吴小锋曹翠平许雅香鲁兴萌
- 关键词：ACNPVBMNPV寄主范围昆虫杆状病毒表达系统苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒家蚕核型多角体病毒
